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激光捕获显微切割结合定量PCR检测NES1 mRNA在胃癌中的表达及其甲基化状态
目的:探讨正常上皮细胞特异性-1基因(NES1)在正常胃组织及胃癌组织中的表达和受甲基化调控的影响.方法:利用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术分离胃癌患者活检组织中的癌细胞和正常上皮细胞,采用荧光定量PCR检测其中NES1 mRNA的表达,甲基化特异性PCR观察NES1基因外显子3 CpG岛甲基化状态.结果:荧光定量PCR结果显示,NES1 mRNA在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃上皮细胞(P＜0.05).甲基化特异性PCR检测胃癌组织癌细胞中NES1外显子3 CpG岛甲基化状态发现,大部分肿瘤患者NES1外显子3 CpG岛均存在不同程度甲基化,其中完全甲基化7例(33.3%),不完全甲基化12例(57.14%);而正常细胞中存在不完全甲基化仅为1例(5%),其余19例均不存在甲基化(95%).结论:激光显微切割结合荧光定量PCR技术可较精确地检测NES1在胃癌组织细胞和正常组织细胞中的表达.NES1在胃癌中表达降低,其表达降低与NES1基因外显子3甲基化有关.
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正常上皮细胞特异性-1基因在胃癌细胞株中的表达及甲基化调控
目的:研究正常上皮细胞特异性-1(NES1)基因表达及其CpG岛甲基化状况与胃癌的关系.方法:分别培养胃癌细胞MKN-28(高分化)、SGC-7901、AGS(均中分化)、MKN-45(低分化)、HGC-27(未分化)和原代正常胃上皮细胞.提取细胞RNA,经RT-PCR检测NES1在各细胞株中的表达.以不同浓度DNA去甲基化抑制剂5-aza-dc处理胃癌细胞,RT-PCR检测其NES1 mRNA表达.提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后MSP分析其CpG岛甲基化状态.结果:各肿瘤细胞株中NES1 mRNA表达较胃正常上皮细胞有不同程度降低.甲基化检测显示NES1表达减少的胃癌细胞株均存在不同程度的NES1基因外显子3 CpG岛甲基化.NES1表达降低的胃癌细胞株经5-aza-d处理后NES1表达上调.结论:NES1胃癌细胞株中低表达,表达下调与该基因外显子3周围CpG岛甲基化有关.5-aza-dc可使NES1表达降低的胃癌细胞株重新表达NES1 mRNA.提示NES1基因CpG岛甲基化可能是NES1在胃癌细胞系中表达缺失的分子机制.
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NES1蛋白在胃癌中的表达及其临床意义
正常上皮细胞特异性-1基因(NES1),又称人组织激肽释放酶10(kallikrein10,KLK10)[1],在调控正常上皮细胞生长、分化等方面起一定作用.激肽释放酶(kallikreins,KLK)存在于不同组织和生物液体中,参与多种疾病的发生、发展,具重要的生物学功能[2,3].胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,NES1基因作为一种在上皮细胞中表达的抑癌基因[4],其在胃癌发生、发展中的作用尚不清楚.本研究通过免疫组化的方法分析了NES1在正常胃组织和胃癌组织中的表达,探讨其在胃癌发生发展中的作用.
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NES1基因在乳腺癌中的表达意义
目的:探讨NES1mRNA与蛋白的表达在乳腺癌发生、发展中的意义.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测43例乳腺良、恶性肿瘤及其相应的正常乳腺组织中NES1mRNA及蛋白表达情况.结果:14例乳腺良性肿瘤及1例正常乳腺组织中NES1基因mRNA和蛋白的表达明显高于30例乳腺恶性肿瘤组织中的表达(P＜0.05),6例(75%)行术前化疗的病人肿瘤组织中NES1的表达明显增高.结论:NES1可作为一种肿瘤抑制基因和分子标志物,其表达失活可能与乳腺癌的发生、发展有关.术前化疗可能是影响其表达因素之一.但是否能将NES1基因的表达情况作为乳腺癌诊断和(或)预后指标,还有待于更进一步的研究结果来证实.
