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烟酰胺腺嘌呤二核苷酸对精子DNA碎片化指数的影响
目的 研究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)对精子DNA碎片化的作用,并探讨此过程中的分子生物学机制.方法 在差异浓度NAD(0、1、10、100、1 000 μmol/L)孵育下,观察适宜的精子NAD孵育浓度;采用BioVsion公司生产的NAD/NADH定量试剂盒测定精子NAD水平;采用流式细胞仪观察精子DNA碎片率和染色质成熟度;采用实时定量PCR观察精子DNA单链修复酶PARP1和双链修复酶BRCA1的转录水平.结果 10 μmol/L NAD孵育即能显著增加精子NAD含量.在精子内NAD水平显著升高的同时,精子DNA碎片率明显降低,然而精子染色质成熟度不受精子NAD水平的影响.精子内NAD水平能显著影响精子内DNA单链修复酶PARP1和双链修复酶BRCA1的转录水平.结论 这些结果初步提示,精子内NAD水平可能通过调节DNA修复系统,参与精子DNA损伤修复.
关键词： 精子 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 DNA碎片指数 -
精索静脉曲张不育患者氧化应激水平和精子DNA完整性及精液参数的相关性分析
目的:分析精索静脉曲张(VC)不育患者氧化应激同DNA完整性及精液参数的关系. 方法:采用前瞻性研究,纳入98例患者,根据活性氧水平(ROS)将VC不育患者分为ROS低水平组(54例)及高水平组(44例),分析两组精子DNA碎片指数(DFI)、精子活力、形态等参数的差异,并分析它们之间的相关性. 结果:ROS高水平组DFI显著高于ROS低水平组[(34.49±6.05)％ vs (27.38±8.10)％,P=0.039].与ROS低水平组比较,ROS高水平组精子活力[(25.21 ±18.22)％vs(36.16 ±22.83)％,P=0.017]、前向运动精子百分率[(16.34±9.22)％ vs (23.34+11.53)％,P=0.041]、曲线速率[(20.62±4.38)％vs (27.03±6.21)％,P=0.013]及直线性率[(18.30±7.93)％vs(29.75±8.24)％,P=0.024]均显著降低,而精液白细胞数显著升高[(0.86±0.41)×106/ml vs (0.65±0.15)×106/ml,P=0.022].Spearman相关性分析表明ROS水平同精液白细胞数(r=0.41,P＜0.01)及DFI(r =0.21,P=0.006)呈显著正相关,同曲线速率(r=-0.24,P=0.017)、直线性率(r=-0.24,P=0.021)、精子活力(r=-0.31,P=0.002)及前向运动精子百分率(r=-0.41,P=0.012)呈显著负相关.DFI同精子活力(r=-0.29,P＜0.01)、前向运动精子百分率(r=-0.34,P＜0.01)呈显著负相关. 结论:精浆ROS水平同VC不育患者DFI显著正相关.氧化应激及DNA完整性可影响患者的精子参数.
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优选后精子DNA完整性对IVF胚胎发育及临床结局的影响
目的:探讨优选后精子DNA完整性对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中胚胎发育及临床结局的影响.方法:选取2013年1月1日至2014年12月31日因单纯输卵管性不孕行常规IVF的605个周期的临床资料.取卵日,将授精剩余精子采用精子染色质扩散(SCD)实验检测DNA碎片.采用受试者工作特征(ROC)曲线和约登指数,根据优选后DNA碎片指数(DFI)预测IVF种植失败(种植率=0％)、早期流产、受精失败(受精率＜25％)的阈值进行分组,分析DFI与1VF结局的相关性. 结果:根据所得DFI相应阈值分为＜5％、(5～ 10)％、(10～15)％、≥15％4组.受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、早期流产率、活产率各组差异有统计学意义(P均＜0.05),多胎妊娠率、早产率、低出生体重率各组差异无统计学意义(P均＞0.05).DFI与受精率、卵裂率、优质胚胎率、临床妊娠率、活产率均呈负相关,r分别为-0.32、-0.19、-0.40、-0.20、-0.09,P分别为＜0.01、＜0.01、＜0.01、＜0.01、0.04;与早期流产率呈正相关(r=0.23,P＜0.01);与多胎妊娠率、早产率、低出生体重率无显著相关性,r分别为-0.01、0.04、0.03,P分别为0.83、0.54、0.62. 结论:优选后精子DNA完整性影响IVF受精、胚胎发育、早期流产和活产结局,与早产和低出生体重的相关性尚需深入研究.
