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脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞体外生长及细胞内固醇调节元件结合蛋白-1、肝脏X受体基因mRNA转录水平的时序性影响
目的 分析脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)体外生长及细胞内固醇调节元件结合蛋白-1 (sterol regulatory elementbinding protein 1,SREBP-1)和肝脏X受体(liver Xreceptor,LXR)基因mRNA转录水平的时序性影响.方法 原代培养BMECs,用LPS(终浓度为10μg/mL)分别刺激BMECs 0、1、3、6、12、24和48 h后,显微镜下观察细胞状态,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测BMECs中SREBP-1及LXR基因mRNA的时序性表达水平.结果 LPS刺激BMECs 0、1、3h后的生长状态良好,细胞形态饱满,胞浆丰富,无任何肉眼可见变化;LPS刺激6h后,BMECs开始出现明显收缩、变圆,细胞间隙增大,细胞突起减少.与LPS刺激0h比较,LPS刺激BMECs 1 h后可显著下调LXR基因mRNA转录水平(P＜0.05),刺激3h后可显著下调SREBP-1基因mRNA转录水平(P＜0.05),且均随时间的延长呈逐渐降低趋势(P＜0.05),均于LPS刺激12h时达低,刺激24及48 h后LXR及SREBP-1基因mRNA转录水平均明显高于12 h,24和48 h间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LPS可对BMECs产生严重损伤,能有效抑制BMECs中SREBP-1及LXR基因mRNA转录水平,且具有一定的时间依赖性.
关键词： 奶牛乳腺上皮细胞 脂多糖 固醇调节元件结合蛋白-1 肝脏X受体 -
金黄色葡萄球菌促进奶牛乳腺上皮细胞NOD2的表达
目的 研究金黄色葡萄球菌对奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)核苷酸结合寡聚化结构域2(NOD2)表达的影响.方法 采用金黄色葡萄球菌及热灭活的金黄色葡萄球菌菌液刺激BMEC,金黄色葡萄球菌以感染复数(MOI) 100∶1感染细胞0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4h,以MOI 10∶1、20∶1、40∶1、100∶1感染细胞2h;用(0、104、105、106、107、108)集落形成单位(CFU)/mL热灭活的金黄色葡萄球菌菌液刺激细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测NOD2 mRNA和蛋白水平.结果 金黄色葡萄球菌在感染细胞0.5～4h,NOD2 mRNA和蛋白含量较未感染组显著升高,不同MOI的金黄色葡萄球菌感染细胞后,随着MOI的增加,NOI2 mRNA和蛋白水平也显著升高;与对照组相比,不同剂量的热灭活的金黄色葡萄球菌菌液处理细胞的NOD2 mRNA和蛋白含量无显著变化.结论 金黄色葡萄球菌促进BMEC NOD2的表达.
