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抑制Livin基因对肺腺癌SPC-A1细胞增殖及顺铂敏感性的影响
目的:Livin是近年来发现的人类凋亡抑制蛋白(inhibitorof apoptosis protein,IAP)家族的新成员,发现在多数肿瘤中表达,与肿瘤发生有密切关系,并可能作为肿瘤诱导凋亡治疗的新靶点.本研究旨在探讨siRNA-Livin和夫拉平度(Flavopiridol,FP)协同凋亡诱导配体(TRAIL)两种方式有效抑制Livin表达,诱导非小细胞肺癌SPC-A1凋亡并增强对化疗药物顺铂的敏感性.方法:siRNA-Livin转染SPC-Al,Real-Time PCR检测Livin基因的表达水平,MTT检测干扰组和干扰加药组肿瘤细胞的增殖及活性;TRAIL、FP单独及联合作用诱导细胞凋亡,蛋白质印迹法检测凋亡抑制蛋白Livin的表达水平,MTT检测各处理组细胞的增殖及活性.结果:100 nmol/LFP处理组(F)细胞存活率为(84.30± 1.34)％,100 ng/mLTRAIL处理组(T)为(93.40± 1.56)％,FP和TRAIL联合组(F+T)为(48.02± 1.35)％,siRNA-Livin处理组为(50.88± 1.14)％,1.2 μg/mL Cisplatin处理组为(19.30±0.89)％,siRNA-livin+Cisplatin组为(14.37±0.81)％,FP+T+Cisplatin组为(10.86±0.87)％,C组存活率为100％.F+T组对细胞的增殖抑制作用显著高于单独用药组,siRNA-livin+Cisplatin与siRNA-Livin组相比、FP+T+Cisplatin与FP+T组相比都显著增强了化疗药物对SPC-A1的杀伤作用.50 μmol/LZ-VAD-FMK预处理后联合用药组细胞的存活率为(88.16± 1.64)％,caspase抑制剂能明显抑制F+T联合处理组的凋亡效应.结论:RNA干扰和F+T联合用药都能显著降低凋亡抑制蛋白Livin的表达,有效抑制肿瘤细胞的增殖生长,并增强肿瘤细胞对化疗药物顺铂的敏感性,为肺腺癌的靶向治疗提供新的理论依据.
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细胞内钙在内皮素-1促肺腺癌细胞SPC-A 1生长中的作用
目的:探讨细胞内钙离子([Ca2+]i)在内皮素-1(endothelin-1,ET-1)促肺腺癌细胞SPC-A 1生长中的作用及其机制.方法:采用RT-PCR法检测肺腺癌细胞SPC-A 1中ET-1及内皮素受体(endothelin receptor, ETR)的mRNA表达,蛋白印迹法检测SPC-A 1细胞中ET-1及ETR的蛋白表达,MTT法检测细胞生长, Fura-2/AM荧光技术检测[Ca2+]i.结果:肺腺癌细胞SPC-A 1上有ET-1及内皮素受体A(ETAR)及受体B(ETBR)的mRNA及蛋白表达;ET-1(10-15～10-8 mol/L)具有促进SPC-A 1细胞增殖作用,也促进其[Ca2+]i浓度升高,作用均呈浓度依赖性;ET-1(10-10 mol/L)促SPC-A 1细胞增殖及[Ca2+]i浓度升高作用均可被ETAR拮抗剂BQ 123(10-7 mol/L)阻断(P＜0.05),但不受ETBR拮抗剂BQ 788(10-7 mol/L)影响(P＞0.05);去除细胞外Ca2+及电压依赖型Ca2+通道阻滞剂硝苯地平(1 μmol/L)在阻断ET-1升高[Ca2+]i浓度作用的同时也抑制ET-1诱导的肺腺癌细胞增殖.结论:ET-1通过ETAR促SPC-A 1细胞生长及增加[Ca2+]i, 细胞外Ca2+通过电压依赖型钙离子通道开放内流是ET-1增加[Ca2+]i及促肺腺癌细胞SPC-A 1增殖的主要机制.