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优选后精子畸形指数、顶体异常率、DNA碎片指数预测IVF受精失败的价值
目的:探讨优选后精子畸形指数(SDI)、顶体异常率(AAR)、DNA碎片指数(DFI)预测常规体外受精(IVF)失败的价值. 方法:选取2013年6月至2015年6月因单纯输卵管性不孕行常规IVF的695个周期,以受精率＜25％为受精失败分为受精正常组(603个周期)和受精失败组(92个周期).取卵日分别采用快速染色法(Diff-Quik)、豌豆凝集素-异硫氰酸荧光素染色法(PSA-FITC)和精子染色质扩散实验(SCD),对授精剩余精子进行形态、顶体和DNA碎片检测.Logistic方程建立联合预测因子(JP),受试者工作特征(ROC)曲线分析各指标对IVF受精失败的预测价值. 结果:SDI、AAR、DFI均与IVF受精率呈负相关,r分别为-0.07、-0.49、-0.21(P分别为0.03、＜0.01、＜0.01).受精正常组SDI、AAR、DFI水平分别为1.24±0.20、(7.75±2.28)％、(7.87±3.15)％,受精失败组SDI、AAR、DFI水平分别为1.42±0.15、(12.02±3.06)％、(13.32±4.13)％,差异均有统计学意义(P均＜0.05).SDI、AAR、DFI都是IVF受精失败的危险因素,OR分别为2.68、14.11、3.85(P分别为0.01、＜0.01、＜0.01).SDI、AAR、DFI及JP的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.651±0.033、0.895±0.019、0.789±0.022、0.915±0.017.根据约登指数得出SDI、AAR、DFI的预测阈值分别约为1.45、10％、12％. 结论:优选后精子SDI、AAR、DFI与IVF受精率密切相关,对IVF受精失败均有预测价值,本实验室的适宜参考阈值分别为1.45、10％、12％.单项指标以AAR的预测价值大,但JP优于AAR.
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玻璃化冷冻与慢速冷冻对微量精子活动力和DNA完整性的影响
目的 比较玻璃化冷冻与慢速冷冻微量精子对精子活力和DNA完整性的影响.方法 取70份正常精液标本上游处理后,每份标本分别进行慢速冷冻和玻璃化冷冻.观察冷冻前及2组冷冻组复苏后精子活动率和DNA碎片指数(DFI),比较两种方法的冷冻效果.结果 冷冻前精子活动率和DNA碎片指数分别为(93.24±2.26)%和(6.70±5.78)%;玻璃化冷冻复苏后精子活动率及DFI分别为 (63.07±6.69)%和(9.26±7.00)%;慢速冷冻复苏后精子活动率及DFI分别为(63.99±5.88)%和(9.58±6.89)%.两种方法复苏后精子活动率均较冷冻前显著性降低(P<0.05),两种方法复苏后精子DFI均较冷冻前显著性升高(P<0.05),两种冷冻方法复苏后精子活动率和精子DFI差异无统计学意义(P>0.05).结论 玻璃化冷冻和慢速冷冻均导致精子活动率下降及DNA损伤,但两种冷冻方法之间无显著差异.
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精子DNA损伤与常规体外受精—胚胎移植结局关系研究
目的:探讨精子DNA损伤对常规体外受精—胚胎移植(IVF-ET)胚胎质量结局及临床结局的影响.方法:对169例行常规IVF治疗的夫妇用精子染色质扩散实验(SCD)测定精子DNA碎片率(DFI),据DFI值将患者分为DFI＜15％、30％＞DFI≥15％和DFI≥30％3组,比较3组间受精率、正常受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优质胚胎率、着床率、临床妊娠率和流产率并进行相关性分析.结果:精子DFI≥30％组受精率、正常受精率均显著低于DFI＜15％组和30％ ＞DFI≥15％组(P＜0.05),其余指标3组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).精子DFI与IVF-ET受精率、正常受精率呈显著负相关关系(r=-0.284,-0.187,P＜0.05).精子DFI预测受精异常的ROC曲线下面积为0.669(95％ CI 0.534～0.803),截断值30.70％,敏感性41.67％,特异性93.10％.结论:精子DNA损伤对IVF-ET中的受精情况有负面影响,可用于预测受精异常.
