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HPLC-ELSD测定盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量
目的:建立盾叶薯蓣中伪原薯蓣皂苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD),Dikma C18色谱柱(4.6 mn×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(30:70),流速1.0 mL· min-1；蒸发光散射检测器参数:漂移管温度60℃,气压4.5 kPa.结果:伪原薯蓣皂苷在10 ～40 μg(r =0.9998)线性关系良好,平均回收率98.7％ (RSD 1.6％,n=6).结论:该方法简便、快速、灵敏、准确,可作为盾叶薯蓣的质量控制方法.
关键词： 盾叶薯蓣 高效液相色谱-蒸发光散射检测法 伪原薯蓣皂苷 -
盾叶薯蓣质量标准
目的:初步制定河南产区盾叶薯蓣的质量标准.方法:在对盾叶薯蓣进行性状、显微及薄层鉴别的基础上,参照2010年版《中国药典》(一部)中方法测定水分、总灰分、酸不溶性灰分及醇浸出物含量,并利用高效液相色谱法测定薯蓣皂苷元与伪原薯蓣皂苷的含量.结果:河南产区盾叶薯蓣水分应不超过7％;总灰分不高于8％;酸不溶性灰分不得高于2％;醇溶性浸出物含量不得低于16％;盾叶薯蓣药材薯蓣皂苷元含量不得低于1％;伪原薯蓣皂苷含量不得低于0.4％.结论:方法简便、准确,建立和完善了盾叶薯蓣的质量标准.
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大孔树脂纯化盾叶薯蓣总皂苷的工艺研究
目的:研究盾叶薯蓣总皂苷的大孔树脂分离纯化工艺,为盾叶薯蓣总皂苷的工业化生产提供参考.方法:采用AB-8树脂对盾叶薯蓣总皂苷进行吸附纯化,以总皂苷的收率、质量分数为考察指标综合评价.结果:优选纯化工艺为,上样液的浓度为0.5 g·mL-1,吸附流速2 BV·h-1,树脂径高比1:8;洗脱剂为80%乙醇,用量6 BV,洗脱流速3 BV·h-1.结论:盾叶薯蓣提取物通过AB-8树脂柱,水洗脱后以80%乙醇洗脱盾叶薯蓣总皂苷部位,可使总皂苷的收率和质量分数达到较满意效果.
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盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态研究
目的 研究盾叶薯蓣薯蓣皂苷元积累动态,确定适宜的采收期.方法 对不同采收期不同根茎中薯蓣皂苷元含量及含水量进行分析.结果 种根在6月上旬到10月中上旬之间,薯蓣皂苷元含量呈缓慢的上升趋势,10月下旬以后就急剧下降.新生根茎在6月上旬到8月中下旬之间薯蓣皂苷元含量呈上升趋势,然后逐步下降,到10月下旬同样明显下降;生长期内种根与新生根茎含水量变化趋势不同,而且薯蓣皂苷元含量与含水量无相关关系.结论 考虑到产量和薯蓣皂苷元含量两方面因素,10月中下旬采收盾叶薯蓣较为适宜.
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盾叶薯蓣离体培养体系的建立及薯蓣皂苷元含量分析
以盾叶薯蓣叶片为外植体,研究不同浓度激素组合对盾叶薯蓣愈伤组织、不定芽及再生植株的影响,并对不同材料诱导获得的再生植株中薯蓣皂苷元含量进行了分析.结果表明,诱导愈伤组织的适培养基为MS+BA2.0 mg·L-1+2:4D0.1mg·L-1;诱导不定芽及芽生长的培养基的适培养基为MS+BA0.1 mg·L-1(0.05mg·L-1)+病毒唑5 mg·L-1:诱导试管苗生根的适培养基为MS/2+IAA0.2mg·0-1+NAA0.2mg·L-1.相同外植体诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异不明显;不同盾叶薯蓣诱导的再生植株中薯蓣皂苷元含量差异明显.
