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附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及CNTF mRNA的影响
目的:观察附子理中汤对脾阳虚大鼠骨骼肌能荷及睫状神经营养因子(CNTF) mRNA表达的影响.方法:大鼠分为对照组、模型组和附子理中汤组,模型组施行肩胛骨间棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)切除术,饲以高脂饲料,19℃环境喂养3周.附子理中汤组在模型组基础上以附子理中汤按5 mL·kg-1体重ig,每日1次,连续ig4周.测定大鼠骨骼肌能荷值,RT-PCR法检测CNTF mRNA表达.结果:与对照组大鼠骨骼肌能荷(0.042 ±0.018)比较,模型组(0.032 ±0.014)与附子理中汤组(0.024 ±0.012)的能荷值均降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,附子理中汤组的能荷值降低明显(P ＜0.05).对照组CNTF mRNA相对表达量为(0.862±0.072),模型组CNTF mRNA相对表达量(0.426 ±0.056)较对照组降低(P＜0.01).与模型组比较,附子理中汤组CNTF mRNA相对表达量(0.838±0.068)升高(P＜0.01).结论:附子理中汤对CNTF mRNA表达有调节作用,通过上调CNTF mRNA表达,增加CNTF含量,发挥CNTF对骨骼肌营养作用和能量代谢调节作用.
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体外温热刺激对脐静脉血管内皮细胞能量物质的影响
目的:研究适宜温度刺激对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、ATP/ADP及能荷(EC)含量变化的影响,探讨灸法中温热作用的能量转换机制.方法:原代HUVECs分为正常组(37℃)和适宜温热刺激组(40℃),适宜温热刺激组置于40℃培养箱刺激30min,每天2次,正常组不做任何处理,各组于第1、2、3天刺激结束4-6h后用MTT比色法检测HUVECs生长活力,第3天用高效液相色谱法(HLPC)检测ATP、ADP、AMP含量、ATP/ADP比值及EC值.结果:两组HUVECS生长活力逐渐增强,与本组第1天和第2天比较差异均有统计学意义(P＜0.01);每天适宜温度刺激组细胞生长活力较正常组同期强,差异均有统计学意义(P＜0.01).第3天,适宜温热刺激与正常组比较HUVECs内ATP、ADP、AMP含量显著升高(P＜0.05,P＜0.01),ATP/ADP比值、EC值均显著升高(P＜0.05).结论:体外适宜温热刺激后能够提高HUVECs的生长活力,提高HUVECs代谢的能量物质,从而为灸法的温热作用提供了理论依据.
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入肝门静脉动脉化对肝部分切除大鼠肝细胞能量代谢的影响
目的 在大鼠肝部分切除基础上建立入肝门静脉动脉化加门腔分流术的动物模型,研究大鼠术后早期肝脏细胞能量代谢的变化.方法 90只Sprague-Dawley大鼠分为3组:肝切除组+门静脉动脉化组、单纯肝切除组及单纯门静脉动脉化组,每组30只.观察术前及术后5 min吲哚靛青绿15 min储留率(indocyanine green retention rate at 15 rain,ICGR15)、术后5 min及2 h动脉血酮体比率(arterial blood ketone body ratio,AKBR)及肝组织能荷(energy charge,EC)的变化情况.结果 肝部分切除或单纯门静脉动脉化手术均导致术后大鼠ICGR15明显升高(P<0.01),单纯门静脉动脉化大鼠肝脏吲哚靛青绿15 min储留率显著低于肝部分切除大鼠(P<0.01).肝切除附加门静脉动脉化后,大鼠术后ICGR15明显低于单纯肝部分切除组(P<0.01).肝部分切除或单纯行门静脉动脉化手术均导致术后大鼠AKBR及EC明显降低(P<0.01),单纯门静脉动脉化组大鼠术后2 h开始出现回升,而肝部分切除大鼠仍持续下降.肝部分切除附加门静脉动脉化组AKBR及EC术后均明显高于单纯肝部分切除组(P<0.01).结论 肝部分切除或门静脉阻断的手术操作均明显降低肝脏细胞能量代谢水平,入肝门静脉动脉化能有效促进肝部分切除术后大鼠残肝细胞能量代谢水平的恢复.
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疲劳时大鼠智力的变化及中药的调节作用
通过对慢性疲劳大鼠学习记忆情况的测定,结合对大鼠脑组织能荷的测定,研究疲劳后记忆的改变,并探讨中药元气精华抗疲劳和改善记忆的作用及药效学机制.结果:中药治疗组学习成绩提高比模型对照组和空白对照照组有明显提高,而与人参皂甙组无统计学差异,说明中药能改善大脑疲劳状态,提高学习记忆能力,效果与人参皂甙组接近.中药治疗组学习中出错次数比模型对照组和人参皂甙组明显减少,说明中药制剂元气精华能改善大鼠记忆巩固程度,且效果优于人参皂甙.同时,模型对照组的能荷值明显低于安静对照组的能荷值,说明大鼠经过一定量的负荷运动后,其脑组织中AMP氧化磷酸化减少,细胞内高能磷酸化合物分解增加,ATP含量减少,脑能量耗竭,提示大鼠处于疲劳状态.中药治疗组脑能荷值比模型对照组有明显提高,而与人参皂甙组无统计学差异,说明中药制剂元气精华能降低脑代谢率,使脑能量代谢状态得以改善,效果与人参皂甙组接近.研究结果表明:大强度训练会影响大脑能量代谢,使智力降低;而中药制剂元气精华可以改善大脑能量代谢,提高智力.
