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丙型肝炎病毒NS3基因真核表达载体的构建及表达
目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3的真核表达载体,并分析其在HeLa细胞中的表达. 方法:以HCV 全长cDNA 质粒为模板进行PCR 扩增, 获得全长NS3 基因,将其插入克隆载体pMD18-T 中,鉴定后与真核表达载体pcDNA 3.1(+)重组,用脂质体介导法转染HeLa细胞,间接免疫荧光法及Western blot鉴定转染后HCV NS3蛋白的表达. 结果:PCR扩增的NS3序列正确,构建的真核表达载体成功转染HeLa细胞,表达的 NS3 蛋白相对分子量为 70kD. 结论:成功构建了真核表达载体pcDNA 3.1(+)/NS3,并在HeLa细胞中获得表达.
