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Cx26基因在正常肝脏和肝癌中的表达
间隙连接蛋白(Cx)基因在胚胎发育、细胞生长、分化及细胞间信号传递、物质交流等方面起着重要作用,Cx基因的表达及功能异常与肿瘤发生密切相关.肿瘤细胞常存在Cx基因表达下调或缺失.肝癌是常见的恶性肿瘤之一.连接蛋白26是哺乳动物肝脏中的主要表达的连接蛋白之一,近年来研究表明它对肝脏GJIC有重要作用.Cx26蛋白的表达异常可能是肝细胞癌发生重要机制之一.
关键词： Connexin26 正常肝脏 肝癌 间隙连接 -
青少年儿童特发性耳聋与Connexin26突变的相关性
目的:对无耳聋家族史及无噪声暴露史,排除病毒感染后致聋的青少年及儿童是否存在connexin26突变.方法:2004年7月至2007年1月就诊的30岁以下的不明原因的神经性耳聋患者,共44例,行听力学检查包括电测听、声阻抗、脑干诱发电位及保留外周血2ml做是否有connexin26突变的pcr扩增及扩增目的片段直接测序分子生物学实验室检测.采用正常标准对照及阳性对照,阳性对照组系一近亲婚配后耳聋家族.结果:对于connexin26突变的结果,在26例患者中未发现有该基因突变,在18例语前聋患者中有5例该基因突变,突变均位于第二编码基因的235号位置缺失c的突变.在正常对照组和阳性对照组的耳聋患者中未发现该基因突变(fisher's精确概率P=0.01).结论:connexin26突变主要累及语前耳聋患者.
关键词： Connexin26 特发性耳聋 青少年 突变 -
噪声对小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26表达的影响
目的 观察噪声性聋小鼠耳蜗外侧壁缝隙连接蛋白Connexin26(Cx26)表达的变化.方法 成年雄性Balb/c小鼠49只随机分为噪声组(29只)和对照组(20只).实验前两组小鼠检测听性脑干反应(ABR),随后噪声组小鼠给予高强度噪声(115 dB SPL,6小时/天,共2天12小时)暴露,并在噪声暴露后0和7天分别检测ABR.对照组不做任何处理.噪声暴露后4小时,每组取2只小鼠做耳蜗冰冻切片,18只小鼠提取耳蜗外侧壁总RNA.通过免疫组化染色法观察小鼠耳蜗外侧壁Cx26蛋白的表达,共聚焦显微镜下观察缝隙连接蛋白转运相关蛋白--β微管蛋白的表达,荧光实时定量 PCR检测小鼠耳蜗外侧壁Cx26编码基因GJB2 mRNA的表达.结果 正常小鼠耳蜗螺旋韧带可见Cx26棕黄色阳性颗粒,血管纹处未见阳性表达;噪声组小鼠耳蜗外侧壁Cx26免疫组化染色较对照组减弱;Cx26编码基因GJB2 mRNA表达量低于对照组,β微管蛋白排列稀疏紊乱,呈条索状排列,但未见明显浓集或断裂.结论 噪声可下调小鼠耳蜗外侧壁Cx26的表达,Cx26可能参与了噪声性聋的发病机制.
关键词： 噪声 耳蜗 Connexin26 微管蛋白 小鼠 -
Connexin26与遗传性非综合征型聋的相关性研究
耳聋是一种常见的人类感觉系统缺陷之一, 因其病因复杂、发生率高和治疗困难等原因而长久地困扰着广大患者及其周围人群, 极大地影响着相互交流和生活质量.重度耳聋在新生儿中发生率高达1 /800 ～1 /1 000[ 1].造成耳聋的原因有多方面,遗传因素是主要的, 60%的耳聋是由遗传缺陷引起的[2] .
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人连接蛋白Connexin26基因的克隆、表达及初步鉴定
目的 研究含人连接蛋白Connexin26 (Cx26) 基因的真核表达载体构建及其在非洲猴肾细胞(COS-7)中获得稳定、高效表达的方法.方法 提取人外周血淋巴细胞 RNA,经逆转录制备成 cDNA,设计特异性引物,用PCR方法从cDNA中扩增Cx26基因,将其定向插入真核表达载体pCI-neo中获得pCI-Cx26重组子,采用酶切法和测序法鉴定.用脂质体将pCI-Cx26转染COS-7细胞,经G418筛选,获得阳性克隆.用RT-PCR和SDS-PAGE检测对表达产物进行检测.结果 从人外周血RNA制备而成的cDNA中可扩增出预期大小的Cx26基因片段,pCI-Cx26经双酶切测序证实构建成功.RT-PCR和SDS-PAGE检测到pCI-Cx26在COS-7细胞中获得稳定、高效表达.结论 本研究成功构建了人连接蛋白Cx26基因重组真核表达载体pCI-Cx26;pCI-Cx26脂质体转染COS-7细胞,可见Cx26基因在COS-7细胞中获得稳定、高效的表达.该结果为今后进行pCI-Cx26基因治疗Cx26基因突变引起的遗传性耳聋的研究奠定了实验基础.
关键词： 遗传性耳聋 Connexin26 真核表达载体 基因治疗 -
急性肺损伤时大鼠肺组织结构及Cx26表达变化的观察
目的观察急性肺损伤不同时段大鼠肺组织结构的变化,及连接蛋白Connexin 26(Cx26)在急性肺损伤不同时段表达的变化.方法采用油酸(O.25ml/kg)经大鼠尾静脉缓慢注入复制急性肺损伤模型,分别于注射油酸后1,5,12,24,48h取出肺脏,用HE染色法观察肺组织结构变化,同时用免疫组织化学评价Cx26的表达情况.结果Cx26蛋白表达既定位于肺泡上皮细胞质中,又定位于胞膜上.Cx26在正常组及损伤后1,5,12,24,48h组的阳性表达率分别为12.25%,9.11%,5.71%,6.22%,6.64%,8.25%.经单向方差分析,正常对照组的阳性细胞率明显高于损伤各组(P＜0.05);损伤后1 h组的阳性细胞率也明显高于损伤后5,12,24h组(P＜0.05);损伤后5 h组的阳性细胞率则明显低于损伤后48h组(P＜0.05).结论间隙连接蛋白Cx26表达的改变可能与急性肺损伤及其修复有密切的关系.
关键词： 急性肺损伤 Connexin26 缝隙连接 肺泡上皮细胞
