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EV71 3C蛋白酶对肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)的切割作用研究
目的 探讨肠道病毒71型(EV71)编码的3C蛋白酶对于肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)的切割作用.方法 采用Western blot的方法检测EV71感染对于TRAF3蛋白表达的影响.体外转染TRAF3和3C蛋白,通过Western blot检测3C对于TRAF3蛋白的影响.通过构建3C突变体,检测其蛋白酶活性对于切割的影响.通过免疫共沉淀检测3C对于TRAF3和TRIF相互作用 的影响.结果 EV71感染细胞后可引起TRAF3蛋白的减少,其3C蛋白酶可以引起TRAF3的切割,蛋白酶活性位点突变后则不引起TRAF3的切割.位点突变试验显示TRAF3的Q242位突变后则不能被3C切割,且3C可以减少TRAF3与TRIF的结合.结论 EV71 3C蛋白酶可通过切割TRAF3机制在天然免疫逃逸中发挥作用.
关键词： 肠道病毒71型 肿瘤坏死因子受体相关因子3 3C蛋白酶 天然免疫 -
肿瘤坏死因子受体相关因子3在乳腺癌中的表达及与侵袭性的关系
目的:探讨乳腺癌组织及细胞系中肿瘤坏死因子受体相关因子3(tumor necrosis factor-associated factor 3,TRAF3) 表达的变化情况,并讨论其与乳腺癌侵袭性的关系.方法:应用免疫组化方法检测TRAF3在14例正常乳腺组织和70例乳腺癌组织中的表达.应用Western bloting方法检测TRAF3在乳腺癌细胞系MCF-7(低侵袭)和MDA-MB-231(高侵袭)中的表达.结果:TRAF3在非浸润性导管癌中的阳性表达率显著高于浸润性导管癌(P＜0.01).TRAF3蛋白在乳腺癌低侵袭细胞系中的表达量高于高侵袭细胞系(P＜0.05).结论:TRAF3在乳腺癌进展过程中可能起到抑制其侵袭的作用.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子3 乳腺肿瘤 侵袭性 -
TRAF3抑制IL-17引起的软骨破坏作用
目的 研究肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TRAF3)对白介素-17(IL-17)刺激的软骨细胞中丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)和核因子κB (NF-κB)信号通路及其下游产物表达的影响;观察TRAF3转基因小鼠IL-17刺激的关节软骨破坏情况,探讨TRAF3的软骨保护作用.方法 Western blotting检测正常软骨细胞和TRAF3基因过表达软骨细胞中IL-17刺激的MAPK和NF-κB信号通路的变化,Real-Time PCR检测正常软骨细胞和TRAF3基因过表达软骨细胞中IL-17刺激的下游炎症因子IL-6、基质金属蛋白酶-13 (MMP13)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)和ADAMTS-5 mRNA的表达变化,组织化学技术观察注射IL-17野生型小鼠与TRAF3转基因小鼠关节软骨变化的差异.结果 TRAF3的过表达能显著抑制经IL-17刺激软骨细胞中MAPK和NF-κB信号通路,使下游炎症因子IL-6、MMP13、ADAMTS-4和ADAMTS-5 mRNA的表达显著下调;TRAF3转基因小鼠IL-17引起的关节软骨降解显著较野生型小鼠减轻.结论 作为IL-17信号通路的负调控抑制剂,TRAF3可能成为抑制关节炎软骨破坏的新靶点.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子3 白介素-17 炎症 软骨保护 -
TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义
目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义.方法 采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系.Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异.结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%).TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关.TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系.结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移.
