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低氧诱导因子-1α对Jurkat细胞端粒酶逆转录酶影响的研究

应晓杨;方美云;王晨辰;韩丽;徐艳冰;张卫军

摘要: 目的 探讨RNA干扰白血病细胞株Jurkat低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的影响,并检测其对端粒酶活性、细胞增殖及凋亡的影响,为白血病的基因治疗提供理论基础.方法 构建人低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并转染白血病细胞株Jurkat;采用RT-PCR方法检测Jurkat细胞HIF-1α及hTERT mRNA表达水平;EIESA法检测端粒酶的活性,流式细胞术分析转染后Jurkat细胞的细胞周期和凋亡率.结果 成功构建了pshRNA-HIF-1α1和pshRNA-HIF-1α2重组质粒;转染Jurkat细胞后,与空质粒组相比,pshRNA HIF-1α可有效抑制Jnrkat细胞HIF-1α及hTERT基因表达;流式细胞术结果表明转染后,其凋亡率明显高于空质粒组(P<0.05),Jurkat细胞增殖活性显著降低.结论 成功构建HIF-1α的shRNA表达质粒,转染Jurkat细胞后能表达shRNA,干扰效果明确,目的基因的表达明显下降,从而可以抑制白血病细胞Jurkat的增殖,促进凋亡.

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