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新生小鼠精原干细胞诱导分化精子样细胞
目的 探讨小鼠精原干细胞体外诱导分化精子样细胞的可行性.方法 以7～8日龄小鼠睾丸为材料,采用小鼠睾丸支持细胞作为饲养层,应用维甲酸诱导、成年小鼠睾丸组织液诱导以及低温诱导精原干细胞分化,应用流式细胞仪分析诱导精子样细胞的染色体倍性.采用显微注射法将精子样细胞注射到卵母细胞和去核卵母细胞,观察受精卵的发育状况.结果 三种方法诱导精子样细胞比例分别为5.9%、1.6%、0.35%;流式细胞仪分析维甲酸诱导单倍体比率为19.3%;诱导精子样细胞能激活卵母细胞,囊胚发育率20.36%.结论 新生小鼠精原干细胞体外可以诱导分化为精子样细胞,并具有激活卵母细胞的能力.
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091单倍体机能不全破坏了T细胞分化发育所需的信号传递网络
胸腺细胞在胸腺微环境的作用下,经过阴性和阳性选择,发育成熟为T细胞,这个过程涉及到诸多提供催化作用的酶和传递信号以启动第二信使系统的信号网络系统.在这庞大的网络中,接合器蛋白起着承前启后的作用.T细胞活化所需的穿膜接合器蛋白(LAT),经TCR相关的PTKs磷酸化后,使T细胞活化所需的各种分子"各就其位",活化T细胞.酪氨酸磷酸化的LAT亦结合Grb2接合器家族成员,Grb2在T细胞活化Ras中的作用不清.
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乙醛脱氢酶ALDH7A1基因多态性与2型糖尿病的相关性研究
目的 探讨ALDH7A1基因多态性位点rs2306619、rs2306618、rs12514417、rs2306617、rs4379190与中国湖北随州汉族居民2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法 收集220名健康对照者和240例T2DM患者,所有研究对象均来自湖北随州汉族城镇居民.从外周血的白细胞中应用标准法提取DNA.通过设计测序引物对相邻的5个所选位点(rs2306619、rs2306618、rs12514417、rs2306617、rs4379190)进行基因扩增,然后直接送样测序,采用SHEsis软件进行统计分析ALDH7A1基因5个位点的单核甘酸多态性及连锁不平衡,分析糖尿病组与对照组5个位点等位基因频率和基因型频率的差异及构建单体型.结果 5个位点的低等位基因频率分别是0.492、0.084、0.124、0.277、0.259,连锁不平衡检验发现5个位点呈现强的连锁不平衡,ALDH7A1基因的5个位点基因的等位基因频率和基因型频率在2组中差异均无统计学意义,单体型分析发现C-A-A-A-T、T- A- A- A-T、T-A-A-G-C、T-A-C-A-T、T-G-A-G-C 5种单体型,并且这5种单体型在糖尿病组和对照组差异无统计学意义.结论 ALDH7A1基因的5个多态性位点可能不是湖北随州汉族2型糖尿病患者的易感基因;本研究结果尚需在更大规模人群中进一步验证.
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慢性萎缩性胃炎和胃腺癌肿瘤坏死因子微卫星遗传易感性研究
目的探讨中国湖北地区汉族人群中肿瘤坏死因子(TNF)a、TNFb和TNFc微卫星多态性分布,分析其与慢性萎缩性胃炎和胃腺癌的相关性.方法应用PCR结合变性聚丙烯酰胺凝胶高压电泳和AgNO3染色,对164例健康者、53例慢性萎缩性胃炎和56例胃腺癌患者的TNFa、TNFb和TNFc微卫星进行分型,并将PCR产物克隆及测序鉴定.结果慢性萎缩性胃炎中的TNFa10基因频率为19.81%,显著高于正常人中的11.84%(P=0.04).进一步分析显示TNFa10等位基因与患者的年龄、性别、胃黏膜萎缩程度、肠上皮化生等无关.TNFa6b5c1单倍体纯合子在胃腺癌中的频率为1.79%,显著低于正常人中的15 85%(P=0.006).克隆测序发现,相同TNFa等位基因包含的(AC/GT)重复序列拷贝数与国外文献报道中不一致.结论TNFa等位基因的定义内涵尚需进一步确定.TNFa10等位基因与慢性萎缩性胃炎的易感性相关,TNFa6b5c1单倍体纯合子在慢性萎缩性胃炎至胃腺癌移行过程中发挥其抵抗作用.
