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蜂毒明肽的原核表达及纯化
目的 原核表达并纯化蜂毒明肽.方法 人工合成蜂毒明肽基因,与肠激酶识别序列基因串联,插入原核表达载体pGEX-2T中,构建蜂毒明肽与谷胱甘肽硫转移酶的融合表达载体pGEX-APAM.将重组质粒转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定,并进行纯化和肠激酶切割.结果 经Western blot鉴定,表达产物具有良好的反应原性.在优化的表达条件下,融合蛋白的表达量约占菌体总蛋白的25.8%,且大部分以可溶性形式存在.纯化的融合蛋白纯度大于95%,每毫克融合蛋白经肠激酶切割后,可得蜂毒明肽58.5μg,回收率为81.9%.结论 已成功地原核表达并纯化了蜂毒明肽.
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蜂毒明肽对阿尔茨海默病小鼠认知功能的影响
目的 观察蜂毒明肽对阿尔茨海默病(AD)小鼠认知功能的影响.方法 10周龄昆明种雌性小鼠60只,随机分成6组,每组10只,分别为正常对照组、假手术组、AD模型组、蜂毒明肽低剂量组、蜂毒明肽中剂量组、蜂毒明肽高剂量组.正常对照组不做任何处理,假手术组小鼠侧脑室注射生理盐水.采用侧脑室注射β-淀粉样肽25-35(β-amyloid protein,Aβ25-35)法构建AD小鼠模型.造模14 d后,蜂毒明肽干预的各组小鼠分别腹腔注射不同剂量的蜂毒明肽,连续5d.Morris水迷宫测试认知功能,免疫组化染色观察海马CA1区Aβ25-35的表达.结果 与正常对照组相比,蜂毒明肽各组和AD模型组小鼠逃避潜伏期时间较长,目标象限停留时间较短,穿越平台次数降低,海马CA1区Aβ25-35阳性表达增强(P均＜0.05),而假手术组无统计学差异(P均＞0.05).蜂毒明肽中、高剂量组小鼠与AD模型组小鼠相比,前者逃避潜伏期有所缩短,目标象限停留时间增加,穿越平台次数有所增多,海马CA1区Aβ25-35阳性表达有所减低(P均＜0.05).结论 蜂毒明肽能提高AD小鼠认知功能,减少海马CA1区Aβ25-35的表达.
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蜂毒与蜂针疗法的作用机制及其在类风湿关节炎和骨关节炎治疗中的应用
蜂毒与蜂针疗法是外治法中的一种，具有良好的抗炎及镇痛作用，主要通过影响炎症细胞因子释放、调节疼痛信号传导等起效，临床常用于治疗类风湿关节炎和骨关节炎。虽然有关蜂毒与蜂针疗法的基础研究较多，对其作用机制的阐述较为详细，但临床研究较少。开展蜂毒与蜂针治疗骨伤科疾病的临床研究，为临床提供循证医学证据，是未来研究的重点。
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蜂毒明肽对重症急性胰腺炎合并肾损伤大鼠肾功能的保护作用
目的 探讨蜂毒明肽对重症急性胰腺炎(SAP)合并肾损伤大鼠肾功能的影响.方法 将32只SD大鼠分为假手术组(SO组)、SAP组、蜂毒明肽组(Apamin组)、溶剂对照组(DMSO组)各8只.采用胆胰管逆行注射牛黄胆酸钠构建重症急性胰腺炎大鼠模型,其中并对Apamin组大鼠应用蜂毒明肽进行干预,测定术后12 h各组大鼠的血清淀粉酶,脂肪酶及血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)及白细胞介素-6(IL-6)水平,并观察大鼠胰腺及肾脏病理改变.结果 Apamin组及SAP组的淀粉酶、Scr、BUN、TNF-α、IL-1、IL-6水平以及胰腺及肾脏病理评分均高于SO组(P＜0.05),Apamin组的以上指标均低于SAP(P＜ 0.05).结论 蜂毒明肽能够减轻SAP所致的炎症反应进而缓解其引发的肾损伤.
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小电导钙激活钾通道的研究进展
小电导钙激活钾通道(SKca)是钙激活钾通道家族成员之一,它具有K+选择性、Ca2+高敏性和电压不依赖性等特性,以及调节神经元放电的功能,可能与学习记忆失调、小脑共济失调、癫痫等疾病有关.深入地了解小电导钙激活钾通道,将有助于揭示某些疾病的发病机制,并为临床治疗提供依据.
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蜂毒明肽对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病模型的体内外作用研究
目的 初步探讨蜂毒明肽对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病(AD)模型的体内外干预作用.方法 侧脑室注射Aβ25-35构建AD小鼠模型.连续5d腹腔注射0.2 mg/kg蜂毒明肽.小鼠跳台测试认知功能,免疫组化检测海马CA1区Aβ1-42表达.10 μmol/L Aβ25-35诱导海马神经元构建细胞损伤模型.100 nmol/L蜂毒明肽干预24 h后,MTr法检测细胞存活率,Hoechst33342染色检测细胞凋亡率,全细胞膜片钳技术检测海马神经元小电导钙激活性钾通道介导的中间后超极化电流(ImAHP).结果 动物实验显示,与模型组比较,蜂毒明肽组小鼠学习成绩错误次数减少,潜伏期延长、记忆成绩错误次数减少,Aβ1-42表达减低(P＜0.05).细胞实验显示,蜂毒明肽组较模型组海马神经元存活率增加,凋亡率下降,ImAHP减小(P＜0.05).结论 蜂毒明肽对Aβ25-35诱导的AD模型具有保护作用,其机制可能与减少Aβ表达,降低ImAHP有关.