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精浆EO水平对精子PR百分率的影响及其与精子DFI、精浆MDA的关系
目的 探讨精浆中内源性哇巴因(EO)对弱精症患者精子DNA碎片指数(DFI)、精浆丙二醛(MDA)、精子前向运动指数(PR)百分率的影响.方法 选取2015年1月至2016年3月该院不孕不育男科收治的110例弱精症患者(弱精组)、50例健康成年男性(对照组),检测两组精浆及精液相关参数并进行比较分析.结果 弱精组患者的DFI、精浆MDA、精浆EO均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);弱精组患者的精子浓度、精浆Fru、精浆ACP、PR均低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05),弱精组和对照组的精液量差异无统计学意义(P>0.05);弱精组患者的精浆中EO与患者DFI、精浆MDA呈正相关关系(r=0.396、0.427,P<0.05),弱精组患者的精浆中EO水平与患者PR呈负相关关系(r=-0.471,P<0.05).结论 精浆中EO水平对弱精症患者精子DFI、精浆MDA、PR百分率有明显的影响.
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精子 DNA损伤对常规体外受精-胚胎移植结局的影响
目的 探讨精子DNA损伤对精液参数及常规体外受精-胚胎移植( in vitro fertilization and embryo transfer, IVF-ET)结局的影响.方法 选择2012年10月至2014年11月在四川省妇幼保健院行IVF-ET的169对不孕夫妇的资料,用精子染色质扩散实验( sperm chromatin dispersion, SCD)测定男性患者精子DNA碎片率(DNA fragmentation index, DFI),同时行常规精液分析;按DFI值将男性患者分为A组(DFI<30 %)148例和B组(DFI≥30 %)21例,比较两组精液参数、受精率、正常受精率、卵裂率、可利用胚胎率、优质胚胎率、临床妊娠率和着床率. 结果 B组男性平均年龄高于A组( P<0. 05 );B组精子浓度、前向运动精子百分比、正常形态率、受精率、正常受精率均显著低于A组(P<0. 05);卵裂率、可利用胚胎率、优质胚胎率、临床妊娠率、着床率两组比较差异无统计学意义(P>0. 05). 结论 精子DNA损伤随男性年龄增加而增加,与精子浓度、前向运动精子百分比、正常形态率有关,对IVF-ET中的受精情况有负面影响.
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不育夫妇中男性精子DNA碎片指数变异的研究
目的 探讨不育夫妇中男性精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)的变异程度.方法 2009年4月至2012年4月,将539对不育夫妇中的539例男性纳入本研究.根据世界卫生组织标准(1999年),应用精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)试验对每名男性进行至少1次的重复精液常规分析和DFI检测,计算DFI的变异系数(coefficient of variation,CV),对DFI的变异程度及其影响因素进行统计分析.结果 539例男性中,有473例、59例、6例和1例分别行1次、2次、3次和4次重复精液常规分析和DFI检测,共计613次重复检测,重复检测和首次检测的间隔时间为0.5～34个月,中位数3.0(1.0～11.0)个月.539份首次检测样本间的DFI变异系数(between-sample coefficient of variation,CVB)为71.2％.与首次检测间隔0.5～3个月、3～12个月和12～34个月的DFI与首次检测的DFI比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).以18％作为男性生育力的DFI阈值,539例男性中有142例(26.3％,95％CI:22.6％～30.0％)的首次和重复检测DFI值分别位于阈值两侧.539例男性自身DFI的变异系数(within-subject coefficient of variation,CVw)为0.0～110.5％,中位数为26.0％(12.6％～42.8％),精子总数、精子浓度、精子活动力和精子形态的CVw的中位数分别为41.9％(21.8％～72.6％)、31.9％(15.1％～62.5％)、29.4％(13.2％～55.4％)和46.0％(22.4％～87.1％),各精液常规参数的CVw分别与DFI的CVw比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).DFI的CVw与精子总数、精子浓度和DFI重复检测的间隔时间密切相关(P＜0.05).结论 不育夫妇中的男性精子DFI是一个变异较大的参数,应对每例男性的DFI进行重复检测才能反映其精子DNA损伤的水平.