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盾叶薯蓣航天诱变种子实生苗的生物学特性和有效成分测定
目的:筛选优质盾叶薯蓣种质资源,探讨卫星搭载对盾叶薯蓣变异效应.方法:利用返回式卫星搭载盾叶薯蓣种子进行空间诱变处理,对空间诱变后的2个居群盾叶薯蓣的种子活力、植株生长、染色体以及薯蓣皂苷元含量进行研究.结果:空间诱变后种子表现为萌发提前,但对种子发芽率影响不明显,出现非整倍体和染色体加倍现象,二年生根状茎鲜重和薯蓣皂苷元含量显著高于对照,但三年生根状茎增重变缓,同时薯蓣皂苷元含量均有不同程度下降.结论:卫星搭载对盾叶薯蓣的种子活力有一定的促进作用,同时改变了染色体结构,二年生根状茎鲜重和薯蓣皂苷元含量显著高于对照,提供了良好的选育材料,但三年生的根状茎鲜重增长变缓,薯蓣皂苷元有下降趋势,有待进一步研究.
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盾叶薯蓣成熟叶片植株再生的研究
目的:以成熟叶片为外植体,建立一套盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis的快速繁殖技术.方法:以大量元素减半的MS 培养基为基本培养基,通过研究BA,NAA和IBA对愈伤组织诱导、不定芽分化、不定芽增殖和生根的影响找出相应的佳激素组合.结果与结论:在含1.0～5.0 mg·L-1 BA和1.0～2.0 mg·L-1NAA的培养基上,80%以上的叶片可以在60 d内形成愈伤组织;愈伤组织转到含2.0～5.0 mg·L-1BA和0.2～0.5 mg·L-1 NAA的培养基上后,60%以上的愈伤组织可以在50 d内分化出不定芽;在含2.0 mg·L-1IBA的培养基上,100%的不定芽可在20 d内长出4～6条不定根.再生植株移栽后,生长健壮,成活率达80%以上.
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盾叶薯蓣药材甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的研究
建立不同产地盾叶薯蓣药材中甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的方法.采用Welchrom C18 (4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈(A)-水(B)作为流动相,梯度洗脱;柱温室温;体积流速1.0 mL·min-1;蒸发光散射检测器条件:漂移管温度90.0℃,载气(N2)流速2.8 L·min-1;进样体积10μL.通过检测10个批次盾叶薯蓣药材,首次建立了盾叶薯蓣甾体总皂苷成分HPLC-ELSD指纹图谱的共有模式,确定了25共有峰,并利用对照品对照法对其中的10个共有峰进行了成分指认.以共有模式对10批药材进行相似度评价,其相似度全部大于0.80.该方法准确、可靠、重复性好,为全面评价和控制盾叶薯蓣药材的质量提供了科学依据.
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盾叶薯蓣中甾体皂苷及其体外血小板活性研究
利用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱及制备液相等方法,从盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis 70％乙醇提取物中分离得到10个化合物,并通过核磁和质谱等波谱学方法分别鉴定它们的结构为胡芦巴皂苷ⅩⅢa(1)、小花盾叶薯蓣皂苷(2)、胡芦巴皂苷Ⅳa(3)、三角薯蓣皂苷(4)、protobioside(5)、lilioglyeoside K(6)、盾叶新苷(7)、三角叶皂苷(8)、薯蓣次苷A(9)、延龄草皂苷(10).其中,化合物1,3,5,6均为首次从该植物中分离得到.化合物1～10的体外血小板活性筛选表明,化合物7和8能够诱导血小板聚集,而化合物9具有显著抑制血小板聚集的作用.
