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胰腺导管癌中血管生成、细胞增殖指数、DNA倍性检测的临床意义
目的:探讨血管生成、细胞增殖指数、DNA倍性在胰腺导管癌发生、发展中的作用及临床意义.方法:对29例胰腺导管癌和7例慢性胰腺炎患者的石蜡包埋标本作苏木精-伊红(HE)染色,CD34、Ki67免疫组织化学染色,镜下计算微血管密度(MVD)及Ki67阳性细胞比例,同时用流式细胞仪(FCM)检测细胞核DNA倍性,计算异倍体出现率及S期比例,并结合临床病理资料对各项指标作相关分析.结果:胰腺导管癌和慢性胰腺炎都有较多的新生血管.MVD值在胰腺导管癌高、中、低分化3组之间差异无显著性.按肿瘤直径分为≤1.5 cm、1.6～2.9 cm、≥3 cm 3组,此3组间MVD值、Ki67阳性细胞百分率、DNA异倍体出现率及肿瘤周围有无浸润的差异都非常显著(P＜0.01).肿瘤越大,MVD值、Ki67阳性细胞百分率及DNA异倍体出现率越高.结论:胰腺导管癌的发生、发展伴血管生成和DNA合成增加,联合测定MVD、Ki67阳性细胞百分率、DNA倍型可能为胰腺导管癌临床预后预测提供辅助参考指标.
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胃黏膜癌变过程中端粒长度变化及其与细胞内DNA含量的关系
目的 分析不同病变胃黏膜细胞内端粒长度的差异，以及细胞内DNA含量，探讨端粒行为异常、细胞内DNA含量与胃黏膜癌变的关系。方法 应用Southern杂交分析细胞内端粒长度，应用流式细胞术测定细胞内DNA含量。结果 在172例胃镜活检标本中，正常胃黏膜，慢性浅表性胃炎(CSG)，伴0、1、2度肠化的慢性萎缩性胃炎(CAG)和胃癌组织的端粒长度，分别是(10.42±0.2)kb，(9.86±0.4)kb，(9.78±1.2)kb、(8.64±1.0)kb、(6.22±1.2)kb和(5.86±2.6)kb。45例胃癌手术标本结果 相似。流式细胞术分析细胞内DNA含量，在胃镜活检标本中，正常胃黏膜，CSG，伴0、1、2度肠化的CAG和胃癌组织的异倍体DNA检出率分别为0、0、0、10.00％、12.50％6和33.33％6。45例胃癌手术切除标本结果 相似。异倍体细胞内端粒长度明显短于二倍体细胞，异倍体细胞中端粒长度与DNA指数呈负相关(r=-0.91，P＜0.01)，即端粒越短，DNA指数越高。结论 端粒长度从正常胃黏膜、不同程度肠化胃黏膜到癌变胃黏膜逐渐缩短。在正常胃黏膜和CSG中未检出异倍体DNA，从1度、2度肠化到癌变胃黏膜异倍体DNA检出率逐渐增高，而在异倍体细胞中端粒长度和DNA指数呈负相关。推测，可能存在端粒愈短，DNA扩增愈活跃。端粒缩短伴DNA指数增加可能是胃癌发生的先兆。
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基因重组白细胞介素3刺激胎肝巨核细胞祖细胞生长的特性
本文采用血浆凝块、甲基纤维素半固体和液体培养体系结合流式细胞仪巨核细胞DNA双荧光分析,观察了4～5个月胎肝和成人骨髓CFU-MK在体外的增殖和分化特点.结果表明,无论以基因重组白细胞介素3(Interleukin-3,rIL3)或再障狗血清(Meg-CSA)作为刺激因子,胎肝CFU-MK集落均较大(大于50个细胞/集落),而成人骨髓CFU-MK集落均较小(小于50个细胞/集落).在以rIL3(2 ng/ml)为刺激因子时,胎肝巨核细胞祖细胞(CFU-MK)集落产率(36.40±16.60)高于成人骨髓(10.05±2.81)(P＜0.01).与此相反,胎肝CFU-MK源巨核细胞DNA倍性分布以2N和4N为主,成人骨髓则以8N和4N为主,前者的平均倍性值(5.46±0.86)明显低于后者(10.13±1.30)(P＜0.01).同样,在以Meg-CSA为刺激因子时,也获得了类似的结果,提示胎肝CFU-MK具有很强的增殖能力和较低的分化(倍体化)能力.另外,胎肝CFU-MK集落产率在rIL3浓度为0.5～2 ng/ml时逐渐上升,而在2～8 ng/ml则持续下降.但在相同浓度范围内,rIL3对成人骨髓CFU-MK和胎肝CFU-GM的作用均无这种双向效应.Meg-CSA(5%～25%)对胎肝、成人骨髓CFU-MK和胎肝CFU-GM的作用也呈明显的剂量效应曲线.而且,胎肝CFU-MK源巨核细胞DNA倍性分布在两种不同刺激因子作用下无明显差别,在含有rIL3体系中加入rIL6后,对巨核细胞DNA倍性分布也没有影响.这似乎在暗示胎肝CFU-MK通过细胞内的自身修饰以适应胚胎时期的生理特点.
