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mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与结直肠腺癌关系的研究
磷脂肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路正逐渐成为科研工作者关注的焦点,它调控肿瘤细胞生长增殖、分化代谢、自吞噬等过程,促进肿瘤的形成.国内外的许多研究中已经证实mTOR与胃癌、肝细胞癌、胰腺癌、结肠癌等消化系统恶性肿瘤的相关性.4EBP1(eukaryotic translation initi-ation factor 4E binding protein 1真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1)和S6蛋白激酶1(protein S6 kinase 1,S6K1)是mTOR重要的下游分子,他们调节蛋白质的翻译,在结直肠腺癌的形成过程中起到重要作用,并与预后相关,可作为较为理想的分子靶点和预后指标.
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mTOR及其下游分子4EBP1和S6K1与乳腺癌关系的研究
mTOR信号通路已被确定为几种癌症的致癌因素.癌症生物学的一个主要领域是基因组生物标记的发展它可以测量pi3k-akt-mtor途径的活动水平.PI3K-Akt-mTOR信号通路包含许多信号蛋白,包括Ras,PTEN,PIP,PI3K,AKTand mTOR.作为部分信号通路功能的串联功能是是由生长因子结合在细胞膜上的受体酪氨酸激酶引起的.重要的是PI3K-Akt-mTOR信号通路在癌症细胞的生长,增殖,以及生存有重要的作用,在众多癌症中被过度表达包括乳腺癌,卵巢癌和胰腺癌等.因此开发PI3K抑制剂不仅可以消灭肿瘤的生长,也可以协同其它的标记物治疗和化疗治疗相关的癌症.由于这条信号通路重要,已经有了几种相关基因组的方法来评估细胞系中PI3K-Akt-mTOR信号通路的活性以及原发性患者肿瘤的活动情况.
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mTOR、S6K1在双胍类降糖药物改善2型糖尿病中的作用研究
目的 探讨mTOR、S6K1在双胍类降糖药物改善2型糖尿病中的作用和意义.方法 选取本院2015年3月至2017年3月收治的100例糖尿病患者,随机分为观察一组和观察二组,观察一组患者给予常规胰岛素治疗,观察二组患者在此基础上接受二甲双胍治疗3个月.选取同期健康体检者50例为对照组.治疗前后分别检测受试者血清中mTOR、S6K1信号通路的水平变化.结果 与对照组相比,观察一组和观察二组患者体内mTOR和S6K1水平显著升高,IL-6、TNF-α和IL-Iβ水平显著上升,差异具有统计学意义(P＜0.05).观察一组和观察二组患者与治疗前相比,治疗后mTOR、S6K1、IL-6、TNF-α和IL-Iβ水平显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).与观察一组患者治疗后相比,观察二组患者二甲双胍治疗后,血清mTOR、S6K1、IL-6、TNF-α和IL-Iβ水平显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).患者血液mTOR和S6K1与其使用二甲双胍治疗的疗效存在显著的负相关关系,Person相关系数为负值,P＜0.01.结论 双胍类降糖药物可以明显改善糖尿病患者的临床症状;mTOR、S6K1信号通路在糖尿病患者的疾病发展和临床治疗中发挥重要的作用.
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S6K1 shRNA基因重组腺病毒的构建及对基因沉默效果的研究
目的 构建S6K1 shRNA基因重组腺病毒(S6K1Ax)并在细胞及小鼠肝脏验证对S6K1基因的沉默效果.方法 设计3种S6K1 shRNA序列,通过在pcPUR质粒与pcDNA3.1质粒、cosmid质粒之间的拼接将S6K1 shRNA转染进腺病毒,筛选沉默效果佳的S6K1Ax并在293细胞扩增纯化得到高效价的S6K1Ax.感染来源于小鼠的肝脏、肌肉、脂肪细胞系,在Western blot水平评价其对S6K1蛋白表达的抑制效果.将S6K1Ax注射进C57BL/6J小鼠尾静脉,6 d后处死小鼠取肝脏,逆转录-聚合酶链反应和Western blot观察小鼠肝脏S6K1在mRNA和蛋白水平的表达.检测注射S6K1Ax前后小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)变化.结果 Western blot证实制备的S6K1 Ax可抑制来源于小鼠的肝脏、肌肉、脂肪3种细胞系和小鼠C57BL/6J肝脏S6K1的蛋白表达.小鼠肝脏S6K1 mRNA结果显示:对照组为1.39±0.21,实验组为0.63±0.09,t=6.132,P<0.01,差异有统计学意义.S6K1Ax注射小鼠,ALT水平注射前为(15.15±4.43)U/L,注射后为(17.32±4.22)U/L,t=1.451,P>0.05,差异没有统计学意义.结论 构建的S6K1Ax可将来源于小鼠的细胞系及C57BL/6J小鼠肝脏S6K1基因沉默,为研究S6K1的基因功能提供了适合的实验工具.
