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HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者出现前C和基本核启动子联合突变的意义
目的探讨HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者出现前C区G1896A突变和基本核启动子(BCP)区A1762T/G1764A双突变,以及两者的联合突变对患者血清病毒含量的影响.方法收集240份HBeAg阴性、60份HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者血清及40份阴性对照血清,采用竞争分化聚合酶链反应(CD-PCR)检测G1896A突变及A1762T/G1764A双突变,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血清中病毒含量.结果G1896A突变在HBeAg阴性和HBeAg阳性患者中的检出率分别为57.6%和6.7%;A1762T/G1764A双突变的检出率分别为37.9%和31.7%;其中两者联合突变在HBeAg阴性患者中的检出率为13.5%.在HBeAg阴性患者中,G1896A突变主要出现在血清病毒含量低的患者,而A1762T/G1764A双突变与血清病毒含量无关.联合变异株主要见于重度慢性乙型肝炎患者,与血清病毒含量无关.结论G1896A变异株复制能力较低,而A1762T/G1764A变异株对病毒复制能力影响可能较为复杂,对HBeAg合成的影响较G1896A变异株小.联合变异株的致病力相对较强,其复制能力较单纯G1896A强,值得警惕.
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铜陵地区特定人群庚型肝炎病毒感染状况的调查
目的调查铜陵地区特定人群GBV-C/G型病毒性肝炎(简称庚型肝炎)病毒(HGV)感染状况,加强特定人群HGV的检测,以阻断庚型肝炎的流行.方法聚合酶链反应检测血清HGV RNA.结果自愿献血员HGV RNA阳性率1.77%(4/226),职业献血员HGV RNA 阳性率6.42%(28/436),职业献血员HGV RNA阳性率明显高于自愿献血员(P<0.01).甲型肝炎、慢乙肝、慢丙肝、非甲～戊型肝炎及血透患者HGV RNA阳性率分别为1.56%(1/64)、11.11%(6/54)、19.57%(9/46)、8.33%(3/36)及16.67%(8/48).结论铜陵地区特定人群中均存在不同程度的HGV感染;因此,在大力提倡全民义务献血的前提下,应加强献血员,尤其职业献血员以及血透、输血等患者的 HGV筛查,以阻断庚型肝炎的流行.
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丙型肝炎患者血清自身抗体检测的相关分析
目的 了解慢性丙型肝炎患者血清中自身抗体阳性率,探讨自身免疫在丙型肝炎病毒(HCV)感染中的意义.方法 选取2014年1月至2015年3月该院收治的丙型肝炎患者127例作为丙型肝炎组,另选取同期该院体检中心健康体检者30例作为对照组.采用间接免疫荧光法(IIF)检测两组受检者血清中抗核抗体(ANA),免疫印迹法检测抗线粒体抗体(AMA)、抗可提取性核抗原(ENA)抗体、抗肝抗原抗体谱,采用实时荧光定量PCR法检测血清 HCV-RNA含量.结果 丙型肝炎组有61例检测出1项或1项以上自身抗体阳性,自身抗体阳性率为48.03%(61/127),高于对照组的3.33%(1/30),差异有统计学意义(P<0.01).丙型肝炎组HCV-RNA阳性46例,其中自身抗体阳性29例(63.04%), HCV-RNA阴性81例,自身抗体阳性32例(39.51%),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HCV感染机体可诱发自身免疫反应,产生多种自身抗体,尤其以HCV-RNA阳性患者更为明显,HCV感染者有必要进行血清自身抗体检测,从而指导临床医生对患者实施个体化治疗.
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慢性丙型肝炎患者HCV不同基因片段抗体应答与脂代谢关系
目的:探讨慢性丙肝患者HCV感染与脂质代谢的关系及特点.方法:用酶联免疫法检测实验组慢性丙肝患者HCV不同基因片段抗体,并以羊抗人Apo-B血清分离其Apo-B,用PCR法检测Apo-B 中HCV-RNA,同时作血脂监测.另设健康人和乙肝病例对照.结果:实验组病例HCV不同基因片段抗体呈现6种分布模式,其血清中均检出HCV-RNA较高载量,相应的Apo-B中(除1例阴性外)均有HCV-RNA表达,血清LDL、Apo-B等水平值显著低于对照组.两对照组血清及Apo-B中无HCV-RNA表达,且不同基因片段抗体阴性.结论:慢性丙肝患者HCV不同基因片段抗体应答与HCV复制密切相关,与Apo-B携带密切相关;其HCV-C和HCV-NS4、HCV-NS5与不同组分载脂蛋白相互作用,可能共同干扰脂质代谢.