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子3 原发性肝细胞癌 侵袭转移 -
过表达pellino-1在Kupffer细胞内毒素耐受时对TRAF3泛素化及MAPK信号通路的调控
[目的]探讨上调pellino-1在Kupffer细胞(KC)内毒素耐受时对肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)泛素化、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及下游细胞因子分泌情况的影响.[方法]分离、培养C57BL/6小鼠KC,随机分为2组:①空载对照组:转染空载质粒48 h后,先给予小剂量LPS(10 ng/mL)刺激24 h,再给予大剂量LPS(300 ng/mL)刺激.②过表达组:过表达pellino-1慢病毒转染48 h后,先给予小剂量LPS(10 ng/mL)刺激24 h,再给予大剂量LPS(300 ng/mL)刺激.两组分别于处理后0、5、10、30、60 min收获细胞,蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测pellino-1、K48泛素化(K48 ubiquitin,K48-Ub)、TRAF3、JNK、p-JNK、p38、p-p38蛋白水平表达变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α及IL-10的分泌情况.[结果]与空载对照组相比,过表达组pellino-1蛋白表达量在各个时间点均明显升高;K48-Ub水平明显升高;TRAF3蛋白表达量明显降低;JNK、p38蛋白表达量没有明显变化,但p-JNK及p-p38蛋白表达量显著升高;过表达组细胞上清中IL-1β及TNF-α的量明显升高(P<0.05),而IL-10的量则明显降低(P<0.05).[结论]过表达pellino-1可促进TRAF3蛋白K-48泛素化降解,导致TRAF3蛋白表达量降低,激活下游的MAPK信号,从而抑制内毒素耐受的形成.
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ROCK1,TRAF3mRNA在耐药性癫痫患者海马组织中的表达及意义
目的:观察耐药性癫痫患者脑组织中与锌离子相关的RhoA蛋白1(Rho-associated,coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)和肿瘤坏死因子受体相关因子3(TNF receptor-associated factor 3,TRAF3)mRNA的表达,探讨其在耐药性癫痫发病中的作用.方法:收集耐药性癫痫患者术后的海马脑组织,首先用基因芯片进行差异基因表达的筛选,然后用RT-PCR从基因水平上进行验证,并与正常对照组进行比较.结果:基因芯片检测中发现与锌离子连接相关的基因ROCK1和TRAF3在耐药性癫痫患者中表达上调.目的基因ROCK1和TRAF3 mRNA在耐药性患者脑组织中的表达明显增加(P＜0.05),变化趋势与芯片扫描结果一致.结论:与锌离子相关的基因ROCK1和TRAF3可能参与了耐药性癫痫的形成,并在耐药性癫痫的发病机制中起着一定的作用.
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肿瘤坏死因子受体相关因子在内毒素耐受中的作用及其相关机制
目前在哺前乳动物中已经发现7个肿瘤坏死因子受体相关因子（ TNF receptor associated factors，TRAFs）家族成员，它们是肿瘤坏死因子受体和TOLL样受体信号通路中重要的组成部分。单独激活或者联合其他蛋白激活后，TRAFs参与一些细胞因子的产生和释放及细胞存活，控制着许多生理过程。而肿瘤坏死因子受体相关因子3（ TRAF3）是TRAFs家族中功能为多样化的成员之一，它能够正性调节I型干扰素的产生，负性调节丝裂原激活的蛋白激酶（ mitogen-activated protein kinase，MAPK）和非经典NF-κB信号的激活，通过这些途径，参与炎症反应过程，也可能参与了内毒素耐受形成的过程。本文就TRAF3在内毒素耐受中的作用及其相关机制的研究进展作一综述。
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子3 蛋白激酶 内毒素耐受 -
肿瘤坏死因子受体相关因子3（TRAF3）真核表达质粒的鉴定
目的：鉴定肿瘤坏死因子受体相关因子3(tumor necrosis factor receptor-as ociated factor 3,TRAF3)基因的真核表达质粒。方法提取无内毒素真核表达质粒pLEX-TRAF3,利用lipofectamine 2000将其转染进结肠癌细胞SW620,实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹技术检测该基因的表达情况。结果真核表达质粒pLEX-TRAF3可以显著地提高TRAF3基因在mRNA和蛋白水平的表达量。结论 TRAF3基因的真核表达质粒构建成功,可以用于后续结肠癌发生发展的分子生物学研究。
关键词： 肿瘤坏死因子受体相关因子3 结肠癌 真核表达质粒
