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β-胡萝卜素对食管鳞癌EC1细胞内活性氧和细胞凋亡的影响
目的:探讨β-胡萝卜素对食管鳞癌EC1细胞内活性氧和细胞凋亡的影响.方法:分别用不同质量浓度的β-胡萝卜素(30、50、80 μmoL/L)处理食管鳞癌 EC1细胞48 h 后,采用化学荧光法检测 EC1细胞内活性氧(ROS)含量变化,通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变检测线粒体膜电位(MMP)变化,ELISA法检测胞内细胞色素C(Cyt-C)含量的变化,Western blot检测Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达,流式细胞术检测不同质量浓度的β-胡萝卜素对EC1细胞凋亡的影响.结果:β-胡萝卜素处理能够提高EC1细胞内ROS含量,引起MMP下降,促进Cyt-C的释放,上调Bax和Caspase-3蛋白表达,并下调Bcl-2蛋白表达;同时,β-胡萝卜素作用能提高EC1细胞凋亡率.结论:β-胡萝卜素能够通过上调细胞内ROS的水平,降低MMP,进一步促进食管鳞癌细胞凋亡.
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全反式维甲酸联合LY294002对食管癌EC1细胞增殖、迁移及PI3K、MMP-2表达的影响
目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)、磷脂酰肌醇激酶-3(PI3K)抑制剂LY294002单独或联合作用对食管癌EC1细胞增殖、迁移及PI3K和MMP-2表达的影响.方法:将常规培养的EC1细胞随机分为ATRA组、LY294002组、ATRA+ LY294002组和对照组4组,采用CCK-8检测各组细胞的增殖情况,通过划痕实验测定各组细胞的迁移能力,采用RT-PCR和Western blot方法检测各组细胞中PI3K及MMP-3 mRNA和蛋白的表达情况.结果:作用24、48和72 h后,ATRA+ LY294002组的细胞增殖抑制率均高于其他2组(P＜0.05);作用24 h后,ATRA+ LY294002组细胞迁移能力均低于其他3组(P＜0.05);作用48 h后,ATRA+ LY294002组细胞PI3K及MMP-2 mRNA和蛋白的表达量均低于其他3组(P＜0.05).结论:ATRA联合LY294002可协同抑制EC1细胞的增殖、迁移和PI3K、MMP-2的表达,进而可能协同抑制肿瘤血管生成.
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顺铂对TRAIL诱导EC1细胞凋亡的增敏效应
目的:观察顺铂(cDDP)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导EC1细胞凋亡的增敏效应.方法:MTT法检测单用TRAIL(10、50、100、500和1 000μg/L)或cDDP(1.0、2.0、4.0、10.0和20.0 mg/L)分别作用24、48和72 h对EC1细胞增殖的影响.流式细胞术检测100μg/L TRAIL和10.0 mg/L cDDP单用或联用48 h对EC1细胞凋亡和细胞周期的影响,并设空白对照组.结果:单用TRAIL作用24、48和72 h对ECI细胞增殖影响不明显(P>0.05),单用cDDP对EC1细胞增殖有抑制作用(P<0.05).单用TRAIL对EC1细胞凋亡率无影响(FTRAIL=5.836,P=0.250),而单用cDDP可提高EC1细胞凋亡率(FCDDP=20.763,P=0.041),二者联合有交互作用(F交互=57.422,P<0.001).单用TRAIL和cDDP对EC1细胞周期无影响,二者联用后G0/G1和S期细胞比例下降,G2/M细胞比例上升(P均<0.001).结论:cDDP可增加EC1细胞对TRAIL的敏感性,二者联用可诱导EC1细胞凋亡,并诱导其在G2/M期阻滞.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 顺铂 EC1细胞 细胞凋亡 细胞周期 -
曲古菌素A对食管癌细胞系EC1细胞凋亡的影响
目的:探讨曲古菌素A(TSA)对食管癌EC1细胞凋亡的影响.方法:用DMSO(对照组)和0.3、0.5及1.0μmol/L的TSA处理EC1细胞24h,用Annexin V-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测4组细胞的凋亡率,West-ern Blot检测4组细胞中Bax及Bcl-2表达的变化.结果:对照组、0.3、0.5及1.0 μmol/L TSA组作用24 h后,EC1细胞凋亡率分别为(2.18±0.37)%、(2.96±0.34)%、(7.41±1.01)%和(14.03±1.23)%,Bax蛋白表达水平分别为(0.42±0.23)、(0.45±0.11)、(1.16±0.28)和(1.89±0.30),Bcl-2蛋白表达水平分别为(1.15 ±0.14)、(1.11±0.15)、(0.59±0.06)和(0.40±0.07),4组间3指标差异均有统计学意义(F=211.96,25.12和33.68,P均<0.001),随TSA作用浓度的增加,EC1细胞凋亡率、Bax蛋白表达均增加,Bcl-2表达减少.结论:一定剂量的TSA可以诱导EC1细胞凋亡,凋亡的发生町能与Bax表达增加和Bcl-2表达减少有关.
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地塞米松和1,25-(OH)2D3对EC1细胞增殖和细胞周期的影响
目的:观察地塞米松(DEX)和1,25-(OH)2D3及2药联用对食管鳞状细胞癌ECl细胞增殖及周期的影响.方法:分别用10-7 mol/L DEX与10-7 mol/L 1,25-(0H)2D3以及同种浓度2药联合处理ECl细胞48、72和96h,并设溶剂对照组.采用MTT法检测细胞增殖情况及流式细胞仪检测细胞周期变化.结果:1,25-(OH)2D3单独应用具有抑制ECl细胞增殖的作用(F1.25-(OH)2D3=51.185,P＜0.001);DEX单独应用具有阻滞细胞周期的作用( FDEx=8.170,P=0.009).DEX、1,25 - (OH)2D3及时间3种因素两两间均存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX=11.017,P=0.003;F1.25-(OH)2D3×时间=3.668,P=0.041;FDEX×时间=7.887,P=0.002.G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX=12.381,P=0.002;F1.25-(OH)2D3×时间=6.583,P=0.005;FDEX×时间=5.096,P=0.014),且两药间提示存在拮抗作用.未发现3因素之间存在交互作用(细胞增殖抑制:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间=0.512,P=0.606.G0/G1期细胞比率:F1,25-(OH)2D3×DEX×时间 =0.410,P=0.668).结论:DEX和1,25-(OH)2D3单独及联合使用能对ECl细胞增殖起抑制作用,且使ECl细胞周期阻滞在G0/G1期.
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转录因子8在食管癌细胞EC1的表达及其对EC1细胞迁移侵袭的影响
目的:研究食管癌细胞EC1中转录因子8(transcription factor 8,TCF8)的表达对EC1细胞迁移侵袭的影响.方法:通过共聚焦显微镜观察EC1细胞中TCF8的表达;吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)作用于EC1细胞24 h后,Western blot法检测NF-κBp65、TCF8和E-cadherin蛋白表达变化,划痕损伤和traoswell实验检测对细胞转移和侵袭的影响.结果:TCF8表达于EC1细胞核,PDTC可以导致EC1细胞中NF-κBp65、TCF8表达降低,而E-cadherin表达增高;PDTC组细胞迁移距离和穿过的细胞数明显低于对照组.结论:食管癌细胞EC1中表达TCF8,下调TCF8可上调E-cadherin,抑制EC1细胞的迁移侵袭,为阐明食管癌侵袭转移的分子机制提供理论依据,为临床治疗提供分子靶点.