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针刺对脑梗死鼠脑心组织及血液ATP、ADP、AMP及能荷的影响
[目的]从能量代谢角度探讨脑梗死对心脏的影响及针刺的干预效应.[方法]以一侧大脑中动脉阻断大鼠(MCAo)为脑梗死实验模型,采用放免分析法检测、4个时相大鼠脑心组织及血液中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量并计算能荷水平.[结果]针刺组与模型组比较,大鼠心脑组织及血液中ATP、ADP、能荷显著上升,AMP显著下降(P＜0.05或P＜0.01),接近正常组.[结论]脑梗死发生后不仅脑组织能量代谢障碍,而且心肌组织能量代谢也明显障碍,针刺对脑梗死导致的脑心组织及血液能量代谢障碍具有明显的改善作用.
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重组人生长激素对肝脏缺血再灌注损伤中的能量代谢变化
目的:探讨在肝脏缺血再灌注损伤中,应用rhGH(重组人生长激素)后,对肝细胞能量代谢的影响.方法:(1)用Pringle's法建立80只Sprague Dawley(SD)大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,实验组40只,对照组40只,另10只作空白对照.实验组皮下注射rhGH针剂0.2 U·100 g-1·d-1共7 d,对照组分别给予等量的生理盐水.(2)分别于术后第1天、第7天、第14天、第28天取肝组织用高效液相色谱法检测ATP、ADP、AMP,并计算EC(能荷).结果:rhGH组和对照组不同时点的EC水平的组间同期比较示:在1 d、28 d无显著差异(P＞0.05),7 d、14 d有显著差异(P＜0.05);组内14 d与28 d比较,无显著差异(P＞0.05),其余各时点均有显著差异(P＜0.05).结论:rhGH能改善肝脏缺血再灌注损伤时肝细胞能量代谢状态.
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海洋真菌SD116在产物合成中的辅因子谱分析
目的 通过对海洋真菌Aurantiochytrium sp.SD116发酵过程中9种辅因子的定性定量分析,阐述胞内辅因子平衡及能荷水平与其生长、油脂积累及二十二碳六烯酸(DHA)合成等表型的内在联系.方法 对发酵过程进行间断点采样,淬灭,采用超高效液相色谱-串联质谱技术及同位素稀释质谱分析策略进行辅因子的定性定量分析.结果 在细胞快速分裂生长时,细胞内的NADH/NAD+、NADPH/NADP-的比率及能荷水平较低,细胞停止分裂快速积累油脂及DHA时,还原力保持平衡但能荷水平处于高位.而细胞生长及油脂积累均停滞时,胞内各种辅因子出现剧烈的动荡,辅因子的总量呈先升后降直至衰亡趋势.结论 菌体的辅因子浓度及能荷水平与菌体的生长、油脂及DHA的积累及衰亡密切相关,高能荷水平是胞内油脂积累的必要条件,而胞内辅因子循环和氧化-还原态势的失衡则与细胞产物合成停滞及衰亡呈正相关关系.
关键词： 辅因子 能荷 油脂合成 二十二碳六烯酸 超高效液相色谱质谱联用 -
内毒素血症对大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响及黄芪注射液的干预作用
[目的]观察内毒素血症(Endotoxemia,ETM)对大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响及黄芪注射液的干预作用.[方法]将40只大鼠随机分为正常对照组及内毒素(LPS)注射后6、12 h组和黄芪处理6、12 h组.取肝组织分离线粒体,测定其琥珀酸脱氢酶(SDH)及细胞色素氧化酶(CCO)活性,同时行高压液相色谱检测线粒体内腺苷酸能荷(EC)水平.[结果]在注射LPS 6h后,线粒体SDH、CCO活性降低,EC值减少;12h后,线粒体SDH、CCO活性明显降低,EC值进一步减少,与对应的LPS组比较,经黄芪处理后,肝细胞线粒体SDH、CCO活性及EC值均升高.[结论]ETM可造成肝细胞线粒体能量储备的下降,黄芪注射液能提升其肝细胞线粒体氧化磷酸化水平,增加线粒体腺苷酸EC值,促进肝细胞线粒体的能量合成和代谢,具有保护肝细胞的作用.
