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大肠杆菌中外源蛋白高效表达的影响因素及策略研究的新进展
大肠杆菌表达系统因为其遗传背景清楚,低成本,高生产率,特征明确,兼容多种抗体[1]使之成为目前常用的外源蛋白原核表达系统.近年来,重组大肠杆菌的高密度发酵是现代基因工程产品大规模生产的重要技术.采用高密度发酵技术,提高菌体的发酵技术,提高菌体的发酵密度,终提高产物的比生产率,不仅可以减少培养体积、优化下游分离提取,还可以缩短生产周期、降低生产成本,从而极大地提高在市场上的竞争力.然而在研究高效发酵过程中,人们往往会遇到表达效率难以得到大限度的提高与产率较低等问题.因此本文将就外源基因本身特性对于高效表达的影响,表达系统的特性对于高效表达的影响,外源基因与系统间的相互作用及其他因素等方面阐明外源基因高效表达的影响因素.终总结出一套高效表达的策略.
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人内皮生长抑素基因在大肠杆菌中的高效表达及活性检测
目的获得具有抑制血管内皮细胞生长活性的人重组内皮生长抑素(endostatin)蛋白,以研究其在治疗肿瘤及血管性疾病中的潜在应用价值.方法从人的胎盘中分离总RNA经反转录聚合酶链反应(RT-PCR), 得到endostatin的全基因,并将其与质粒pUCm-T重组,测序证明获及的人内皮生长抑素基因的序列与先前报道一致后,用限制性内切酶将其切下与表达载体pET-11a重组,转化受体菌BL-21(DE3)中,用IPTG诱导以包涵体形式表达,经层析纯化,鸡绒毛尿囊膜血管(CAM )检测活性.结果经SDS-PAGE检测,重组人内皮生长抑素蛋白的分子量为2 0 KD,表达量约占蛋白总量的40%.纯化后的内皮生长抑素对鸡的绒毛尿囊膜血管的生长有明显的抑制作用.结论得到了具有生物活性的重组人内皮生长抑素蛋白,为下一步的临床肿瘤及血管性疾病的治疗奠定了基础.