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氨基胍对大鼠脑缺血-再灌流保护作用机制探讨
目的:探讨诱生型一氧化氮合酶抑制剂(Inosi)氨基胍(Aminoguanidine,AG)对大鼠脑缺血-再灌流(Ischemia-Reperfusion,IR)后期的保护作用.方法:采用Longa改良法,用线栓闭塞大鼠左侧大脑中动脉(MCAO),3小时后拔出线栓,建立局灶缺血-再灌流模型.于再灌流即刻予AG(100mg/kgip Bid),测定再灌流后不同时点(6h、12h、24h、72h、7d)脑内NOS活性和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量的动态变化,并对顶叶皮层半暗带区进行光镜及电镜下超微结构的观察.结果:再灌流后12h-72h,AG治疗组N0S活性明显降低,而灌流后24h-72h,AG治疗组SOD含量较对照组显著增高,MDA含量降低,梗死体积减小,光镜及电镜下病理学观察也表明,各时点AG治疗组项叶皮层神经元变性数目及变性程度均减轻,血脑屏障破坏减少.结论:大鼠大脑中动脉闭塞3小时,于再灌流即刻予AG(100mg/kg ip Bid)具有以下作用:抑制再灌流后期iNOS活性,减少MDA生成,使SOD含量增加,减轻了自由基损伤,使脑梗死体积缩小,使半暗带区神经元变性、微循环障碍、血脑屏障破坏程度减轻,起脑保护作用.
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氨基胍对大鼠局灶性缺血-再灌流后脑内MPO活性的影响
目的:探讨大鼠局灶性脑缺血后脑组织MP0活性变化规律、与脑缺血-再灌流损伤的关系以及氨基胍(AG)对其影响.方法:用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血-再灌流模型,检测缺血3小时后再灌流不同时点脑组织中MPO活性、脑梗死体积及光镜病理学变化.结果:缺血组脑组织有MPO活性升高、中性粒细胞浸润,以再灌流后48、72小时为明显,脑梗死体积、神经元变性程度随再灌流时间延长而加重,AG可以明显减轻缺血再灌流12小时后的脑组织中MPO活性、神经元变性,降低脑梗死体积,减轻脑损伤.结论:局灶性缺血脑组织中MPO活性与缺血-再灌流损伤间具有一定的关系,炎症反应是加重脑组织损伤的重要因素,AG可以减轻缺血区炎症反应,具有脑保护作用.
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人参皂甙Re抗大鼠急性缺血-再灌流心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达
目的观察人参皂甙Re抗急性缺血再灌流心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Bad和Fas基因蛋白表达,探讨人参皂甙Re抑制心肌细胞凋亡的可能机制.方法结扎Wistar大鼠左冠状动脉前降支,建立大鼠缺血-再灌流动物模型;采用透射电镜、缺口末端标记法检测心肌凋亡细胞,利用光学显微镜进行细胞计数;免疫组织化学检测Bcl-2、Bax、Bad和Fas基因蛋白的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行定量分析.结果①假手术组未发现心肌凋亡细胞.缺血-再灌流组心肌凋亡细胞数为(134.45±45.61)个/视野,Re治疗组(90.66±19.22)个/视野,两组间差异有显著性意义(P＜0.01).②免疫组织化学检测发现缺血-再灌流组及Re治疗组Bcl-2、Bax、Bad和Fas基因蛋白的表达较假手术组明显增加(P＜0.05),Re治疗组Bcl-2的表达与缺血-再灌流组比较差异无显著性意义(P＞0.05),而Bax、Bad、Fas的表达明显下降(P＜0.05),人参皂甙Re治疗组Bcl-2/Bad、Bcl-2/Bad、Bel-2/Fas比值均较假手术组与缺血-再灌流组明显增大.结论人参皂甙Re治疗可以抑制急性缺血再灌流诱导的心肌细胞凋亡,其作用机制可能是抑制了促凋亡基因Bax、Bad、Fas的表达,从而使Bcl-2/Bax、Bcl-2/Bad、Bcl-2/Fas比值增大.