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亲缘单倍体非体外去除T细胞的造血干细胞移植和同胞全相合移植治疗儿童急性白血病的临床研究
目的 探讨单倍体非体外去除T细胞的造血干细胞移植治疗儿童急性白血病的临床疗效.方法 回顾性分析2007年6月8日至2015年5月4日于首都医科大学附属儿童医院采用亲缘单倍体非体外去除T细胞的造血干细胞移植治疗儿童急性白血病23例(亲缘单倍体组),同胞全相合移植21例(同胞全相合组).两组的预处理方案均为清髓性,回输集落刺激因子动员的造血干细胞,采用环孢素、甲氨蝶呤±霉酚酸酯联合方案预防移植物抗宿主病(GVHD),采用低分子肝素±前列腺素E预防静脉闭塞病.结果 两组患儿均获得完全、持久的供者造血干细胞植入.亲缘单倍体组和同胞全相合组:①WBC植入中位时间分别为(13.1±2.3)和(12.5±1.4)d,PLT植入的中位时间分别为(19.4±8.0)和(22.9±7.7)d,差异均无统计学意义(P＞0.05);②中位随访时间分别为(49.6±30.3)和(32.5±31.6)月,移植后总体生存率分别为69.5％(16/23)vs 71.4％(15/21),差异无统计学意义(P＞0.05);③亲缘单倍体相合组与同胞全相合组急性GVHD临床分级(Ⅰ～Ⅳ) 65.2％ (15/23)和23.8％ (5/21),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 亲缘单倍体非体外去除T细胞与同胞全相合造血干细胞移植治疗儿童急性白血病的安全性与疗效相似.
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CYP3A4/5、PXR基因多态性对他克莫司浓度/剂量比和不良反应的影响
目的:探讨CYP3A4、CYP3A5、孕烯醇酮X受体(pregnenolone X receptor,PXR)基因多态性和CYP3A4/5单倍体对中国汉族肾移植术后稳定期病人他克莫司(tacrolimus,FK 506)血药浓度/剂量(mg/kg)比值(C/D)和不良反应(ADRs)发生率的影响.方法:采用PCR基因测序法检测104例肾移植术后稳定期病人CYP3A4、CYP3A5、PXR基因多态性;采用EMIT法测定他克莫司的谷浓度,比较不同基因型病人之间他克莫司血药浓度/(剂量/体质量)比值(C/D)和ADRs发生率.结果:104例病人中,CYP3A4* 18B、CYP3A5*3、PXR C24381A突变频率分别为23.08％、78.85％和71.63％.CYP3A5*3突变型(GG型)和CYP3A4 /5 CCGG型单倍体病人服用他克莫司后,C/D分别高于CYP3A5*3杂合型(AG型)和CYP3A4/5非CCGG型单倍体病人,有显著差别(P＜0.05),但用他克莫司后ADRs发生率无显著差别(P＞0.05).CYP3A4* 18B以及PXR C24381A的三种基因型之间用他克莫司后的C/D和ADRs发生率均无显著差别(P＞0.05).结论:CYP3A5*3基因多态性和CYP3A4/5单倍体可显著影响中国汉族肾移植术后稳定期病人用他克莫司后的C/D比值.
