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反左金丸水提物对人胃癌细胞SGC-7901凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响
目的:观察反左金丸水提物(water extracts of Retro.zuojin Pill,WERZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的抑制和凋亡诱导效果,及其对bel-2和bax表达的影响.方法:采用MTT比色法观察不同浓度的WERZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化以及Western blot方法检测WERZP xCX胃癌细胞SGC-7901中bel-2、bax蛋白表达的影响.结果:WERZP作用SGC-7901细胞24 h后,细胞存活率显著降低(P<0.05),且与时间、剂量呈依赖关系.流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析,0.1,0.5,1,5和10 mg·mL-1 WERZP作用SGC-7901细胞24 h,细胞凋亡率分别为(4.02±1.33),(36.10±O.23),(55.91±O.95),(56.50±1.55)和(60.27±3.58)%,其中(0.5-10)mg·mL-1组与对照组(2.66±1.33)%比较差异均有统计学意义(P<0.01).Hochest染色结果显示细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征.WERZP可降低SGC-7901细胞bcl-2基因表达和增加bax基因表达.结论:WERZP对SGC-7901生长有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,bcl-2基因表达降低和bax基因表达增加可能是其凋亡机制之一.
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左金丸及反左金丸对寒性功能性胃肠疾病模型大鼠脑及胃肠组织c-fos表达的影响
目的:比较研究左金丸与反左金的作用差异.方法:选用SD大鼠将厚朴、枳实、大黄以3:3:2比例制成1g/ml水煎剂,隔日灌胃1次,剂量为10g/kg体重,同时隔日喂饲造成寒性功能性胃肠疾病模型.进行肛门直肠内压力测定,比较组间差异并重点考察了左金丸和反左金丸对寒性功能性胃肠疾病模型脑及胃肠组织c-fos阳性表达的影响.结果:反左金丸能明显改善寒性功能性胃肠疾病模型动物的状态,降低直肠内压力变化值,且能显著降低胃寒证模型动物脑及胃肠组织中c-fos的阳性表达,而左金丸的作用不明；吴茱萸能表现出与反左金丸相似的药理作用,而单味黄连的作用不明显.结论:左金丸及反左金丸对寒性功能性胃肠疾病模型的作用差异与方剂药物组成的寒热属性有关.
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大鼠胃寒证模型造模方法探索
将大鼠分为空白组、模型组、反左金丸组后,模型组及反左金丸组以冰水灌胃3周,之后予冰水灌胃联合凉水泡浴2周,诱导大鼠胃寒模型形成,反左金丸组每日予反左金丸汤剂灌胃,持续5周.第6周,每组抽取12只大鼠麻醉处死后取胃,部分胃体固定后石蜡包埋并切片,进行组织学检查,部分胃组织进行酶联免疫吸附实验,观察IL-2的浓度.剩余存活大鼠用于观察模型持续时间.造模后,大鼠出现明显胃炎病变,大鼠体征和药物反证结果均符合胃寒模型指标,病理检测等结果证明以冰水灌胃结合凉水泡浴的方法可建立大鼠胃寒模型.
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左金丸及反左金丸对实验性大肠癌不同时期甲基转移酶表达的影响
目的:探讨左金丸及反左金丸对大肠癌发生、发展的干预作用, 及在大肠癌不同时期对甲基转移酶表达的影响.方法:在180只大鼠左肩胛骨侧皮下注射1, 2-二甲基酰肼(1, 2-DMH)25 mg/kg, 每周1次, 连续注射12 wk. 随机将大鼠分为3组:左金丸组、反左金丸组和对照组. 从第1次注射DMH的第2天开始, 左金丸组和反左金丸组每天以中药汤剂1.4 g/kg灌胃, 对照组灌服同等体积的生理盐水, 每日1次, 连续34 wk. 分别在第11、21、34周, 每组取部分大鼠脱颈处死, 通过病理学观察左金丸和反左金丸对大鼠大肠癌发生发展的干预作用, 实时荧光定量PCR法检测不同肿瘤发展时期Dnmt1、Dnmt3a及Dnmt3b mRNA的表达.结果:左金丸和反左金丸均能在肿瘤发生的早期显著抑制癌症的进程, 左金丸作用优于反左金丸, 但后期(34 wk), 二者的作用不明显.对照组和中药组Dnmt1、Dnmt3a表达没有明显变化. 对照组中Dnmt3b的表达明显高于中药组(4.784 vs 2.613, P<0.01), 且随癌变进程的深入, Dnmt3b表达量增高.结论:左金丸和反左金丸均可以有效阻碍早期大肠癌的发生和发展. Dnmt3b参与了组织恶变的过程, 其表达的调控可能是中药干预肿瘤进程的机制之一.
