首页 > 文献资料
-
眼底图像对比度的调整
背景:眼底图像处理是眼底血管图像定量分析的必要前提,在实际操作过程中受仪器、噪声电流等因素的限制,图像的效果常常不甚理想,提高图像对比度是很必要的.目的:寻找一种较理想的调整图像对比度的方法.设计:对比分析.单位:解放军第三军医大学附属大坪医院设备科、阜阳肿瘤医院.方法:介绍调整图像对比度的两种方法,并选用幂函数曲线法,同时配合红色增强的分色处理,对其中的可控参数也进行分析.结果:用幂函数曲线法处理后的图像中间灰度值附近对比度变化的力度要大一些,灰度值在0处附近也没有全强行置0,也即没有失真现象.而对于分色处理,在红色增强的同时,也使颜色较浅的部分出现了淡淡的青蓝色,这是因为红色分量减少而是蓝绿分量突出的结果(对以上的结果分析都把平移参数假定为零).结论:用幂函数曲线法来提高眼底图像对比度的效果是比较好的.
-
新生小牛视网膜水平细胞生长发育特性的体外实验
目的:研究新生小牛视网膜水平细胞在体外培养中的生长发育规律.方法:分离培养新生小牛视网膜神经细胞,将培养10、20、30和40 d的细胞进行免疫细胞化学染色,采用Calbindin-D28K抗体标记视网膜水平细胞,用图像分析系统定量测量阳性细胞的免疫反应强度.结果:培养10 d的水平细胞还不具备典型的形态特征,培养20 d时阳性细胞的形态特征与成熟的水平细胞一致.培养30 d和40 d的水平细胞的形态特点和培养20 d时相似.定量分析显示体外培养20 d时阳性细胞免疫反应强度较10 d时有增加趋势.体外培养30 d和40 d时,阳性的水平细胞免疫反应强度较培养10 d和20 d时均明显减弱.结论:体外培养20 d的视网膜水平细胞具备成熟的形态特征,免疫反应强度较强,是发育良好的神经元.
-
牛视网膜毛细血管周细胞的原代培养
目的:建立牛视网膜毛细血管周细胞原代培养的方法.方法:以酶消化法原代培养牛视网膜毛细血管周细胞,用透射电镜和免疫细胞化学法对细胞进行鉴定.结果:培养的周细胞贴壁生长,胞体肥大,呈不规则状、有较多突起.细胞生长缓慢,呈现非接触抑制的重叠状生长.电镜下周细胞核大、不规则、有切迹,可见多个核仁.细胞表面有微绒毛,胞质内有丰富的细胞器,无Ⅷ因子小体;免疫细胞化学显示细胞呈平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性,Ⅷ因子相关抗原阴性.结论:酶消化法原代培养牛视网膜周细胞是一种稳定、可靠的方法.
-
视网膜Müller细胞条件培养基及抗VEGF对血管内皮细胞的作用
目的:观察高糖条件下制备的视网膜Müller细胞条件培养基(HGMCM)及抗VEGF对血管内皮细胞的作用.方法:采用免疫荧光、流式细胞术和Boyden小室迁移实验观察HGMCM,含wortmannin及含VEGF单克隆抗体HGMCM对血管内皮细胞的作用.结果:HGMCM可促进体外培养的血管内皮细胞的增殖和迁移 (142.00±15.32/视野) ,wortmannin、VEGF单克隆抗体可明显抑制HGMCM诱导的血管内皮细胞的增殖和迁移(89.00±9.28/视野,93.00±9.64/视野),使血管内皮细胞被阻滞于G1/S转变期,含wortmennin和VEGF单克隆抗体HGMCM组与HGMCM组比较,差异均有显著性(P<0.01).结论:HGMCM诱导血管内皮细胞的增殖和迁移一部分是通过VEGF发挥作用的,拮抗VEGF的活性可抑制血管内皮细胞的增殖和迁移,进而抑制新生血管形成.
-
兔视网膜Müller细胞原代培养
目的:建立兔视网膜Müller细胞原代培养的方法.方法:组织块悬浮法培养兔视网膜Müller细胞,用电镜和免疫组织化学法对细胞进行鉴定.结果:培养的细胞贴壁生长,呈长梭形,胞体肥大,胞浆丰富.电镜下可见特征性的中间丝(直径8～10nm);免疫组织化学显示细胞呈神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100阳性,八因子相关抗原阴性.结论:组织块悬浮法培养兔视网膜Müller细胞是一种稳定、可靠的方法.
