结核分枝杆菌泛酸激酶的克隆表达及酶学性质
摘要： 目的:获得具有生物学活性的结核分枝杆菌(Mtb)重组泛酸激酶蛋白. 方法:以结核分枝杆菌模式菌株H37Rv基因组为模板,扩增泛酸激酶基因CoaA(Rv1092c),克隆入原核表达载体pET28a中,重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达. 在优化后的诱导条件(20℃,10 h,0.5 mmol/L IPTG)下,收集细菌进行超声破碎,低温高速离心,得到的上清液经镍离子螯合型亲和层析柱纯化重组蛋白. 高效液相色谱及质谱鉴定重组蛋白. 采用酶联法测定重组蛋白的酶学性质. 结果:得到了高表达、高纯度的重组结核分枝杆菌的泛酸激酶,酶催化过程中对泛酸的kcat和Km值分别为273.81 kat/L, 35.27 μmol/L;对ATP的kcat和Km值分别为169.10 kat/L, 94.43 μmol/L. 重组蛋白经高效液相色谱及质谱鉴定,测得Mr约为39 168. 在5 mmol/L Tris-HCl缓冲液,pH值7.5,25℃条件下,重组CoaA的二级结构中有39.3% α螺旋,13.7% β折叠,14.3% β转角,32.5%无规则卷曲. 结论:成功克隆表达结核分枝杆菌泛酸激酶,酶学性质和二级结构鉴定表明重组泛酸激酶折叠正确,且具有生物学活性,为基于该酶筛选新型抗结核药物奠定了基础.
-
先天性右冠状动脉缺如1例
1临床资料患者女,68岁.因活动后胸闷7 a,加重2 mo拟诊"冠心病"入院.患者7 a来反复活动时出现胸闷,近2mo症状进行性加重,步行或爬楼梯至2楼时出现,持续时间约20 min,自服"救心丹"后可缓解.既往无黑朦、晕厥,无胸痛、咯血.有高血压病史10 a余,不规则服用降压药,血压波动于140～160/60～70 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa).糖尿病病史4 a,服用二甲双胍治疗.
-
MTX介入治疗异位妊娠导致严重口腔溃疡1例护理
1 临床资料患者,女,26岁.异位妊娠MTX介入治疗后,口腔溃疡伴肛周皮肤溃烂9 d加重3 d入院.14 d前该患者在B超监测下行异位妊娠MTX介入治疗术,MTX总量50mg.5 d后口腔轻微溃疡,3 d前加重,进食水后疼痛剧烈,张口困难,并伴肛周皮肤溃烂7～8 cm,无发热、腹痛、腹泻、黑便等不适[1].
-
剖宫产后再次妊娠分娩方式母婴结局248例分析
1临床资料我院2000-01/2007-12共收住剖宫产后再次妊娠孕妇248例,年龄25～39(30.3±2.8)岁,孕周32～42(38.5±2.5)wk,术后间隔时间1～9 a.占本院同期分娩总数1.2%,占同期剖宫产总数5.1%.终止妊娠方式的选择①选择阴道试产条件:未出现新的剖官产指征,无再次子宫损伤史如穿孔、肌瘤剔除术等.
-
胱硫醚β-合酶活性测定及应用
0 引言目前国外测定胱硫醚β-合酶(CBS;EC4·2·1·22)活性的方法有放射性同位素标记法和分光光度法,而国内还少有报道.我们在动物实验表明消脂方具有防治动脉粥样硬化作用[1]的基础上,为了解消脂方是否通过影响CBS以抗动脉粥样硬化,建立CBS活性分光光度测定方法,并用此法检测消脂方对实验性鹌鹑CBS活性的影响.
-
亚急性海绵状脑病1例
1临床资料患者,女,59岁.因头痛、头晕50 d,视力下降、言语不利、行走困难1 mo余入院.患者自述患"高血压病"6 a;"左侧面肌痉挛"6 a;"神经官能症"10 a.入院前50 d无诱因出现额前部疼痛,局部麻木,伴头晕、心慌;无视物模糊、双影及视物旋转;无耳鸣,听力无下降,恶心、呕吐,胸闷、气短等.测血压185/100 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),即卧床休息,扩血管处理后血压平稳,余不适症状无缓解.
-
瑞芬太尼控制性降压应用于脑肿瘤手术30例
1临床资料选择我院脑肿瘤ASA Ⅰ～Ⅱ级行开颅摘除术患者30例,年龄15～52岁,体质量47～76 kg,无高血压、贫血、凝血机制障碍.随机将患者分为瑞芬太尼组(R组)15例,硝普钠组(N组)15例.采用气管内插管静吸复合全麻,切开脑膜后开始控制性降压,目标为平均动脉压(MAP)60～65mmHg(1 mmHg=0.133 kPa).R组以瑞芬太尼2μg/kg缓慢静脉注射后给予0.08～0.5μg/(kg·min)维持;N组以硝普钠3～8 μg/(kg·min)持续静脉注射,60 min后停止降压并记录2组术中MAP、心率(HR)、中心静脉压(CVP)的变化情况,计算动脉-颈内静脉球部血氧含量(Da-jvO2)、脑氧代谢率(CERO2).应用SPSS10.0统计分析软件进行统计学处理,数据以-x±s表示.P＜0.05为差异有统计学意义.结果:2组患者一般情况、手术时间、补液总量、输血量、尿量、CVP差异均无显著性.
-
自体角膜上皮干细胞移植联合丝裂霉素C治疗翼状胬肉的临床观察
0 引言翼状胬肉是眼科的常见病,临床上以手术治疗为主.但术后极易复发[1],反复多次手术可导敛角膜缘屏障功能破坏和睑球粘连.为减少其术后复发率,我们切除原发性和复发性翼状胬肉病变后,进行自体角膜缘含上皮干细胞粘膜移植联合丝裂霉素C治疗,获得了理想的临床效果,现报告如下:
-
胸腔镜辅助小切口食管癌根治术的临床应用
0 引言胸腔镜手术因微创、出血少、术后疼痛轻、并发症少、住院时间短等优点,而愈来愈得到广泛认可.我们为食管癌患者施行了胸腔镜小切口辅助下食管癌根治术,术后进行随访观察,取得良好的手术效果,现报道如下.
-
口腔颌面部创伤298例临床分析
1 临床资料选择我院颌面部创伤患者298例(男226,女72),年龄4～79(平均32.8)岁.其中交通肇事所致合并伤162例(54.3%),摔伤51例(17.1%),斗殴伤62例(20.9%),其它运动损伤23例(7.7%).下颌骨骨折99例,上颌骨骨折56例,颧弓骨折45例,上颌骨加颧弓骨折37例,下颌骨加颧弓骨折23例,上下颌骨联合骨折21例,上下颌骨加颧弓骨折14例,其它3例.
-
准分子激光上皮下角膜磨镶术治疗高度近视2177例护理
1临床资料 2002-01/2008-12我院收治高度近视患者2177(男726,女1451)例(4256眼),年龄18～38岁.术前患者屈光度-6.00～13.00(平均-8.00)DS,散光-0.5～-3.5 DC,中央角膜厚461～533(平均495)μm.患者眼部进行常规检查,排除圆锥角膜、青光眼及眼底病变.手术采用鹰视酷眼准分子激光机(德国)和准分子激光上皮下角膜磨镶(LASEK,法国)手术专用器械进行.