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MD R1基因多态性和单倍体对肾移植术后稳定期患者他克莫司浓度／剂量比值的影响
目的：探讨MDR1 C1236T、G2677T／A和C3435T 基因多态性和单倍体对中国汉族肾移植术后稳定期患者他克莫司浓度／剂量比值的影响，为他克莫司个体化用药提供依据。方法采用PC R-基因测序法检测104例肾移植术后稳定期患者MDR1 C1236T、G2677T／A和C3435T 的基因多态性，采用均相酶免疫测定方法（EMIT法）测定他克莫司的谷浓度，比较不同基因型患者之间他克莫司血药浓度／（剂量×体质量）（C／D）比值。结果104例患者中，MDR1C1236T、G2677T／A和C3435T 突变频率分别为56．73％、55．77％和33．17％。MDR1 C3435T、MDR1 TTT单倍体与他克莫司C／D比值具有相关性（P＜0.05）。CYP3A5*3*3患者中，MDR1 TTT单倍体与他克莫司C／D比值仍存在显著相关（P＜0.05）。MDR1 C1236T、G2677T／A、CGC单倍体与他克莫司C／D比值无显著性差异（P＞0.05）。结论 MDR1 C3435T、MDR1 TTT单倍体与中国汉族肾移植术后稳定期患者他克莫司C／D比值具有显著相关性，是影响肾移植患者他克莫司浓度个体化差异的重要因素。
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单倍体造血干细胞移植治疗再生障碍性贫血23例临床观察
目的：观察单倍体造血干细胞移植（HSCT）治疗重型再生障碍性贫血（SAA）和再生障碍性贫血-阵发性睡眠性血红蛋白尿综合征（AA-PNH）的疗效。方法回顾性分析2012年7月—2014年6月23例再生障碍性贫血（AA）（包括SAA 17例，AA-PNH 6例）患者接受HSCT的病例资料及临床特点。骨髓移植（BMT）6例，BMT联合外周血造血干细胞移植（PBSCT）17例，所有受者均采用以白消安/环磷酰胺+抗胸腺细胞球蛋白为主的预处理方案。患者在环孢素A（CsA）/甲氨蝶呤（MTX）基础上联合霉酚酸酯（MMF）预防移植物抗宿主病（GVHD）。输注单个核细胞中位数为11.38×108/kg， CD34+细胞中位数为3.24×106/kg。结果23例患者早期粒系获得重建，21例患者早期巨核系获得重建。死亡2例，其中1例患者在移植后第40天死于感染性休克、DIC，1例患者在移植后第20天死于Ⅳ度肠道aGVHD和消化道出血。至随访截止，中位随访时间10（5～26）个月，存活21例（91.3%）。SAA组与AA-PNH组相比2年总生存率（100%与92%）差异无统计学意义（P=0.497）。中性粒细胞﹥0.5×109/L（粒细胞植入）和血小板﹥20×109/L（血小板植入）的中位时间分别为移植后第12（10～19）天和第20（12～30）天。结论人类白细胞抗原（HLA）配型半相合的HSCT是治疗无亲缘和无关供体全相合的SAA和AA-PNH的有效方法，但需在严密检测下慎重使用。
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非T细胞去除单倍体造血干细胞移植治疗难治性白血病
目的探讨非T细胞去除(TCD)单倍体造血干细胞移植(HSCT)治疗难治性白血病的疗效及毒性反应.方法4例难治性急性髓系白血病(AML)、4例慢性粒细胞白血病(CML,伴骨髓纤维化1例、加速期2例、急单变1例)、2例难治性急性淋巴细胞性白血病(ALL).母亲或同胞供者粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员5 d后采集骨髓或/和外周造血干细胞(HSC),患者输注CD34+细胞、单个核细胞(MNC),预处理方案为司莫司汀(MeCCNC)、阿糖胞苷(Ara-C)、马利兰[Bu,ALL以全身放疗(TIB)代替]、环磷酰胺(CTX)、抗人体胸腺细胞球蛋白(ATG).以环胞霉素A(CsA)、骁悉(MMF)和氨甲喋呤(MTX)预防移植物抗宿主病(GVHD).结果均顺利完成预处理,出现Ⅰ～Ⅲ度黏膜炎4例,血清病样表现1例,肝功能损害5例.移植后发生急性GVHD(aGVHD)7例,达Ⅳ度3例,慢性GVHD(cGVHD)4例;并发出血性膀胱炎2例,肝静脉闭塞病(VOD)、巨细胞病毒(CMV)间质性肺炎、白质脑病各1例.均在移植后9～12 d获造血重建.存活7例(6例母亲供者,1例同胞供者).结论非TCD单倍体HSCT治疗难治性白血病有效,GVHD发生率高,母亲供者可能更好.