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A549细胞转染esp1基因后生物学行为的变化
目的:观察A549细胞转染esp1基因后细胞生物学行为的改变.方法:将IRE-EGFP-esp1质粒用FuGENE 6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系(esp1-A549).采用DNA荧光染色流式细胞仪分析转染后细胞DNA含量、倍性及细胞周期,计算S期细胞比率(SPF)和DNA指数(DI);采用细胞表面磷脂酰丝氨酸检测法和闪烁计数法分别检测细胞凋亡和增殖情况,同时检测软琼脂集落形成能力.以未转染(A549)、转染空载体(neo-A549)的细胞作对照.结果:与其他2组比较,esp1-A549细胞的DI、SPF及细胞增殖率降低,细胞凋亡率升高.esp1-A549细胞软琼脂集落形成数为3.5±0.6,克隆形成率为12.5%,低于A549细胞的23.3±0.2(t=4.93,P=0.004)和46%.结论:esp1基因的上调表达对A549细胞部分恶性生物学表型具有一定的抑制作用.
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口腔鳞癌、切缘组织DNA倍性特征及临床意义
目的:研究口腔鳞癌、切缘组织和正常粘膜的DNA倍性特征、S期细胞比率(S-phase fraction,SPF)及临床意义.方法:用FACS检测39例患者口腔鳞癌、切缘组织及正常粘膜的DNA倍性并计算S期细胞比率.结果:口腔鳞癌和切缘组织的异倍体率分别为38%和31%,无统计学差异,但两者均显著高于正常口腔粘膜的异倍体率15%.癌组织中异倍体患者的颈淋巴结转移率40%,显著高于二倍体患者21%(P＜0.025).切缘组织异倍体患者与二倍体患者的颈淋巴结转移无显著差异.口腔鳞癌与切缘组织间SPF分别为23±8.6%、26±9.2%,两者显著高于正常粘膜12±4.9%(P＜0.5).结论:口腔鳞癌异倍体与颈淋巴结转移有关.切缘组织具有癌变的潜能.
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DNA倍体分析对结直肠癌预后的判断价值
目的研究DNA倍体异常与结直肠癌预后和生物学特性的关系.方法应用流式细胞术分析82例Ⅱ、Ⅲ期结直肠腺癌癌组织标本的DNA倍性.结果在82例标本中,二倍体36例,占439%,异倍体46例,占561%.近侧结肠癌的二倍体数目明显多于远侧结肠癌(分别为657%和277%,P=0001),DNA倍性与其他临床病理参数无明显相关关系.全组中位随访时间61个月,DNA异倍体肿瘤患者术后总生存率明显低于二倍体患者(P=0043).此外,在近侧和Ⅱ期结直肠肿瘤中,均以异倍体组患者的预后为差(分别为P<00001;P=00005).结论流式细胞DNA倍性分析有助于阐明结直肠癌的发生机制和生物学特性上的差异,对结直肠癌预后的判断具有重要价值.
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人核迁移蛋C刺激人造血干细胞增殖分化为巨核细胞研究
目的:研究人核迁移蛋C(hNUDC)促进人脐血来源的CD34+细胞增殖、分化为巨核细胞的作用.方法:使用Dynal CD34体外分离系统收集人脐血CD34+细胞, 无血清甲基纤维素半固体法体外培养CD34+细胞12 d后, 显微镜下观察hNUDC对CD34+细胞分化增殖为小、中、大巨核细胞集落的形态、数目的影响;无血清液体培养体系培养CD34+细胞10 d后, 流式细胞术检测hNUDC对CD34+细胞分化增殖为CD41+细胞的表达率及其DNA倍性的影响.结果:hNUDC能够明显促进CD34+细胞分化增殖形成中小型CFU-MK集落, 可显著增加巨核细胞表面标志物CD41+的表达, CD41+细胞中DNA倍性显著地高于血小板生成素.结论:hNUDC对促进造血干细胞增殖和分化为巨核细胞具有重要作用.
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中枢神经系统恶性肿瘤DNA倍性与预后相关性研究
目的 研究中枢神经系统恶性肿瘤DNA倍性和预后的相关性.方法 44例肿瘤,包括神经上皮肿瘤、脑膜肿瘤和转移性肿瘤,以肿瘤组织为处理组,瘤周脑组织为对照组.肿瘤和瘤周组织均以胰酶消化法制备成单细胞悬液,碘化丙碇(PI)染色后,流式细胞仪检测细胞DNA倍性.结果 正常二倍体肿瘤27例,占61.36%;非正常二倍体肿瘤中:异常二倍体14例,占31.82%;四倍体3例,占6.82%.F检验显示,正常二倍体组临床无瘤生存期(6.19±3.37个月)显著长于非正常二倍体组(4.35±4.03个月,P=0.0076).结论 肿瘤细胞DNA倍性和预后存在相关性,可成为多种中枢神经系统恶性肿瘤预后预测指标之一.
