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薯蓣皂苷元对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞极化状态的影响
目的 探讨薯蓣皂苷元(diosgenin)对脂多糖(LPS)诱导下BV2小胶质细胞极化状态的影响.方法 将BV2细胞根据不同的处理方法分为对照组,LPS组,LPS+薯蓣皂苷元组.使用MTT法检测BV2细胞的增殖能力,使用ELISA法检测BV2细胞表达肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素10(IL-10)水平,使用实时荧光定量(RT-PCR)法检测BV2细胞IL-10,诱导型一氧化氮合酶(iNOS)以及精氨酸酶(Arg-1)mRNA水平.结果 使用不同浓度的薯蓣皂苷元处理BV2细胞后,各浓度的薯蓣皂苷元对BV2细胞的增殖影响无统计学意义(P>0.05),而加入LPS刺激后,发现25 μg/ml薯蓣皂苷元为适浓度,且其佳作用时间点为24 h(P<0.05);薯蓣皂苷元可以抑制在LPS诱导下BV2细胞TNF-α水平以及iNOS表达,同时提高IL-10水平以及Arg-1表达(P<0.05).结论薯蓣皂苷元可以通过抑制M1型小胶质细胞极化以及促进M2型小胶质细胞极化进而发挥抗炎的作用.
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改良三甲散含药脑脊液对脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症模型相关因子及蛋白表达的影响
目的 探讨改良三甲散含药脑脊液对脂多糖(LPS)所诱导的BV2小胶质细胞炎性反应的影响.方法 将BV2细胞分为空白对照组,模型组,10.0%、5.0%、2.5%改良三甲散组,石杉碱甲组.细胞培养贴壁后,改良三甲散各组及石杉碱甲组分别加入10.0%、5.0%、2.5%、10.0%含药脑脊液,37 ℃孵育2 h后除空白对照组均加入LPS (终浓度为1 mg/L),继续孵育24 h后收集培养上清,提取蛋白样品.应用硝酸还原酶法检测各组细胞培养上清中一氧化氮(NO)的含量;ELISA法检测各组细胞培养上清中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;Western blot法检测各组细胞c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达.结果 模型组培养上清中NO、iNOS、IL-1β、TNF-α的含量明显升高,p-JNK表达上调;10%、5%改良三甲散组培养上清中NO、iNOS、IL-1β、TNF-α的含量明显下降,p-JNK表达下调.结论 改良三甲散含药脑脊液对LPS所致的BV2小胶质细胞的炎性反应具有调节作用,其作用机制可能与调控p-JNK的表达、减少炎性介质的产生有关.
关键词： 改良三甲散 BV2小胶质细胞 脂多糖 c-Jun氨基末端激酶 兔 -
姜黄素对BV2小胶质细胞Notch信号通路的调控作用
目的 观察姜黄素对BV2小胶质细胞Notch信号通路的影响.方法 小胶质细胞以10μg/ml的姜黄素预处理后再给予100 ng/ml的LPS或0.5μg/ml可溶性Jagged 1/Fc嵌合蛋白刺激,部分小胶质细胞给予脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)及Jagged 1/Fc嵌合蛋白单独诱导,以Western blot检测Notch1、Hes1蛋白的表达,以实时荧光定量聚合酶链反应检测Notch1、Jagged-1/Fc、Hes1、Hes5 mRNA的表达.结果 LPS诱导组Notch1、Jagged-1、Hes1、Hes5均较生理对照组显著增加(P＜0.05),Jagged-1/Fc诱导组Notch1、Jagged 1/Fc、Hes1均较生理对照组显著增加(P＜0.05),而姜黄素予预处组Notch1、Hes1的蛋白测定及Notch1、Hes1、Hes5 mRNA表达均较单纯LPS诱导组及Jagged 1/Fc诱导组降低(P＜0.05).结论 LPS及Jagged 1/Fc诱导组能够激活小胶质细胞Notch信号通路,而姜黄素能够抑制Notch信号通路的活性.
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柚皮苷对gp120所致BV2小胶质细胞损伤的保护作用
目的 探讨P2X7受体在HIV-1包膜糖蛋白gp120所致BV2小胶质细胞损伤中的作用,以及柚皮苷通过作用于P2X7受体对gp120所致BV2小胶质细胞损伤产生的保护作用.方法 通过gp120处理BV2小胶质细胞建立细胞损伤模型,并通过MTS比色法检测细胞损伤程度和柚皮苷是否对损伤细胞具有保护作用;应用逆转录PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western b1ot)检测P2X7受体的表达变化.结果 gp120处理24h后,与对照组比较,gp120组细胞存活率显著下降(P ＜0.01);gp120+柚皮苷组的细胞存活率与gp120组比较有所上升(P＜0.01),但与gp120+BBG组比较差异无统计学意义(P＞0.05);RT-PCR及Western blot的检测结果显示,gp120组小胶质细胞的P2X7受体mRNA及蛋白均比对照组明显升高(P＜0.01),而gp120+柚皮苷组与gp120组比较有所下降(P＜0.01).结论 P2X7受体参与gp120所致BV2小胶质细胞损伤,柚皮苷可能通过抑制P2X7受体的表达上调对gp120所致细胞损伤产生保护作用.