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施肥水平和种植密度对薯蓣试管苗产量和薯蓣皂苷含量的影响
盾叶薯蓣Dioscorea zingiberensis C.H.Wrigh为薯蓣科植物,其根茎所含的皂苷是目前合成避孕药等多种甾体类激素的起始原料,国内外需求量很大.致使盾叶薯蓣野生资源长其遭受破坏性采挖,自然恢复能力激剧下降.近年来国内一些单位开展了人工引种栽培技术研究[1] ,但产量和含量不十分理想.为此,浙江省中药研究所开展优质薯蓣试管苗的选育,本文就优质试管苗的栽培技术开展了研究.
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盾叶薯蓣植物学研究进展与展望
对近年来我国在盾叶薯蓣生物特性、资源多样性、生态环境、良种选育、高效栽培技术以及组织和细胞培养等植物学方面的研究进展作一概述.针对盾叶薯蓣市场需求以及资源保护的实际,提出了建立基因库进行资源系统评价、采取先进技术对盾叶薯蓣资源进行研究与利用以及完善盾叶薯蓣标准的栽培技术体系等建议.
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盾叶薯蓣制剂杀灭湖北钉螺卵的实验研究
目的 评价盾叶薯蓣制剂杀钉螺卵的效果。 方法 采用药液浸泡法对不同发育阶段的螺卵细胞进行孵化阻滞实验，用点斜法和直线回归法作统 计分析。 结果 10 mg/L浓度浸泡48 h杀灭1 d卵龄螺卵的效果可达到80% ，其LD50为10.28 mg/L（斜率b=1.9767），杀灭20 d卵龄螺卵的效果<5%；测定的生 物效应与螺卵的卵龄呈负相关。 结论 盾叶薯蓣制剂对1 d和5 d卵龄螺 卵具有良好的杀灭效果，而对20 d卵龄螺卵的杀灭作用不明显。
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永州黄姜提取物抗肿瘤效果研究
黄姜学名盾叶薯蓣(Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright),为薯蓣科薯蓣属(Dioscrea.L)草质缠绕性藤本植物[1].黄姜提取物中主要活性成分为薯蓣皂苷(Diosgenin),又称薯蓣皂素.研究表明,薯蓣皂苷具有溶血、降血脂、抗菌、消炎、脱敏、修复病变组织、刺激肝素细胞生长及促进胆汁分泌等作用[2].近年来国内外学者对薯蓣皂苷作为甾体激素药物和甾体避孕药的主要中间体的研究较多,但对其抗肿瘤的效果研究甚少,特别是对湖南省黄姜主要产区永州出产的黄姜暂无系统研究.本文以永州的黄姜为原材料,以其提取物进行体外抗肿瘤的实验.
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盾叶薯蓣中新甾体皂苷的研究
为了研究盾叶薯蓣的水溶性化学成分,用溶剂提取、色谱分离等方法从盾叶薯蓣的水溶液中分离到一个新甾体皂苷,经1H NMR、13C NMR、135DEPT、HMQC、HMBC和TOCSY谱鉴定,该化合物的结构为:(25R)-26-O-(β-D-glucopyranosyl)-furost-5-en-3β,16,20,26-tetraol-22-seco-3-D-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside,命名为zingiberenin F(1).该化合物为一新甾体皂苷化合物,该骨架甾体皂苷在薯蓣科中为首次报道.
关键词： 盾叶薯蓣 甾体皂苷 zingibereninF -
盾叶薯蓣中水溶性甾体皂苷成分
为研究盾叶薯蓣的水溶性化学成分,用溶剂提取,色谱法分离,光谱法鉴定结构.从盾叶薯蓣的水溶液中分离到5个甾体皂苷(Ⅰ～Ⅴ),经分析1H NMR、13C NMR、135DEPT、HMQC、HMBC和TOCSY谱,鉴定了化合物的结构,其中4个为原甾体皂苷,1个为甾体皂苷.化合物Ⅴ为(25R)-26-O-(β-D-glucopyranosyl)-furost-5-en-3β,22ξ,26-triol-4β-acetoxyl-3-O-β-D-glucopyranosyl-(1→3)-β-D-glucopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside,为1新化合物,命名为zingiberenin G,化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ在盾叶薯蓣中为首次报道.