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精子DNA碎片率与男性年龄、精子活动力和体外受精结局关系的研究
目的 探讨精子DNA碎片率(DNA fragmentation index,DFI)与男性年龄、精液检查指标、体外受精(in vitro fertilization,IVF)的受精率、优质胚胎率、周期妊娠率和胚胎着床率等关系.方法 随机选取本院生殖中心111例IVF患者,使用流式细胞仪行精子DFI测定,DFI值按不同界值分组后,比较上述各项数据的组间差异,并行DFI值与男性年龄,精子活动力的相关性分析.结果 比较显示精子DFI值大于10%的夫妇其IVF正常受精率为60.5%,显著性低于DFI值小于10%的夫妇的IVF正常受精率70.1%(P＜0.05);相关分析表明DFI与男性年龄显著性正相关(r=0.624,P＜0.05),与直线运动精子百分率显著性负相关(r=-0.360,P＜0.05).未发现DFI与IVF优质胚胎率、周期妊娠率、胚胎着床率等指标的联系.结论 精子DFI值上升与男性年龄的增高有关.精子DFI值上升可影响精子活动力.DFI为10%的临界值对IVF临床受精率的估计有一定的指导意义.
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不育男性精子DNA损伤与年龄和精液常规参数的相关性研究
目的 探讨不育男性精子DNA损伤与年龄和精液参数的相关性. 方法 收集171例不育男性的精液标本,用精子染色质扩散实验( sperm chromatin dispersion, SCD)测定DNA碎片率( DNA fragmentation index, DFI) ,同时行常规精液分析;据DFI值将患者分为DFI＜15%、15%≤DFI＜30%和DFI≥30%组,比较组间年龄和各项精液参数,并进行相关性分析. 结果 各组间年龄、精子浓度、前向运动精子、正常形态率比较差异有统计学意义( P＜0. 05 );DFI与年龄、精子浓度、前向运动精子、正常形态率成负相关( P＜0. 05 ). 结论 精子DNA损伤随男性年龄增加而增加,与精液常规参数具有相关性,是评价男性生育力的一个较好指标.
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14例DFI值大于70男性患者精液常规及助孕结局分析
目的 分析14例来源行辅助生殖助孕DFI>70％的男性患者的精液常规数据及妊娠随访记录,就其DFI值对辅助生殖结局的影响进行讨论.方法 筛选2017年1月-2018年4月于新疆佳音医院生殖医学中心进行DFI检查的男性不育症患者,其中14例进行辅助生殖助孕,通过病历和随访记录回顾,对其精液常规检查报告和助孕结局进行分析.结果 14例患者精液浓度均正常,2例因取卵当日未获卵及个人原因放弃治疗,其余12例中,其中8例行ICSI,2例行IVF,1例因死精症行供精IVF,1例因曾有21三体患儿生育史行PGS,12例行辅助生殖助孕患者中,2例尚未到HCG查血日,其余10例中,已活产2例,胎儿健康无异常,确认妊娠6例,2例未妊娠.结论 高DFI可能会对胚胎产生不良影响,但对于高DFI患者而言,选择适合的助孕方式也可以得到理想的妊娠结局.
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男性不育症患者精子畸形率及 DNA完整性对辅助生殖技术助孕结局的影响
目的：探讨精子畸形率( SMR)和精子DNA碎片指数( DFI)对常规体外受精( IVF)助孕结局的影响。方法选取55对因男性少弱精子症实施IVF治疗夫妇为研究对象,根据男性精液精子形态检测分为SMR正常组( SMR《96％)和SMR异常组( SMR>96％)；根据DFI参数将患者分为DFI正常组( DFI《15％)和DFI异常组( DFI>15％),观察各组IVF助孕结局。结果 SMR正常组受精率及优胚率均明显高于SMR异常组(P<0.05),两组卵裂率、妊娠率和着床率比较差异无显著性(P>0.05)。 DFI正常组受精率、卵裂率及优胚率均明显高于DFI异常组(P<0.05),两组妊娠率和着床率比较差异无显著性(P>0.05)。 SMR和DFI均异常患者受精率、卵裂率及优胚率均明显低于两者均正常或者一项检测正常患者(P<0.05)。相关性分析显示,精子DFI与SMR呈显著正相关(r=0.517,P=0.049)。结论精子畸形率和DNA完整性呈正相关,两者对常规体外受精助孕受精率和优胚率影响显著。