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脑源性神经营养因子在ATP活化BV2小胶质细胞中的作用
目的：探讨脑源性神经营养因子（BDNF）在腺苷三磷酸（ATP）激活BV2小胶质细胞过程中的作用。方法以不同浓度ATP孵育BV2小胶质细胞后，采用Western blot法定量检测细胞中CD11b、BDNF表达水平，ELISA测定上清液中肿瘤坏死因子α（TNF‐α）的分泌水平。再将BV2细胞用不同浓度BDNF清除剂原肌球蛋白相关激酶B（TrkB）／Fc预处理后给予ATP孵育，检测细胞中CD11b、BDNF表达水平的变化及上清液中 TNF‐α的分泌水平。后加入外源性重组BDNF ，检测细胞内CD11b表达和上清液中TNF‐α的水平变化。结果 ATP孵育BV2细胞后，细胞内 CD11b、BDNF及上清液中 TNF‐α水平在一定范围内呈剂量时间依赖性增加。加入TrkB／Fc后，BV2细胞中 CD11b、BDNF及上清液中TNF‐α表达水平在一定范围内呈剂量和时间依赖性降低。加入外源性BDNF后，细胞内CD11b及上清液中TNF‐α水平又出现增加。结论 BV2小胶质细胞活化后细胞内BDNF增多，外源性补充BDNF可激活小胶质细胞，BDNF在小胶质细胞的活化过程中可能发挥了重要作用。
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柿叶黄酮提取物抑制BV2小胶质细胞活化在体外氧糖剥夺/再灌注损伤模型中发挥抗炎作用的研究
目的 在体外氧糖剥夺/再灌注(oxygen glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤模型中,研究柿叶黄酮提取物(flavonoid components extract from Diopyros Kaki,FLDK)对BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放的抑制效应,并初步探讨其可能机制.方法 将BV2小胶质细胞随机分为3组:正常对照组(control组)、氧糖剥夺/再灌注组(OGD/R组)、柿叶黄酮提取物治疗组(OGD/R+FLDK组),以氧糖剥夺3h和再灌注24 h的方法建立OGD/R损伤模型.采用CCK-8法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测白介素-1α(IL-1α)、白介素-1β (IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子分泌,RT-PCR法检测Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)、骨髓样分化因子88 (myeloid differentiationfactor 88,MyD88)、核转录因子-κB (nuclear transcription factor-κB,NF-κB)的mRNA水平,Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白表达水平及核转录因子-κB抑制蛋白(inhibitor of NF-κB,IκB)磷酸化水平.结果 CCK-8及LDH法结果显示,FLDK可显著减轻OGD/R损伤介导的BV2细胞活性下降及细胞损伤率增加(P＜0.05);ELISA、RT-PCR及Western blot法结果显示,FLDK可显著降低OGD/R损伤介导的BV2小胶质细胞炎症因子释放,TLR4、MyD88和NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平,IκB蛋白的磷酸化水平及NF-κB p65核易位(P＜0.05).结论 在体外OGD/R损伤模型中,柿叶黄酮提取物抑制BV2小胶质细胞活化及炎症因子释放发挥抗炎作用的机制可能是通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活实现的.
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雌激素膜受体激动剂G1对脂多糖诱导小胶质细胞iNOS表达影响
目的 探讨G蛋白耦联雌激素受体(GPER)激动剂G1对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 BV2小胶质细胞常规培养,LPS诱导炎症反应,用GPER激动剂G1或阻断剂G15与LPS共培养.MTT法检测BV2细胞活力,实时反转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)检测iNOS基因的表达.结果 LPS(0.1和1.0μg)对BV2细胞活力没有明显的影响(P＞0.05).0.1及1.0 μg的LPS均可明显增加iNOS的基因表达,1.0 μg LPS组作用为明显(F=19.10,q=4.018～8.732,P＜0.05).与LPS组相比,G1预给药组能够明显抑制LPS对iNOS基因的诱导作用(F=35.79,q=7.724,P＜0.01).与G1预给药组相比,此作用可以被GPER阻断剂G15所阻断(F=35.79,q=5.434,P＜0.05).结论 GPER的激动剂G1具有抑制LPS对BV2小胶质细胞的激活作用,此为中枢神经系统炎症相关疾病的治疗提供了新的靶点.