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NES1在人子宫内膜腺上皮细胞及子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达
目的：研究正常上皮细胞特异性-1基因（normal epithelial cell specific-1，NES1）在人正常子宫内膜腺上皮细胞和子宫内膜癌细胞Ishikawa中的表达。方法：原代培养人子宫内膜腺上皮细胞，用免疫荧光定量PCR及Western blot的方法检测NES1在子宫内膜腺上皮细胞和Ishikawa细胞中的表达。结果：成功培养人子宫内膜腺上皮细胞；NES1在正常人子宫内膜腺上皮细胞中表达，表达定位在细胞质。NES1在Ishikawa细胞中表达较在子宫内膜腺上皮细胞中明显降低（P<0.05）。结论：NES1基因表达缺失可能是子宫内膜癌的发生机制。
关键词： NES1基因 子宫内膜癌 子宫内膜腺上皮细胞 Ishikawa细胞 -
NES1基因的研究进展
NES1基因(normal epithelial cell specific-1) 即正常上皮细胞特异性-1基因,又称作人组织激肽释放酶10(kallilkrein10,KLK10),属于人类组织激肽释放酶家族成员,是1996年Liu等[1]用差异杂交法从正常乳腺细胞株76N及经放射照射变异细胞株76R-30中分离出的新基因.该基因在腺上皮等许多组织中有表达,参与正常上皮细胞生长、分化调控,并在多种肿瘤发生、发展中存在异常表达,但具体的作用机制还不清楚.近来探讨NES1基因的表达与肿瘤相互关系,及其在肿瘤诊断和预后方面的应用已成为国内外研究的热点.
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NES1基因在结肠癌细胞中表达及意义
目的：探讨NES1基因在结肠癌细胞中表达及意义。方法用RT-PCR方法检测NES1mRNA在正常结肠细胞、结肠癌细胞株HT29、HCT116表达情况。结果 NES1在结肠癌细胞株中表达较正常结肠黏膜细胞明显增高。结论 NES1基因在结肠癌的发生发展中起重要作用，这为选用NES1作为结肠癌治疗靶点提供了实验依据及理论基础。
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NES1基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的 探讨NES1基因在HCC发生发展中的作用及意义.方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测30例HCC患者癌组织、癌旁肝组织以及10例正常肝组织中NES1mRNA表达情况.结果 NES1mRNA在HCC组织中的表达水平显著低于在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达水平；NES1mRNA的表达水平与肿瘤大小、肿瘤数为单个或多个、脉管癌栓及临床分期均呈负相关性(R＜0.05).结论 NES1mRNA的低表达或表达缺失可能与肝细胞肝癌的发生、发展密切相关；NES1在HCC的发生发展中具有重要地位.
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NES1基因的研究进展
NES1基因(normal epithelial cell specific-1)又称作人组织激肽释放酶10(kallilkrein10,KLK10),属于人类组织激肽释放酶家族的一员.NES1基因位于19 q13.3,编码分泌性丝氨酸蛋白酶(hk10).NES1在许多人体正常组织中表达,但在肿瘤组织中表达下降或不表达.NES1基因为一种近年来发现的新型抑癌基因,由于其表达下降或缺失与肿瘤的发生发展密切相关,NES1基因第三外显子高甲基化是基因沉默的主要机制.NES1基因的表达和其DNA的高甲基化能否作为肿瘤的诊断和预后的分子生物学标志,近年来越来越成为国内外研究的热点.
关键词： NES1基因 人组织激肽释放酶10 抑癌基因 -
分泌性蛋白hk10在眼睑基底细胞癌中的表达
目的:研究在眼睑基底细胞癌(basal cell carcinoma,BCC)中NES1基因的分泌蛋白(human kallikrein 10,hk10)的表达情况,并分析其表达与表型之间的关系,从蛋白水平上研究NES1在BCC的发生发展过程中的作用.方法:采用免疫组化的方法检测hk10在31例眼睑BCC中表达情况,并分析其表达与表型之间的关系,采用Image-Pro Plus5.0图像分析系统对免疫组化结果进行扫描,定量分析hk10在不同组眼睑BCC中的表达.结果:免疫组化结果显示hk10主要表达在细胞浆中,呈棕黄色.在正常眼睑上皮组织中,hk10主要分布在上皮各层的鳞状上皮细胞胞浆中,靠近基底细胞层表达稍强；BCC原发组与BCC复发组在平均光密度上无显著性差异(P＞0.05),在累积光密度(IOD)上,二者的差异具有统计学意义,BCC原发组具有较强的表达.结论:hk10在正常眼睑上皮组织中高表达,在眼睑基底细胞癌(BCC)中,hk10明显表达下调；NES1阳性表达细胞的减少,可能在眼睑BCC的复发中起一定作用；NES1作为一种新的抑癌基因,其可以作为眼睑BCC的肿瘤分子标记.