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解毒化瘀方对内毒素血症大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响
目的:观察解毒化瘀方对内毒素血症(endotoxemia,ETM)大鼠肝细胞线粒体能量代谢的影响.方法:将56只大鼠随机分为正常对照组及脂多糖(LPS)注射后6、12、24 小时组和解毒化瘀方6、12、24 小时组.取肝组织分离线粒体,测定其Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性.同时行高压液相色谱检测线粒体内腺苷酸含量及能荷(EC)水平.结果:在注射LPS 6小时后,线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性降低,ATP、ADP含量及EC值减少;24小时后,线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性明显降低,ATP、ADP、AMP含量及EC值明显减少.与对应的LPS组比较,经解毒化瘀方处理后,肝细胞线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性增加,ATP、ADP、AMP含量及EC值均升高.结论:解毒化瘀方能增加ETM大鼠肝线粒体Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,提高线粒体氧化磷酸化水平,增加线粒体腺苷酸EC值,改善能量代谢,具有保护肝细胞的作用.
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蜕皮甾酮对TNF所致脐静脉内皮细胞损伤的保护作用的初步观察
目的观察肿瘤坏死因子(TNF)对体外培养的脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌功能及能量代谢的影响,及应用植物药物成分蜕皮甾酮(EDS)进行防治的效果.方法①MTT法检测TNF对培养内皮细胞琥珀酸脱氢酶活性的影响.②内皮细胞培养上清液ET、NO、MDA、LDH、SOD测定.③采用反相高效液相色谱分析法测定内皮细胞ATP、ADP、AMP及能荷.结果 TNF与内皮细胞孵育后低浓度、早期内皮细胞被激活,随着TNF浓度增高MTT明显降低;TNF刺激后培养上清液ET、MDA、LDH、NO明显升高,EDS治疗后降低.TNF低浓度刺激VEC培养上清液SOD明显降低,EDS治疗后SOD升高;TNF同一浓度刺激后,随刺激时间延长HUVEC能量负荷降低,与正常比较12 h后明显降低,而用EDS治疗后各时相点能量负荷明显增加.结论 TNF在无血清状态下刺激后,培养HUVECs分泌功能、能量代谢出现紊乱,EDS治疗后上述紊乱得到一定程度的改善;提示TNF对体外培养的HUVECs可以直接损伤,EDS有一定的抗损伤作用.
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低压缺氧大鼠脑线粒体内腺苷酸含量及能荷的变化
目的对比研究急性和慢性缺氧暴露后脑线粒体内的能量储备和ATP生成能力,探讨急性缺氧致脑功能障碍和慢性缺氧适应的能量代谢机制.方法 Wistar大鼠分为对照组、急性缺氧组和慢性缺氧组.后两组分别于模拟海拔4 000 m 高原低压舱内连续缺氧暴露3 d和30 d,每天23.5 h.缺氧组和对照组动物分别在模拟高原条件和平原条件断头处死,取脑组织分离线粒体.高压液相色谱分离并测量线粒体内腺苷酸库(pool)含量,并计算能荷;以琥珀酸为氧化底物检测线粒体的ATP生成速率.结果急性和慢性低压缺氧暴露后大鼠脑线粒体内的总腺苷酸库变化不明显(P>0.05),但慢性缺氧组高于急性组(P<0.05);线粒体内的ATP含量在急性和慢性缺氧时分别降低65.1%和33.5%,慢性缺氧可部分恢复,但仍低于对照组(P<0.05);ATP在总腺苷酸库中所占比例在急、慢性缺氧时分别是对照的41.5%和42.5%;急、慢性缺氧对线粒体内能荷均无显著影响(P>0.05);急性缺氧可使以琥珀酸为底物的线粒体ATP生成速率降低41.8%,而慢性缺氧则与对照组无显著差异(P>0.05).结论急性缺氧暴露可显著降低脑线粒体内的能量储备,而线粒体ATP生成能力降低是其原因之一;慢性缺氧暴露则可使其能量储备部分恢复,提示"线粒体适应"在机体对缺氧适应中的作用.
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不同缺氧条件下大鼠肝细胞能量代谢变化
目的观察缺氧对大鼠肝细胞能量代谢的影响.方法利用体外培养的肝细胞缺氧模型,模拟创伤后的缺血、缺氧环境,以正常生长的大鼠肝细胞为对照,采用生物化学的方法,分析氧的不同浓度及缺氧时间下肝细胞内ATP、ADP、AMP以及能荷的变化.结果与正常对照组相比,缺氧肝细胞内ATP含量下降,4h达到低水平,以后逐渐回升,其中O2浓度为15%组16 h与正常对照无显著性差异.ADP和AMP的变化与 ATP相反,与正常对照相比,缺氧后水平增高,4 h达到高峰,以后逐渐下降,16 h仍未能完全恢复正常水平.能荷及ATP/ADP比值的变化与AMP相似.结论缺氧后肝细胞能量代谢明显受到影响,呈现出双相变化的趋势,ATP和能荷水平先降低,后增高.