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药物对大鼠睾丸缺血-再灌流后生精功能的影响
目的探讨药物对大鼠睾丸缺血-再灌流后生精功能的影响.方法雄性SD大鼠32只,随机分成假手术组、扭转组、己酮可可碱组和维拉帕米组,每组8只,建立睾丸扭转动物模型.各组于复位前15 min分别静脉注射生理盐水、己酮可可碱和维拉帕米,术后24 h留取手术侧睾丸.应用流式细胞术(FCM)检测各组生精细胞凋亡和各级生精细胞计数,测定组织内丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果与扭转组相比,己酮可可碱组和维拉帕米组生精细胞凋亡明显减少,单倍体细胞群计数显著增多,超氧化物歧化酶活性回升,丙二醛含量和髓过氧化物酶活性下降,其差异有显著性(P＜0.05).结论己酮可可碱和维拉帕米对睾丸缺血-再灌流后的生精能力具有明显的保护作用.
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络脉舒通对兔心肌梗死再灌流损伤保护作用的实验研究
目的 探讨络脉舒通对兔急性心肌梗死(AMI)再灌流损伤心脏功能和氧自由基的影响.方法 新西兰大白兔24只,随机分为络脉舒通组、对照组和假手术组,每组8只,制备AMI再灌流模型.观察各组血流动力学改变,检测丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)和一氧化氮合酶(NOS)的变化,测量心肌梗死面积.结果 (1)与对照组相比,络脉舒通组缺血-再灌流后2 h左室收缩压(LVSP)和左心室内压大收缩和舒张变化速率(±dp/dtmax)均显著升高(P《0.05),LVEDP则显著下降(P《0.05).(2)对照组MDA含量比假手术组显著增高(P《0.05),而SOD和NOS活性均显著降低(P《0.05);与对照组相比,络脉舒通组心肌梗死面积显著缩小(P《0.05),心肌MDA含量显著降低(P《0.05),心肌SOD和NOS活性均显著增高(P《0.05).结论 络脉舒通具有清除氧自由基作用,可以减轻心肌再灌流损伤,改善心功能.
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核因子-κB对急性缺血-再灌流心肌细胞凋亡及左室局部功能的影响
目的 探讨核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)对急性缺血-再灌流心肌细胞凋亡及左室局部功能的影响.方法 24只健康杂种犬随机分为对照组(C组)、缺血-再灌流组(IR组)和缺血-再灌流加特异性NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷组(PDTC组).IR组于第一对角支以下1cm处套扎左冠状动脉前降支30 min,恢复血流再灌流120 min,PDTC组在心肌缺血前应用PDTC(100 mg/kg),C组游离左冠状动脉前降支不结扎.超声心动图中的应变率法测量左室局部收缩功能,Simpson's双平面法测左室射血分数(EF),应用脱氧核甘酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)测心肌细胞凋亡指数,免疫组化法及蛋白印迹(western-blot)检测心肌组织中NF-κB的表达.结果 IR组NF-κB在缺血心肌组织中表达增高,显著高于C组(P＜0.05),而PDTC组NF-κB表达明显减弱,显著低于IR组(P＜0.05);PDTC组心肌细胞凋亡数较IR组明显减少(P＜0.05);IR组左室前壁缺血节段收缩期峰值应变率(SRpeak)明显减低(P＜0.01),PDTC组的应变率与IR组比较明显增高(P＜0.05).射血分数在三组间差异无统计学意义.结论 NF-κB在心肌缺血-再灌流中起重要作用,PDTC通过抑制NF-κB的表达从而减轻心肌缺血-再灌流损伤,改善心功能.
