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积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所致的PC12细胞损伤模型及SAMP8小鼠脑内SOD,GSH-Px的影响
目的:研究积雪草乙酸乙酯提取物对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)所致的PC12细胞损伤模型及快速老化模型小鼠(SAMP8)脑内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响.方法:细胞以1 × 104个/mL密度接种,预防实验在接种24 h后同时给予含不同质量浓度的药物培养液和终浓度为10 μmol· L-1的Aβ25-35溶液,治疗实验在接种24 h后给予终浓度为10 μ.mol· L-1的A芦25-35溶液,24 h后给予含不同质量浓度的药物培养液,作用72 h后采用MTT法检测积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所造成的PC12细胞老年性痴呆(AD)损伤模型的预防和治疗作用;Hoechst 33258荧光显微镜染色法观察积雪草乙酸乙酯提取物作用Aβ25-35片段所致PC12细胞AD损伤模型的形态学变化,SAMP8)40只随机分为模型对照组、积雪草乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组(以生药量计为40,20,10 g·kg-1)和石杉碱甲组(0.386 mg·kg-1),8只/组,连续ig给药2个月后,ELISA法测定积雪草乙酸乙酯提取物对SAMP8大脑组织SOD和GSH-Px的影响.结果:Aβ25-35片段所致的PC12细胞AD模型的预防和治疗实验中,不同浓度的积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所致PC12细胞AD损伤有不同程度的保护作用;荧光显微镜观察到用药组的凋亡细胞数少于模型对照组与MTT的结果相符;ELISA结果显示除低剂量组外,其他各组的SAMP8大脑组织的SOD均高于模型对照组(P＜0.05或P＜0.01),中剂量组和石杉碱甲组SAMP8大脑组织的GSH-Px比模型对照组高(P＜0.05或P＜0.01).结论:积雪草乙酸乙酯提取物在体外对由Aβ25-35片段所致的PC12细胞损伤有较好的保护和治疗作用,并能通过提高SAMP8脑内SOD,GSH-Px水平起到抗氧化,清除体内自由基而延缓衰老的作用.
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β-淀粉样蛋白25-35致伤对PC12神经元突触相关蛋白表达的影响
背景：脑内β-淀粉样蛋白的聚集可诱导神经细胞凋亡，大量神经元及突触的缺失和功能的损害尚无有效的干预手段，提高突触可塑性为治疗早期阿尔茨海默病提供重要方向。目的：筛选佳的阿尔茨海默病模型，检测β-淀粉样蛋白25-35致伤PC12神经元的突触相关蛋白表达。方法：采用50μg/L神经生长因子诱导PC12细胞分化为神经元样细胞，以不同浓度β-淀粉样蛋白25-35致伤PC12神经元样细胞。应用CCK8法检测细胞生存率。神经颗粒素、神经调节素免疫荧光染色观察模型细胞的形态学变化，Western blot法检测神经颗粒素、CAMKⅡ、PSD-95蛋白表达水平。结果与结论：随着β-淀粉样蛋白25-35浓度增高和作用时间的延长，PC12神经元生存率呈剂量依赖性降低；可见突触长度变短、神经元萎缩、神经元彼此连接疏松；神经颗粒素、CAMK Ⅱ、PSD-95蛋白表达均下调。结果提示，10μmol/Lβ-淀粉样蛋白25-35、48 h是筛选早期PC12神经元阿尔茨海默病细胞模型的佳干预浓度和时间。
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大鼠野生型钾通道亚基Kir2.3基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达
目的:克隆大鼠野生型钾通道亚基基因Kir2.3并构建真核表达载体pcDNA3-flag/Kir2.3,观察其在大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞中的表达.方法:从成年大鼠纹状体中提取总RNA,用RT-PCR方法获得大鼠野生型Kir2.3基因的全长cDNA,经限制性内切酶双酶切后,克隆至真核表达载体pcDNA3-flag质粒中.Kir2.3基因测序结果与基因库登录序列比对,序列正确的重组质粒用脂质体转染PC12细胞,Western blot和荧光显微镜观察基因表达情况.结果:Kir2.3基因测序结果与基因库登录序列比对显示完全一致.Western blot证实pcDNA3-flag/Kir2.3转染PC12细胞24 h后有Kir2.3的过表达,且至少持续72 h.结论:成功构建了大鼠野生型Kir2.3基因的真核表达载体,获得了瞬时表达大鼠野生型Kir2.3基因的PC12细胞克隆,为进一步研究Kir2.3的生物学功能以及Kir2.3在帕金森病发病机制中的作用奠定了良好的基础.