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挽救性单倍体移植治疗幼年型粒单核细胞白血病1例
目的 探讨挽救性单倍体相合造血干细胞移植治疗幼年型粒单核细胞白血病(JMML)的安全性和有效性.方法 5岁JMML患儿,采用清髓性预处理的非血缘脐血移植后植入失败,脐血移植后+36 d予以单倍体相合造血干细胞移植解救,采用减低强度预处理方案(氟达拉宾、抗人体淋巴细胞球蛋白、塞替派及低剂量的全身照射)及CSA+MMF方案预防移植物抗宿主病(GVHD).结果 脐血移植后+21 d及+28 d供受体嵌合体检测均为100％受者型,同时患者处于粒细胞缺乏及骨髓低增生状态,提示原发性移植物植入失败.半相合移植后+11 d血ANC＞0.5×109 /L,+60 d血小板＞10×109 /L,+120 d血小板＞20×109 /L.半相合移植后出现重度急性GVHD,给予免疫抑制剂治疗后好转,在降低免疫抑制剂过程中出现局限性慢性GVHD,至今已生存6月余,未见复发.结论 减低强度的单倍体相合造血干细胞移植挽救治疗JMML安全有效.
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单倍体造血干细胞移植治疗重型地中海贫血3例临床护理
地中海贫血是一组珠蛋白生成障碍的遗传性溶血性贫血，重型患者只能依靠输血维持生命，异基因造血干细胞移植是目前根治此病的唯一方法［1］。2013年9月~2015年4月，我们成功完成了3例地中海贫血患儿的单倍体移植。现将护理体会报告如下。
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色氨酸羟化酶基因遗传多态性与精神分裂症及攻击行为的关联研究进展
对近年来色氨酸羟化酶基因(TPH1、TPH2)遗传多态性与精神分裂症及攻击行为的关联研究进行简要回顾.
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单倍体移植治疗白血病疗效观察
目的 探讨单倍体移植治疗白血病的疗效.方法 在单倍体移植时采用阿糖胞苷(Ara-c)、马利兰(Bu)、环磷酰胺(CTX)、甲基环己亚硝脲(Me-CCNU)联合作为预处理方案,用CTX、重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、环孢素A(CSA) 、麦考酚酸酯(MMF)、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、白细胞介素11(IL-11)及甲氨蝶呤(MTX)联合预防急性移植物抗宿主病(aGVHD),治疗7例白血病;结果 7例患者完全植入,白细胞＞1.0×109/L中位时间为16.9 d,Ⅲ～Ⅳ度aGVHD发生率为14.3%,中位随访时间25.6个月,无复发,至今仍存活.结论 单倍体移植治疗白血病时,用Ara-c、Bu、CTX、Me-CCNU联合作为预处理方案,用CTX、rhG-CSF、CSA、MMF、ATG、IL-11及MTX联合预防aGVHD是安全、有效的.