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卡巴胆碱对肠缺血-再灌流动物脏器功能的保护作用
目的研究卡巴胆碱对肠缺血-再灌流动物脏器功能的保护作用及对肠组织和白细胞炎症介质表达的影响.方法检测肠缺血-再灌流大鼠和肠部分缺血-再灌流兔伤后脏器功能指标、白细胞中细胞因子表达和血浆、肠组织TNF α含量.结果卡巴胆碱治疗组大鼠再灌流2 h后血浆ALT、BUN和CK低于对照组,白细胞中TNF α表达下调,IFN、IL-4和IL-10表达上调;治疗组兔血浆ALT、Cr和CK-MB在缺血和再灌流早期增加幅度低于实验组,再灌流后趋于恢复,实验组渐升高;肠组织TNF α含量低于实验组.结论卡巴胆碱改善肠缺血-再灌流动物脏器功能,抑制肠组织TNF α的合成,调节白细胞致炎和抗炎因子的表达比例.
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乌司他丁对大鼠肝缺血-再灌流损伤的保护作用
目的研究乌司他丁对肝缺血-再灌流损伤的保护作用.方法将45只成年雄性SD大鼠随机分成3组:假手术对照组(A组)、肝缺血30 min、再灌流90 min组(B组)、缺血前30 min静脉注射乌司他丁+肝缺血30 min、再灌流90 min组(C组).分别测血浆中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、乳酸脱氨酶(LDH)浓度;测定肝组织中髓过氧化物酶(MPO)含量,并取肝组织作光镜及电镜观察.结果再灌流90 min时C组的血浆ALT、AST、LDH值及肝组织MPO含量均低于B组(P＜0.01),且C组的肝细胞显微、超微结构损害的改变较B组的轻.结论乌司他丁能抑制肝缺血-再灌流时中性粒细胞在肝组织中的聚集,从而对大鼠肝缺血-再灌流所致肝细胞的结构和功能损伤有保护作用.
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粉防己碱对急性缺血性肾损伤细胞凋亡的影响
目的:探讨粉防己碱在急性缺血性肾损伤中的作用及与细胞凋亡的关系.方法:在钳夹双侧肾蒂45min致大鼠急性缺血性肾损伤模型的基础上,采用肾组织切片HE染色、肾组织DNA片段分析及原位末端转移酶标记法等技术,定性、定量分析了急性缺血性肾损伤时肾小管上皮细胞的凋亡现象.结果:急性缺血性肾损伤时,肾小管上皮细胞的凋亡现象明显增加;粉防己碱对急性缺血性肾损伤具有保护作用,能够明显降低受损肾小管的细胞凋亡水平.结论:急性缺血性肾损伤时,中药粉防己碱能够调节肾小管上皮细胞的凋亡水平,以减轻肾组织的损伤.
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肠缺血灌流时异丙酚对肠上皮细胞凋亡的影响
目的:研究缺血再灌流时异丙酚对肠上皮细胞凋亡的影响及可能机制.方法:96只成年♂ Wistar大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌流+生理盐水组(I/R+NS)和I/R+异丙酚组(I/R+Pr).采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)的方法制作肠缺血再灌流模型.以上各组分别在再灌流后0,30,60,120和240 min(每时间点8只)处死动物取肠袋组织.采用病理学方法观察肠上皮细胞损伤指数;原位DNA末端标记法(TUNEL)检测肠上皮细胞凋亡率的变化;免疫组化法检测肠上皮细胞Caspase-3,bcl-2表达的变化.结果:I/R+Pr组与I/R+NS组相比,肠上皮细胞病理变化较轻,肠上皮细胞的凋亡率明显下降(P＜0.01),再灌流后0,30,60,120和240min肠上皮细胞中Caspase-3阳性细胞数明显减少(104.4±5.3 vs 146.4±7.6;97.4±6.2 vs 130.4±7.4;134.4±5.1 vs 170.4±8.1;125.4±6.2 vs 160.4±9.5;101±5.8 vs 120.4±8.2,均P＜0.01),而bcl-2阳性细胞数明显增加(13.34±4.12 vs 6.72±2.59;14.96±4.85 vs 8.24±3.13;15.29±5.28 vs 9.63±2.89;10.39±3.61 vs 9.63±2.89;10.39±3.61 vs 5.96±1.93;11.08±4.83 vs 6.87±2.43,均P＜0.01).结论:异丙酚能抑制缺血再灌流时肠上皮细父胞Caspase-3表达,而增加bc1-2表达,减少肠上皮细胞的凋亡.