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反左金丸的构想和临床应用
左金丸以黄连六倍于吴茱萸组成,功能清泻肝火,笔者临床反用其意,重用吴茱萸,少佐黄连,以治多种胃肠疾病,颇见良效.以吴茱萸用量反重于黄连,姑为之名曰"反左金丸".
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左金丸与反左金丸诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的比较
目的 比较左金丸(Zuojin Pill,ZP)和反左金丸(Retro-zuojin Pill,RZP)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的活性抑制和凋亡诱导作用.方法 采用MTT比色法观ZP与RZP对SGC-7901的生长抑制情况;流式细胞仪PI单染亚二倍体峰分析细胞凋亡率;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化.结果 0.1mg/ml ZP与RZP分别作用SGC-7901细胞后,均能抑制细胞活性,且与时间呈依赖关系.0.1、0.5和1.0 mg/ml RZP作用SGC-7901细胞48 h,细胞凋亡率为(5.52±0.54)%、(6.91±2.31)%、(8.50±1.02)%,0.1、0.5和1.0 mg/ml的ZP对细胞的凋亡率分别为(11.60±1.24)%、(21.80±0.28)%、(36.40±1.59)%,与对照组(1.69±1.91)%比较差异均有统计学意义(P<0.01).Hochest染色细胞出现核固缩状和颗粒状荧光等典型的凋亡学特征.结论 左金丸和反左金丸对sGC-7901生长都有明显的抑制作用并可诱导SGC-7901的凋亡,同一浓度的ZP和RZP作用SGC-7901相同时间,ZP的作用效果更为明显.
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实验性大肠癌模型的建立及中药的干预作用
目的:用两种不同方法建立大肠癌实验动物模型,在肿瘤发生发展过程中,研究左金丸与反左金丸这两种寒热相反的药物对肿瘤进程的干预作用,寻找研究中药防治大肠癌恰当的实验动物模型.方法:人工条件下培养人大肠癌HT29细胞,建立BALB/C裸鼠荷瘤大肠癌模型;用不同浓度的DMH(1,2-二甲基酰肼)诱导Wistar大鼠大肠癌模型.在模型建立过程中,用左金丸和反左金丸进行干预,取瘤体组织进行组织病理学评价,观察中药对模型病程发展的干预作用.结果:用BALB/C裸鼠荷瘤大肠癌模型难以观察到肿瘤发生过程中药的干预作用;在高浓度的DMH(35mg/kg)诱导下也不能显著地观察到两对中药对癌症发生过程的干预作用;但在较低浓度下(25mg/kg),左金丸在肿瘤发生的早期具有良好的阻碍大肠恶变的作用,反左金丸的作用次之.结论:观察药物对肿瘤早期的干预作用,致癌剂的浓度不宜太大,DMH 25mg/kg是研究左金丸和反左金丸对早期大肠癌干预作用模型建立较适宜的致癌剂浓度.
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基于整合药理学平台的反左金丸镇痛作用的分子机制研究
借助整合药理学平台(TCMIP)探讨反左金丸镇痛作用的活性成分、作用靶点及作用机制.共预测得到41种活性成分,其中黄连中6种成分,分别为:黄柏内酯、木兰花碱、阿魏酸、柠檬苦素和2种糖苷;吴茱萸中35种成分,分别为:10种喹诺酮类、生物碱类、黄柏内酯、花色苷等成分.其作用机制涉及43个核心靶点及癌症、前列腺癌、非小细胞肺癌、慢性骨髓性白血病和血管内皮生长因子等30条通路.通过这些靶点和通路可预测反左金丸镇痛作用与炎症痛、癌痛相关.
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左金丸和反左金丸中药药性-证候相关性初步研究
目的:通过研究左金丸和反左金丸对胃热证或胃寒证模型动物的毒性、药效反应,初步探求"药性-证候"其相关性.方法:以辣椒煎液和无水乙醇造成胃热证模型,以冰水和氢氧化钠造成胃寒证模型,将动物随机分为模型组和给药组,通过给予大剂量药物,观察小鼠急性毒性死亡情况和对大鼠胃组织病理形态学的影响.结果:①小鼠急性毒性试验:左金丸两证型组小鼠死亡率均为100%,与模型组比较有极显著性差异(P<0.01).反左金丸胃热证组小鼠死亡率为70%,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),而且其死亡率高于反左金丸胃寒证组(P<0.01);②大鼠胃组织病理形态学:两模型组大鼠胃粘膜上皮有不同程度的出血、变性、水肿甚或凝固性坏死,给药后,左金丸对胃热证模型、反左金丸对胃寒证模型大鼠胃粘膜均有不同程序的保护作用(P<0.05),而且反左金丸对胃寒证模型大鼠胃粘摸的保护作用强于左金丸(P<0.05).结论:药物的毒性或药效均可能与药物的药性-证候之间存在一定的相关性,正确地运用中药的药性指导临床用药具有重要的意义.