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miRNA-181c对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响
目的 探讨miRNA-181 c(miR-181c)在人肺腺癌组织中的表达及其对人肺腺癌细胞系SPC-A1增殖和侵袭的影响.方法 收集37例肺腺癌患者组织标本,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测肺腺癌组织及相应癌旁组织中miR-181c的表达水平.脂质体法将miR-181c模拟物和miR-181c抑制剂分别转染至SPC-A1细胞中,CCK-8增殖实验检测转染后SPC-A1细胞的增殖能力,Transwell法检测转染后SPC-A1细胞的侵袭能力.结果 肺腺癌组织中miR-181c的表达水平[3.259(1.637,4.920)× 10-3]高于癌旁组织[2.008(1.200,3.292)× 10-3],差异有统计学意义(U=-641.0,P＜0.05).miR-181c的表达水平与淋巴结转移密切相关(P＜0.05).转染SPC-A1细胞120 h后,miR-181c模拟物转染组的细胞增殖能力高于于阴性对照组,差异有统计学意义(2.029±0.034 vs 1.476±0.071;t =7.044,P＜0.01);而miR-181c抑制剂转染组细胞的增殖能力弱于阴性对照组,差异有统计学意义(0.998±0.050 vs 1.414±0.058;t =5.461,P＜0.01).Transwell结果显示,转染miR-181c模拟物后SPC-A1侵袭能力显著增强(432.00±12.22 vs 219.50 ±9.31;t=14.11,P＜0.01),转染抑制剂后侵袭能力显著减弱(73.60±5.32 vs 227.30±11.27;t=11.52,P＜0.01).结论 miR-181c在肺腺癌组织中高表达,并能促进SPC-A1细胞的增殖与侵袭.
关键词： 肺腺癌 微小核糖核酸181c SPC-A1 增殖 侵袭 -
肿瘤远处转移与血浆DNA水平相关性研究
目的：探讨肿瘤转移与血浆DNA水平之间的关系，评价早期诊断肿瘤转移的方法。方法：将人肺腺癌SPC-A1细胞接种到BALB/c小鼠腹腔，每周定期检测血浆DNA水平，7周后处死小鼠，观察肿瘤形成及转移情况。结果：小鼠血浆DNA水平呈升高趋势的占75.6％(34/45只)；其中接种后第3周起血浆DNA水平均比接种后第1周显著升高(P＜0.05)。血浆DNA水平升高及持续升高组小鼠中有肺转移瘤形成的占73.5％(25/34只)。无升高组小鼠中有肺转移瘤形成的占27.3％(3/11只)。血浆DNA水平升高组及持续升高组均显著高于无升高组(P＜0.05)。血浆DNA水平与肿瘤负荷正相关(R2=0.8703)。结论：形成肺转移瘤的BALB/c小鼠血浆DNA水平在早期即显著升高，血浆DNA水平可用于肿瘤转移的早期监测。
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人肺腺癌SPC-A1荷瘤裸鼠中RNAi靶向沉默FAK的作用
目的:通过用脂质体包裹靶向局部粘着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)基因的短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)质粒(shRNA-FAK),探讨该方法对荷瘤裸鼠中人肺腺癌SPC-A1的抑制效果.方法:用脂质体包裹shRNA-FAK,并通过尾静脉注射治疗荷瘤裸鼠,通过肿瘤生长曲线和重量,肿瘤组织形态学,肿瘤中的FAK蛋白表达情况、CD31、VEGF、PCNA和TUNEL检测,分析该方法对荷瘤裸鼠中人肺腺癌SPC-A1的抑制效果.结果:荷瘤裸鼠经过脂质体shRNA-FAK治疗后,肿瘤生长速度明显缓于对照组(P＜0.05),肿瘤重量明显低于对照组(P＜0.05).肿瘤组织的免疫组化、western blot和TUNEL检测显示与对照组相比,治疗组FAK蛋白表达降低(P＜0.05)、血管生成和细胞增殖均减少(P＜0.05)、凋亡细胞增加(P＜0.05),荷瘤裸鼠主要脏器形态学正常.结论:FAK特异性的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能够在体内阻断FAK蛋白的表达,使组织内FAK蛋白的表达相应地减少,并进一步诱导肿瘤细胞的凋亡,终导致肿瘤的生长速度减缓.