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丙型肝炎病毒NS5A基因的克隆及序列比对分析
目的:研究HCV NS5A区基因的结构与功能,为提高干扰素(IFN)治疗HCV感染的有效性提供依据,及为建立以NS5A蛋白做抗原的新一代诊断试剂盒,提高HCV感染检出率作出有益的尝试.方法:以含HCV1b全长cDNA的质粒HCV17为模板,利用巢式PCR扩增出一段长约500bp的cDNA片段,以此基因片段作为目的基因,进行T-A克隆,构建PMD18-T-NS5A.结果:经酶切及测序证实,PMD18-T-NS5A质粒中的插入基因片段为HCV1b NS5A区部分基因,与HCV标准株HCVJ序列进行比对分析,核苷酸和氨基酸序列的同源性均为90%以上,并且该区段包含了干扰素敏感决定区(ISDR).结论:建立HCV NS5A基因片段稳定的无性繁殖系,并进行同源性分析对研究ISDR序列与IFN疗效的关系是非常重要的;通过基因重组表达NS5A蛋白,可用于HCV诊断试剂盒的研究.
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不确定RIBA结果在HCV感染诊断中的预测意义
目的:评价诊断丙肝病毒(HCV)感染时不确定的重组免疫印迹试验(RIBA)结果的预测意义.方法:从1550份血清结果中筛选出142份不确定结果进行回顾性分析,分别分析4个条带出现单反应的几率及其预测意义.结果:142份不确定结果中单条带反应率分别为:c33c 51%, c-22(p) 36%, NS5 11%, C100(p) 2%.各单反应条带中酶免法(EIA)结果呈高滴度同时多聚酶链反应(PCR)结果呈阳性的率分别为:c33c 60%, c-22(p) 26%, NS5 8%, c100(p) 0%.4个单反应条带中EIA与PCR同时呈阴性的率相同.结论:RIBA 4个条带出现单条带反应的几率不同;4个条带中c33c的阳性预测值高,为60%,提示c33c单阳性预示很可能感染HCV,其它三个条带的阳性预测值较低且无差异;4个条带的假阳性预测值低且无差异,提示单条带阳性者未感染HCV的可能性小.
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丙型肝炎病毒NS3基因真核表达载体的构建及表达
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3的真核表达载体,并分析其在HeLa细胞中的表达. 方法:以HCV 全长cDNA 质粒为模板进行PCR 扩增, 获得全长NS3 基因,将其插入克隆载体pMD18-T 中,鉴定后与真核表达载体pcDNA 3.1(+)重组,用脂质体介导法转染HeLa细胞,间接免疫荧光法及Western blot鉴定转染后HCV NS3蛋白的表达. 结果:PCR扩增的NS3序列正确,构建的真核表达载体成功转染HeLa细胞,表达的 NS3 蛋白相对分子量为 70kD. 结论:成功构建了真核表达载体pcDNA 3.1(+)/NS3,并在HeLa细胞中获得表达.
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丙型肝炎病毒1b DY株ns5a基因的克隆及其所表达融合蛋白的免疫原性分析
目的:克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)1b型地方株DY株ns5a基因,为进一步研究和应用该基因及其表达产物奠定基础.方法:采用基因重组技术完成实验.设计特异的引物,采用巢式PCR法,从含HCV 1b DY株全长cDNA的质粒HCV17中扩增出目的片段,约480bp;将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,再与原核表达载体pET-28a重组;经酶切、PCR及测序鉴定后转化入BL21菌株,在IPTG诱导下进行融合蛋白的表达.采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS5A蛋白表达水平.结果:含有HCV1b DY株ns5a基因的重组体构建成功,并得以表达蛋白,并且NS5A蛋白具有与HCV患者阳性血清中的多克隆的结合活性,具有很好的免疫原性.结论:运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV1b DY株ns5a基因,为进一步研究HCVns5a的基因型及探讨该基因编码的NS5A蛋白的性质和生物学活性创造条件.