关键词： 缺血-再灌流 异丙酚 肠上皮细胞 凋亡 原位DNA末端标记法 -
大鼠脑缺血后脑内MPO、NSE活性变化
目的 通过测定大鼠局灶性脑缺血-再灌流后不同时点脑组织中髓过氧化物酶(MPO)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)活性的变化,探讨炎症反应与脑缺血损伤的关系.方法 用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉缺血-再灌流模型,检测缺血3h再灌流后6h、12h、24h、48h、72h和7d脑组织中MPO和NSE活性、脑梗死体积的变化.结果 缺血组脑组织中NSE和MPO活性升高,再灌流后48h的NSE为(5.44±0.95)ng/ml,MPO为4.49±0.22;72h分别为(5.36±0.65)ng/l和5.96±0.19,升高为明显.脑梗死体积随再灌流时间延长而增加,第7d梗死体积百分比为(39.18±0.63)%.局灶性缺血脑组织中MPO活性与组织损伤(NSE活性)间具有高度正相关性.结论 炎症反应是加重脑缺血损伤的重要因素.
关键词： 缺血-再灌流 髓过氧化物酶 神经元特异性烯醇化酶 -
维拉帕米对大鼠缺血-再灌流视网膜Glu-IR神经元的观察
探讨维拉帕米对大鼠缺血-再灌流视网膜Glu-IR神经元的作用。 方法：结扎双侧颈总动脉，3h后松结复流，分别于缺血前15min和再灌流前1min腹腔注 射维拉帕米(5mg/kg/次)，对照组腹腔注射等量生理盐水。动物存活3d，4%多聚甲醛经心灌 注 ，视网膜切片Glu免疫组织化学反应。结果：正常大鼠视网膜内核层中有大量Glu-IR神经元 ，外核层、节细胞层部分细胞呈Glu-IR。缺血-再灌流损伤后，视网膜内核层中Glu-I R神经元较正常时显著减少，染色变淡，外核层、节细胞层未见Glu-IR(P＜0.05)。在缺 血-再灌流期应用维拉帕米，视网膜中Glu-IR神经元明显增多，染色变深(P＜0.05)。结 论：视网膜Glu-IR神经元对缺血-再灌流损伤敏感，维拉帕米有助于视网膜Glu-IR神经元的 存活及免疫活性的恢复。
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大鼠脑缺血再灌流时神经元损伤与星形胶质细胞的反应
为探讨星形胶质细胞在缺血性神经元损伤中的作用及其与神经元损伤的关系，本实验阻塞大鼠大脑中动脉2 h，再灌流0.5～48 h建立短暂局灶性脑缺血模型，进行HE染色；通过胶质原纤维酸性蛋白和细胞核增殖抗原免疫组化单重或双重反应，TUNEL和胶质原纤维酸性蛋白免疫组化双重反应观察了神经元和星形胶质细胞的反应。结果表明：再灌流24 h缺血区面积大，再灌流6 h开始出现神经元不可逆变性，24 h梗塞成熟；星形胶质细胞表现为反应性，营养不良性和退形变三种不同的形态特点。再灌流48 h时星形胶质细胞数量开始增多。48 h之内星形胶质细胞无增生，且有少量星形胶质细胞凋亡。这些结果提示脑缺血时星形胶质细胞反应与神经元损伤密切相关，反应性星形胶质细胞是其积极应答神经元损伤的结果，在维持神经元存活中起作用。