关键词： 盾叶薯蓣 甾体皂苷 zingiberenin G -
预发酵-双相联合酸水解法萃取薯蓣皂素的初步研究
目的 初步建立预发酵-双相联合酸水解法从黄姜药材中萃取薯蓣皂素的工艺.方法 采用正交实验设计法,以薯蓣皂素的得率为考察指标,分别优化预发酵和双相联合酸水解法的佳条件,并与两类传统提取方法进行比较.结果 将黄姜药材粉末在500 r· min-1搅拌下于30℃预发酵72 h后,加入浓硫酸和甲醇使它们的终浓度均为10％,再加入石油醚形成双相体系,并于120℃油浴中加热回流萃取4h,薯蓣皂素的平均得率为4.28％;而两类传统水解方法的得率则分别为3.01％和3.28％.结论 利用预发酵-双相联合酸水解法从黄姜药材中萃取薯蓣皂素简便易行,并且提取率明显高于其他方法.
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盾叶薯蓣良种选育及若干表型性状的研究
目的较系统地分析了盾叶薯蓣的叶面积、叶斑、性别、含水量和干率等表型性状与皂素含量和综合经济指数之间的关系.①皂素含量与叶面积、叶斑、干率均不相关;②综合经济指数与性别、叶斑和干率也不相关,但与叶面积存在显著相关性;③筛选出了几个表现优良的类型,其叶面积指标也符合该性状的整体相关性趋势.
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人工种子在盾叶薯蓣快速繁殖技术中的初步应用
目的:提高盾叶薯蓣试管苗的移栽成活率.方法:在组织培养的基础上,对盾叶薯蓣人工种子中人工种皮、人工胚乳制作、人工种子一次性成苗及移栽成活率等问题进行了初步研究.结果:人工种子快速繁殖的适条件为:从盾叶薯蓣愈伤组织表面切取2-3 mm小块茎,包埋在2.5%海藻酸钠中,滴入2%CaCl2中反应8-10 min,人工胚乳MS/2+IAA 0.4 mg/L直接播种在MS/2培养基上,一次性成苗率可达100%左右,移栽成活率高达85%.结论:以组织培养为基础的盾叶薯蓣人工种子快速繁殖技术具有一定的优越性.
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不同类型盾叶薯蓣同工酶的分析
目的 从分子生化水平上对田间农艺性状表现差异的6种类型盾叶薯蓣进行比较分析.方法 采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对6种类型盾叶薯蓣的叶片进行过氧化物酶(POD)同工酶测定.结果 POD同工酶在不同类型盾叶薯蓣间有所不同.根据酶带的分离结果,可将此6种类型大致划分为三大类,即有花纹大三角叶型(A)与无花纹大三角叶型(B)为一类;有花纹小三角间心形叶型(E)与无花纹心形叶型(D)、无花纹小三角间心形叶型(F)为一类;有花纹心形叶型(C)为单独一类.结论 根据酶带分布差异的分析结果,可以初步对形态表现不同的盾叶薯蓣加以归类.同工酶电泳分析方法可作为薯蓣选种研究的辅助工具.
关键词： 盾叶薯蓣 过氧化物酶(POD)同工酶 电泳 -
纤维素酶辅助提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的工艺优化研究
以薯蓣皂苷元的提取收率为考察指标,采用中心组合试验设计和响应面分析法对纤维素酶酶解提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的工艺条件进行优化,确定其佳工艺条件:采用盾叶薯蓣与水的料液比为1:10;酶解pH 值为5.75;酶解温度为54 ℃;酶解作用时间为2.5 h;纤维素酶用量为10.8 U/g 的工艺条件,使得薯蓣皂苷元的提取率达到1.5% 以上.结果 表明纤维素酶辅助提取法是提高薯蓣皂苷元的有效途径.