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单倍体造血干细胞二次移植挽救性治疗儿童极重型再生障碍性贫血
目的 探讨非体外去T细胞单倍体造血干细胞二次移植治疗儿童极重型再生障碍性贫血(VSAA)的可行性.方法 例1,男,7岁,口服环孢素(CsA)治疗3个月无效,无人类白细胞抗原(HLA)相合同胞供者,监护人强烈要求行亲缘单倍体造血干细胞移植,父亲为供者,HLA 5/10,原发植入失败;例2,女,4岁,抗胸腺细胞免疫球蛋白(ATG)联合CsA免疫抑制治疗6个月无效,行非血缘全合异基因造血干细胞首次移植成功,但移植1个月后发生骨髓免疫排斥.这2例VSAA患儿均于2016年5月在郑州大学第一附属医院再次接受亲缘单倍体异基因造血干细胞二次移植(HLA 5/10)挽救性治疗,二次预处理方案均采用氟达拉滨(Flu)/环磷酰胺(CTX)/ATG+全身放疗(TBI),移植物为骨髓联合外周血造血干细胞,移植物抗宿主病预防采用CsA、吗替麦考酚酯联合小剂量甲氨蝶呤.结果 2例患儿单倍体造血干细胞二次移植均成功植入,中性粒细胞植入时间分别为15 d和13 d,血小板植入时间分别为18 d和13 d,骨髓造血功能重建.目前随访1.5年,2例患儿的外周血常规基本正常,生活质量良好.结论 对于首次造血干细胞移植失败或移植后发生免疫排斥的VSAA患儿,亲缘单倍体造血干细胞移植可作为挽救性治疗手段.
关键词： 单倍体 造血干细胞二次移植 极重型再生障碍性贫血 儿童 -
亲缘单倍体造血干细胞移植治疗59例儿童血液病的疗效
目的 评估亲缘单倍体造血干细胞移植(haplo-HSCT)治疗儿童血液病的安全性和疗效.方法 回顾性分析航天中心医院2012年7月至2016年6月收治的59例14岁以下血液病患儿,通过分析植入成功率、移植物抗宿主病(GVHD)发生率、感染发生率及移植相关病死率(TRM)、累积复发率、总体生存率(OS)、无病生存率(DFS)进行疗效评估.结果 59例患儿行haplo-HSCT,移植后均顺利植活,白细胞植活的中位时间为18(8~23)d,血小板植活的中位时间为21(11~68)d.移植后28 d评估骨髓,59例患儿均达完全缓解(CR),经DNA检测证实均为完全供者嵌合状态.中位随访时间为19(5~56)个月.23例Ⅰ、Ⅱ度急性GVHD累积发生率为(38.3 ± 6.3)%,10例Ⅲ、Ⅳ度急性GVHD累积发生率为(16.7 ± 4.8)%,30例慢性GVHD的累积发生率为(65.6 ± 7.5)%,27例巨细胞病毒(CMV)血症累积发生率为(45.1 ± 6.5)%,6例EB病毒(EBV)血症累积发生率为(10.0 ± 3.9)%,12例病毒型膀胱炎累积发生率为(20.0 ± 5.2)%,移植相关病死率为(12.8 ± 6.0)%,2年累积复发率CR组为(8.0 ± 5.4)%,未缓解(NR)组为(64.1 ± 11.9)%.CR组2年OS为(78.9 ± 7.5)%,NR组2年OS为(32.5 ± 12.9)%,CR组2年 DFS为(79.5 ± 9.8)%,NR组2年 DFS为(27.4 ± 9.9)%.结论 haplo-HSCT治疗儿童血液病安全有效,尤其是缓解期进行移植的患儿生存率高,复发率低.对于难治复发的患儿预后较差,需要进一步探索预防复发的措施.
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青蒿花药培养研究
目的 以青蒿花药为材料,进行诱导培养,获得了胚性愈伤组织,为青蒿单倍体植株的诱导奠定了基础.方法 青蒿花药在进行不同时间的低温前处理后,置于含不同激素和蔗糖浓度的MS培养基上,再进行不同时间的高温后处理,然后转入25℃黑暗培养,统计愈伤诱导率.结果 青蒿花药培养适培养基是6-BA 1 mg/L+2,4-D 0.3 mg/L+蔗糖3%或6-BA 1 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖3%,无需低温前处理和高温后处理.结论 可通过青蒿花药培养得到单倍体胚性愈伤组织.
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1例行再次造血干细胞移植术后并发腮腺炎患者的护理
对1例急性髓性白血病患者行第2次异基因造血干细胞移植,于术后第37天并发腮腺炎,立即予以抗感染、抗病毒治疗,同时腮腺局部湿敷紫草油.+42 d双腮腺区肿痛明显减轻,+45 d腮腺炎痊愈,+67 d出无菌层流室.提出加强心理支持、皮肤黏膜护理、腮腺炎局部护理及饮食护理,可促进患者早日康复.