-
改良的人视网膜Müller细胞的原代培养方法与鉴定
背景 视网膜Müller细胞是视网膜重要的胶质细胞,也是视网膜干细胞的来源之一,研究Müller细胞的生物学行为对研究视网膜的各种生理病理过程和视网膜干细胞治疗研究具有重要意义,而建立稳定的视网膜Müller细胞培养体系是相关研究的基础. 目的 优化分离培养和纯化人视网膜Müller细胞的方法,为相关的实验研究提供良好优质的Müller细胞来源. 方法 分离人供体眼视网膜组织,然后将剪碎的视网膜组织置入质量分数0.25％胰蛋白酶+100 U透明质酸酶混合溶液中进行消化,添加含体积分数10％胎牛血清的DMEM/F12培养液1～2 ml终止消化,然后加入含体积分数20％胎牛血清的RPMI1640培养液培养72 h,行半量换液,再以含10％胎牛血清的培养液进行传代.光学显微镜下根据细胞的形态特征进行细胞鉴定,并分别采用免疫荧光技术和免疫组织化学法检测胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Müller细胞特异性标志物谷氨酰胺合成酶(GS)的表达,对培养的细胞进行鉴定.结果 应用0.25％胰蛋白酶+100 U(商品单位)透明质酸酶的混合酶消化法可成功获取人视网膜Müller细胞,原代培养后24 h细胞贴壁,培养后9～1Od细胞融合.培养的细胞胞体呈长圆形,细胞质丰富,部分细胞体两端锥状长突起,末端膨隆,细胞核大.传代后的细胞胞体大,呈扁平多角形,符合Müller细胞的形态.细胞免疫组织化学和免疫荧光技术检测显示95％以上的细胞中GFAP呈阳性表达,90％以上的细胞中GS呈强阳性表达. 结论 应用透明质酸酶和胰蛋白酶混合液消化法可以成功分离人视网膜Müller细胞,分别用含20％胎牛血清和含10％胎牛血清的RPMI1640培养液培养和传代的人视网膜Müller细胞产量高且纯度好.
-
外伤性视神经损伤手术时机选择的实验研究
[目的]通过视神经外伤后视网膜形态的变化,了解外伤性视神经损伤的手术时机与疗效间的相关关系.[方法]建立外伤性视神经损伤和不同时间减压动物模型,对视网膜神经节细胞(RGCs)、视网膜等进行了定量分析.[结果]正常对照组RGCs相对体积数密度(体密度,Vv)为0.072,小细胞所占比例为49.5%,视网膜厚度为108.9μm,节细胞以内层的厚度为19.5μm;48h减压组RGCs体密度为0.052,小细胞占比例为66.8%,视网膜总厚度为101.9μm,节细胞以内层厚度为16.9μm;14d减压组RGCs体密度为0.042,小细胞占比例为76.4%,视网膜总厚度为96.5μm,节细胞以内层为15.5μm.[结论]48h减压较14d减压可以较好的保存RGCs和视网膜的形态,外伤性视神经损伤后应该尽早解除周围因素对视神经的压迫.
-
生长因子对培养的胚胎视网膜神经细胞增殖与凋亡的影响
目的探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)及胎牛血清对体外培养的人胚胎视网膜神经细胞生长、增殖、分化和凋亡等的影响及可能的机制. 方法采用胎牛血清培养人胚胎视网膜神经细胞,加入或不加入EGF、FGF.通过神经元特异稀醇化酶(neuron specific enolase, NSE)、视网膜神经节细胞特异的Thy1.1抗体、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组织化学染色、倒置显微镜及扫描电镜观察鉴定细胞成分;细胞生长曲线及溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)掺入测定细胞增殖率;原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸切口末端标记(Tdt-mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)检测细胞凋亡;c-fos、c-jun及bcl-2、bax免疫组织化学染色判断转录调控因子及细胞凋亡调控因子表达水平,计数阳性细胞并进一步作统计分析. 结果经过EGF、FGF培养的人胚胎视网膜细胞总数增加,细胞倍增时间缩短,BrdU掺入率增加,凋亡细胞数减少,其中NSE、Thy1.1阳性细胞数明显增加.同时,c-fos、c-jun及bcl-2阳性细胞数也增加. 结论生长因子EGF、FGF可通过上调转录因子c-fos、c-jun及细胞凋亡抑制因子bcl-2表达促进体外培养的人胚胎视网膜细胞存活与增殖.
