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复方脑康胶囊对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响
目的:观察复方脑康胶囊水提液对D-半乳糖老化小鼠海马神经元凋亡级联反应的影响.方法:将小鼠随机分为5组:正常对照组(E组),D-半乳糖模型组(D组),复方脑康胶囊高、中、低剂量组(A,B,C组).每日sc D-半乳糖60 mg.kg-1造模,给模型小鼠复方脑康胶囊水提液(0.65,0.35,0.15g?kg-1 )ig,连续3个月.用免疫组织化学染色方法和Western blotting检测海马神经元凋亡诱导因子(AIF),Bax,细胞色素C(Cyt C)及Bcl-2的表达.结果:Western blotting结果显示,模型组Cyt c,Bax,Bcl-2表达量较正常对照组减少,而药物组表达量与正常对照组相似.免疫组织化学染色结果显示,模型小鼠海马神经元AIF,Bax,Cyt C的阳性细胞数分别比正常对照小鼠增加,而Bcl-2则比正常小鼠减少.与模型组相比,复方脑康胶囊水提液高、中、低3种不同剂量模型小鼠海马神经元AIF阳性细胞数从(24.7±6.1)个降低为(8.9±1.82),(12.6±4.51),(13.2±5.71)个；Bax阳性细胞数从(47.8±9.7)个降低为(11.2±3.2),(29.4±8.2),(31.1±6.3)个,Cyt C阳性细胞数从(36.7±9.1)个降低为(12.1±3.2),(20.2±6.8),(25.2±7.1)个,Bcl-2阳性细胞数从(10.4±6.4)个增加为(59.5±7.4)个,(48.6±9.2)个,(32.3±7.0)个.结论:复方脑康胶囊对D-半乳糖老化小鼠的海马神经元凋亡级联反应具有一定的改善作用.
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D-半乳糖老化小鼠神经元信号转导通路的改变以及APP63-73的作用
目的观察D-半乳糖老化小鼠海马神经元神经生长因子(nerve growth factor, NGF)信号转导通路的改变以及APP63-73的作用. 方法采用免疫组化染色法检测D-半乳糖老化小鼠模型海马神经元NGF、PI3′K、Akt和CREB的表达水平,并观察APP63-73的保护作用.结果 D-半乳糖老化小鼠海马CA1区信号转导通路中相关蛋白表达水平明显减少,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01),APP63-73组上述各种蛋白的表达结果与对照组相近. 结论 D-半乳糖老化小鼠海马神经元存在信号转导通路障碍,APP63-73可使之恢复正常水平并发挥神经营养和保护作用,提示其在治疗神经元退行性变中可能有应用前景.
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李氏5号方对D-半乳糖老化小鼠海马神经元NGF信号转导的影响
通过检测D-半乳糖老化小鼠海马神经元NGF(神经生长因子)、PI3K(磷脂酰肌醇酯3激酶)、Akt/PKB(蛋白激酶B)、CREB(cAMP应答元件结合蛋白)的表达,观察李氏5号方对海马神经元NGF信号转导的影响.将小鼠随机分为5组:正常对照组(C组)、D-半乳糖模型组(D组)、李氏5号方大剂量药物治疗组(L组)、中剂量药物治疗组(M组)、小剂量药物治疗组(S组).D、L、M、S 4组每日皮下注射半乳糖65 mg/kg.L、M、S 3个治疗组分别灌胃李氏5号方0.6、0.3、0.15 g/kg,连续3个月.免疫组织化学染色方法和Western blotting检测海马神经元NGF、PI3K、Akt/PKB、CREB的表达.结果:4种抗体C组深染的阳性细胞在海马广泛分布,细胞计数与D组有显著性差异;D组海马阳性反应细胞着色浅,少有突起,细胞数目少.3个剂量李氏5号方治疗组染色结果与C组相似,与半乳糖老化组比较均有显著性差异,李氏5号方水提取液能明显上调NGF的PI3K通路中的一些信号转导蛋白,提示:李氏5号方水提取液中可能含有能激活PI3K的活性物质,为深入研究李氏5号方的有效成分打下基础.
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李氏5号方对D-半乳糖老化小鼠行为学、海马神经元超微结构和Nurr1表达的影响
D-半乳糖老化小鼠是研究脑老化的常用模型,表现在皮层神经元转录水平降低,RNA及蛋白质含量下降,神经细胞数目减少,小鼠水迷宫成绩下降等,与老龄动物的表现一致[1,2].我们以往的研究发现D-半乳糖老化小鼠表现学习、记忆功能减退,海马神经元存在明显的超微结构改变,NGF和NT-3的免疫反应阳性细胞数减少,并出现神经元凋亡.但这些改变可被APP(β-Amyloid Precursor Protein)17肽明显改善[2～5],提示D-半乳糖老化小鼠的脑神经元损伤可被药物干预.现本文报告李氏5号方水提液(广东高明脑病医疗医药研究院提供,粉剂,由龟甲、枸杞子、石菖蒲、核桃仁、当归、远志、红花等组成)对D-半乳糖老化小鼠的学习记忆功能、海马神经元超微结构和Nurr1的影响.