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母供子非去T细胞性单倍体异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病
目的:对18例恶性血液病进行母供子非去T细胞性单倍体异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)治疗,探讨其疗效及毒性反应.方法:6例急性髓系白血病(AML-M2 3例,AML-M4 1例,AML-M5b 2例),3例慢性粒细胞白血病(伴骨髓纤维化1例),8例急性淋巴细胞白血病(ALL),非霍奇金淋巴瘤(Ⅳ期B组)1例,以母亲为供者进行非去T细胞性单倍体Allo-HSCT.供者动员方案:G-CSF 300μg/12 h×5 d后采集造血干细胞.输注D 34+细胞(3.58～8.90)×106/kg.预处理方案为:MeCCNC 250 mg·m-2·d-1×1 d,Ara-C 4 g·m-2·d-1×2 d,Bu 4 mg·kg-1·d-1×3 d,CTX 1. 8 g·m-2·d-1×2 d.ALL患者以全身放疗(TBI)代替Bu.以CsA、MMF、MTX和ALG预防移植物抗宿主病(GVHD).结果:所有患者均顺利完成预处理.移植后发生急性GVHD 16例、慢性GVHD10例,出血性膀胱炎1例.全部患者在移植后10～20 d获造血重建.18例患者中12例存活.结论:非去T细胞性单倍体Allo-HSCT是治疗恶性血液病的一种安全、有效的方法;同时提示在以后的单倍体异基因造血干细胞移植中优先选择母亲供体,对降低GVHD的严重程度、提高移植成功率是有帮助的.
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单倍体供者淋巴细胞输注诱导慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立
目的 建立单倍体相合供者淋巴细胞输注(DLI)后慢性移植物抗宿主病(cGVHD)小鼠模型并对其进行鉴定.方法 以近交系雄性Balb/cH-2d小鼠为供鼠;以雌性CB6F1小鼠(Balb/c×C57BL/6 F1H-2d/b)为受鼠,随机分为移植3×107、6×107、9×107个脾细胞组及空白对照组,脾细胞移植后流式细胞学检测H-2b和H-2d进行嵌合体分析.观察受鼠的体重、体形、体位、毛发变化及生存情况并评分,移植100 d处死小鼠,观察皮肤、肝脏、回盲端小肠靶器官的病理变化并评分,并鉴定模型的特征.结果 输注6×107、9×107个Balb/c小鼠脾细胞组可较为稳定的诱导小鼠cGVHD模型,两组间cGVHD的发生率的差异无统计学意义(P＞0.05),统计学分析提示是以皮肤硬皮病样改变的小鼠慢性GVHD模型.结论 输注6×107、9×107个Balb/c供鼠脾细胞的CB6F1受鼠可建立以皮肤硬皮病改变为主的稳定的cGVHD小鼠模型.
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儿童大剂量移植HLA不相合双亲供者的纯化外周血CD34+祖细胞
对于许多恶性和非恶性疾病来说,进行清髓性造血祖细胞异基因移植是唯一行之有效的治疗措施,但大多数需要移植的患者无组织相容性的同胞供者.与同胞移植相比,无关供者移植的移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥和感染的发病率及严重程度均增加,故移植效果较差 . 若能采用不用进行HLA配型的单倍体供者,由于其快捷的可用性,将提供一些优势.几乎所有可能进行异基因移植的患者都将会在一个特定的时间内找到供者.与应用脐血干细胞移植比较,单倍体供者在发生未植活或排斥反应的情况下仍然可以利用.其后如需要进行移植后免疫治疗如供体淋巴细胞输注时,也可以随时加以利用.然而在过去,清除T细胞的单倍体的移植使急慢性GVHD、未植活或移植物排斥的发病率增加以及免疫失调时间延长,这样就增加了致命性感染和淋巴细胞增殖性疾病的危险.