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S6K1和4EBP-1蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义
目的 探讨S6K1和4EBP-1蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义.方法 使用免疫印迹法(Western-blot)检测S6K1和4EBP-1蛋白在80例膀胱尿路上皮癌及20例正常膀胱黏膜中的表达.结果 膀胱尿路上皮癌中S6K1蛋白表达率(64%)高于正常膀胱黏膜(10%),4EBP-1蛋白表达率(71%)高于正常膀胱黏膜(15%).S6K1和4EBP-1蛋白在低分级膀胱癌中的表达率显著高于高分级膀胱癌中的表达率.复发肿瘤的S6K1和4EBP-1蛋白表达率高于初发肿瘤.而S6K1和4EBP-1蛋白表达率在不同性别患者、不同肿瘤分期和是否吸烟患者中差异无统计学意义.结论 膀胱尿路上皮癌中S6K1和4EBP-1蛋白与膀胱癌的分级和复发相关,可能成为肿瘤诊断治疗的新靶点.
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胰岛素抵抗小鼠中S6K1的表达
目的 观察小鼠高脂饮食后S6K1 mRNA和蛋白表达变化,探讨S6K1在胰岛素抵抗发生中的作用.方法 40只C57BL/6小鼠随机分为正常饮食组(N)和高脂饮食组(H),8周后建立胰岛素抵抗模型.用ELISA法检测空腹血清中胰岛素值和小鼠OGGT曲线变化;采用Northern blot法检测骨骼肌中S6K1mNRA的表达;采用Western blot法检测骨骼肌中S6K1蛋白的表达.结果 小鼠经过14周高脂饮食后;体重和血清中空腹胰岛素水平也都显著升高;且OGTT曲线显示糖耐量明显受损,已建立成胰岛素抵抗模型,发现S6K1蛋白和mRNA表达也显著升高.结论 S6K1在高脂饮食诱导胰岛素抵抗中发挥重要作用.
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非小细胞肺癌不同分期与4EBP1、S6K1的表达
目的:探讨非小细胞肺癌不同分期4EBP1、S6K1的表达,为非小细胞肺癌的临床治疗和预后判断寻求一条新的途径.方法:收集本院2003～2009年术前均未进行放疗和化疗的非小细胞肺癌不同分期手术患者标本;全部标本经体积分数为10%的甲醛水溶液固定,石蜡包埋,组织切片;采用免疫组织化学技术检测4EBP1、S6K1蛋白的表达.结果:随着非小细胞肺癌不同分期由0期到Ⅳ期的变化,4EBP1蛋白表达减弱而S6K1蛋白表达增强,其差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论:在非小细胞肺癌不同分期4EBP1、S6K1的表达不同.
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雷帕霉素对前列腺癌细胞株22RV1增殖及S6K1活性的影响
目的:探讨雷帕霉素对前列腺癌细胞22RV1增殖及对S6 Kinase 1 (S6K1)活性的影响.方法:用不同浓度(0、50、100、200、400 nmol/L)雷帕霉素作用于体外培养的前列腺癌细胞22RV1,MTT法检测细胞生长抑制率；应用液闪激酶活性测定法检测不同浓度雷帕霉素对S6K1活性的影响.结果:雷帕霉素能显著抑制22RV1细胞的生长,呈现明显的量-效关系,随着雷帕霉素剂量的增加,细胞生长抑制率逐渐升高,400 nmol/L的雷帕霉素对22RV1细胞的抑制率高(P＜0.01)；同时雷帕霉素还能使S6K1蛋白活性下降,随剂量增高降低越明显,400 nmol/L的雷帕霉素使S6K1蛋白活性下降明显(P＜0.01).结论:雷帕霉素可通过调控mammal Target of rapamycin (mTOR)下游蛋白S6K1表达来有效地抑制前列腺癌细胞22RV1的增殖.
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二甲双胍对人食管癌KYSF450细胞系增殖和凋亡的影响
目的:探讨二甲双胍对人食管癌KYSE450细胞系增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法:体外常规培养KYSE450细胞,采用MTT法检测不同浓度二甲双胍对KYSE450细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,RT-PCR、Western blot检测药物作用后KYSE450细胞中4EBP1和S6K1 mRNA及蛋白表达的变化.结果:5、10、20和40 mmol/L二甲双胍对KYSE450细胞的增殖均有抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(F剂量=470.513,F时间=743.696,F交互=22.359,P均＜0.001).5、10和20 mmol/L二甲双胍作用48 h后KYSE450细胞凋亡率显著增加,且呈浓度依赖性(F=282.076,P＜0.001).与对照组相比,5、10和20 mmol/L二甲双胍组KYSE450细胞中4EBP1、S6K1 mRNA和蛋白的表达量均明显下降(mRNA:F4EBP1=86.727,FS6K1=86.486,P均＜0.001;蛋白:F4EBP1 =43.137,FS6K1=118.924,P均＜0.001).20 mmol/L二甲双胍作用24、48和72 h后KYSE450细胞中4EBP1、S6K1 mRNA和蛋白表达亦降低(mRNA:F4EBP1=146.772,FS6K1=36.500,P均＜0.001;蛋白:F4EBP1=73.900,FS6K1=92.950,P均＜0.001).结论:二甲双胍能够抑制人食管癌KYSE450细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与4EBP1和S6K1 mRNA及蛋白表达下调有关.
