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偏钒酸钠降低糖尿病小鼠血糖及其对葡萄糖磷酸化的影响
目的通过研究偏钒酸钠对小鼠的血糖及葡萄糖磷酸化关键酶的影响,探讨偏钒酸钠降血糖作用的可能机制.方法将糖尿病小鼠和正常对照小鼠,随机分为口服偏钒酸钠组和非口服偏钒酸钠组,分别饮用200 mg/L偏钒酸钠溶液和80 mmol/L的NaGl对照溶液,持续5周.在实验第0至5周的每周末,对各组小鼠的血糖、肝脏葡萄糖激酶、肌肉己糖激酶以及胰岛素水平进行检测.结果在给予偏钒酸钠前,糖尿病小鼠血糖水平明显高于正常对照组,服药1周后,血糖值即由(18.77±1.28)mmol/L下降至(8.94±0.94)mmol/L,接近正常水平;其肝脏葡萄糖激酶和肌肉己糖激酶的活性则显著升高,分别由(1.29±0.64)mIU@min-1@mg-1蛋白质和(1.93±0.50)mIU@min-1@mg-1蛋白质上升至(15.36±1.57)mIU@min-1@mg-1蛋白质和(18.62±1.71)mIU@min-1@mg-1蛋白质(P＜0.01);而在服药前后糖尿病小鼠的胰岛素水平差异均无显著性.上述作用在小鼠服药期间始终存在.相关分析显示,糖尿病小鼠的血糖水平与葡萄糖激酶和己糖激酶的活性呈显著的负相关性.结论偏钒酸钠的降血糖作用并不依赖于体内胰岛素水平的增加;改善糖尿病小鼠体内不良的葡萄糖磷酸化过程,可能是偏钒酸钠降血糖作用的机制之一.
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原钒酸钠对成骨细胞株MC 3T3-E1增殖的影响及其与一氧化氮浓度的关系
目的探讨原钒酸钠对成骨细胞株MC3T3-E1增殖的影响及其是否与一氧化氮(NO)浓度有关. 方法以噻唑蓝(MTT)比色法检测MC3T3-E1细胞增殖及增殖抑制情况,用酶还原法测定细胞培养物上清液中NO的浓度. 结果在低浓度(2.5～10.0 μmol/L)原钒酸钠作用24 h后, MC3T3-E1细胞MTT测定值(2.5 μmol/L时为0.3380±0.0045、5.0 μmol/L时为0.3400±0.0141、10.0 μmol/L时为0.3840±0.0313)较对照组(0.2540±0.0167)明显增加(P均＜0.001);高浓度(≥50.0 μmol/L)时则明显下降,50 μmol/L时为0.2160±0.0182,100 μmol/L时为0.1920±0.0179(P均＜0.01);且作用24、48和120 h细胞增殖趋势一致.细胞培养上清液中的NO浓度与MTT测定值成正比.2.5 μmol/L原钒酸钠时NO浓度为(17.208±0.701)μmol/L,50 μmol/L时为(7.386±1.039)μmol/L,空白对照组为(15.341±0.041)μmol/L.且低浓度原钒酸钠能减弱NO合酶(NOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)的细胞增殖抑制作用. 结论低浓度原钒酸钠能促进MC3T3-E1细胞的增殖,高浓度则抑制增殖.NO可能参与调节原钒酸钠对MC3T3-E1增殖的作用.
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正钒酸钠对椎间盘软骨细胞功能的抑制作用
目的 探讨正钒酸钠(Sodium Orthovanadate,Na3Vo4)对椎间盘软骨终板软骨细胞的作用.方法 使用酶消化法培养大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞,以10、20及30μmol/L不同浓度Na3Vo4干预第三代软骨细胞.培养7d后,用MTT法检测软骨细胞增殖率,RT-PCR检测Ⅱ型、Ⅸ型胶原和蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA的表达,定量RT-PCR检测PTPN1、IGFR mRNA的表达.结果 与对照组比较:(1)10μmol/L Na3V4组上述各项检测指标变化不明显,差异无统计学意义;(2)20及30 μmol/L Na3Vo4组软骨细胞增殖率下降(q=31.51,81.42,P＜0.01)、Aggrecan(q=52.09,102.55,P＜0.01)和PTPN1(q=7.67,4.74,P＜0.01)mRNA表达降低;(3)30μmol/LNa3Vo4组Ⅱ型胶原(q=51.46,P＜0.01)、Ⅸ型胶原(q=8.62,P＜0.01)mRNA表达降低;(4)各浓度Na3Vo4组IGFR mRNA均增加(q=13.96,7.67,4.74,P＜0.01).结论 20及30μmol/L Na3Vo4可抑制椎间盘软骨细胞增殖,降低Ⅱ、Ⅸ型胶原、Aggrecan以及PTPN1的mRNA表达,说明Na3Vo4对软骨细胞中PTPs的活性有抑制作用,从而降低了软骨细胞生物学功能.但Na3Vo4对IGFRmRNA无抑制作用,并可能有一定的促表达作用.
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脑缺血再灌注后NMDA受体亚基2B酪氨酸磷酸化的调节机制
目的：研究沙土鼠脑缺血再灌注后海马突触体N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基2B(NR2B)酪氨酸磷酸化调节的机制．方法：沙土鼠双侧颈总动脉结扎形成前脑缺血模型；NR2B酪氨酸磷酸化通过免疫沉淀和免疫印渍分析．结果：脑缺血15分钟导致蛋白酪氨酸磷酸化水平明显下降；再灌注引起包括180 kDa蛋白在内的多种蛋白酪氨酸磷酸化水平快速(再灌注15分钟)、持续(至少48小时)升高．免疫沉淀和免疫印渍证实，180 kDa条带为NR2B．缺血15分钟，再灌注6小时，NR2B酪氨酸磷酸化明显高于对照组，为对照组的1．8倍，而NR2B蛋白表达量则无变化．缺血前腹腔注射非竞争性NR拮抗剂氯胺酮或L-型电压门控钙通道(L-type VGCC)阻滞药硝苯地平，对NR2B酪氨酸磷酸化水平升高有明显的拮抗作用，而对NR2B蛋白表达量均无影响．在此条件下，非NMDA受体拮抗剂6，7-二硝基喹恶啉土卫四(DNQX)对NR2B酪氨酸磷酸化水平无影响．酪氨酸蛋白磷酸酶(PTP)抑制剂钒酸钠使脑缺血再灌注诱导的NR2B酪氨酸磷酸化进一步增加，而酪氨酸蛋白激酶(PTK)抑制剂金雀异黄素则使其减少．Src能与NR2B免疫共沉淀．结论：沙土鼠脑缺血再灌注NR2B的酪氨酸磷酸化的升高是通过NR和L-type VGCC介导的；PTK和PTP参与脑缺血再灌注NR2B酪氨酸磷酸化的调节，与NR2B以物理方式结合的Src可能在这种调节中起着重要作用．
