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Stat3在部分相关皮肤病中的表达及意义
信号传导及转录激活因子家族(signal transducer and activaye of transcription ,Stat)是一类由生长因子、细胞因子等多肽类配体激活的转录因子.Stat是一类脱氧核糖核酸(DNA)结合蛋白,由750-850个氨基酸组成,分子量大小为90-113Kda.作为Janus激酶(Janus Kinase,JAK)-Stat途径中JAK激酶的底物,在细胞因子转录过程中起重要作用.
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六君子汤提取物抑制食管癌 Ec9706细胞增殖及其对信号转导和转录活化因子3信号通路的影响
目的：研究六君子汤提取物对食管癌 Ec9706细胞增殖的抑制作用及其对信号转导和转录活化因子3（STAT3）信号通路的影响。方法于2013—2015年，采用70％乙醇提取六君子汤，正丁醇、乙酸乙酯及水提法过夜萃取，用 MTT 法观察提取物对 Ec9706细胞活性的影响，选取优提取部位，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法观察六君子汤乙酸乙酯部位对 Ec9706细胞分泌相关细胞因子〔包括白介素6（IL-6）、转化生长因子β1（TGF-β1）、血管内皮生长因子（VEGF）〕的影响，采用 Western - blotting 法测定六君子汤乙酸乙酯部位对食管癌 Ec9706细胞 STAT3和磷酸化 STAT3（p-STAT3）蛋白表达的影响。结果对照组、六君子汤70％乙醇部位、六君子汤正丁醇部位、六君子汤水提部位 Ec9706细胞 OD 值比较，差异有统计学意义（F ＝448.90，P ﹤0.01）。药物处理组对 Ec9706细胞生长的抑制效果依次为：六君子汤正丁醇部位﹥六君子汤70％乙醇部位﹥六君子汤水提部位。六君子汤乙酸乙酯部位 Ec9706细胞 OD 值比较，差异有统计学意义（F ＝19.78，P ﹤0.001）。在250μg/ ml 时，六君子汤70％乙醇部位、六君子汤正丁醇部位、六君子汤水提部位对 Ec9706细胞的抑制率分别为7.31％、23.24％、 - 25.07％，而在200μg/ ml 时，六君子汤乙酸乙酯部位对 Ec9706细胞的抑制率为77.03％，抑制效果明显优于其他部位，故筛选的有效部位为六君子汤乙酸乙酯部位。应用概率法计算六君子汤乙酸乙酯部位抑制率 IC35、IC50、IC70，代表低、中、高浓度，相应的浓度为63.08、93.00、133.70μg/ ml。对照组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组IL-6、TGF-β1、VEGF 水平比较，差异均有统计学意义（P ﹤0.01）；其中六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组IL-6、TGF-β1、VEGF 水平低于对照组（P ﹤0.05）。对照组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组 STAT3、p-STAT3表达水平比较，差异均有统计学意义（ P ﹤0.05）；其中六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组 STAT3、p-STAT3表达水平低于对照组（P ﹤0.05）。结论六君子汤不同试剂提取物中，乙酸乙酯提取物抑制食管癌细胞增殖作用强，其抑制作用可能与调节 STAT3信号通路有关。
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Ro25-6981对骨癌痛大鼠脊髓后角JAK/SATA3通路的影响
目的 观察N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体2B亚型选择性拮抗剂Ro 25-6981对胫骨癌痛大鼠脊髓后角NR2B受体及JAK/SATA3通路的影响.方法 采用Walker256乳腺癌细胞建立雄性SD大鼠胫骨癌痛模型.将大鼠随机分为3组(n=8):假手术组(sham)、模型组(Model)、Ro 25-6981预先给药组(R).鞘内注射后,观察Ro 25-6981对大鼠脊髓背角NR2B表达,STAT3的表达及痛阈的影响.结果 与sham组比较,M组术后7,14d时机械痛阈降低(P＜0.05),R组术后7,14d时差异无统计学意义(P＞0.05);与M组比较,R组术后7,14d时机械痛阈升高(P＜0.05).与sham组相比,R组和模型组术后7,14d时脊髓背角STAT3及NR2B蛋白表达均升高(P＜0.05);与模型组比较,Ro 25-6981组术后7,14d时脊髓背角STAT3及NR2B蛋白表达降低(P＜0.05).结论 大鼠鞘内预先注射Ro 25-6981,通过特异性地拮抗含NB2B亚基NMDA受体,并抑制JAK/STAT3通路产生明显的镇痛作用,可有效地预防和治疗胫骨癌性疼痛.
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STAT3在肝细胞生长因子促进大鼠WB细胞增生过程中的作用
目的 研究STAT3如何参与肝细胞生长因子对大鼠WB细胞增生过程的调控.方法 以大鼠肝干细胞系WB-F344细胞为研究对象;肝细胞生长因子(HGF)及STAT3抑制剂AG490作用WB-F344细胞后,应用免疫荧光及Western blot方法检测STAT3蛋白的表达;应用噻唑蓝(MTT)方法检测应用HGF及STAT3抑制剂AG490作用下,WBF-344细胞增生的变化.结果 HGF能够激活STAT3信号分子,磷酸化的STAT3在刺激后30 min达到高峰;HGF作用于WB-F344细胞后细胞数增加,这种作用呈剂量效应关系;应用STAT3信号通路的抑制剂后能够阻断生长因子介导的肝干细胞的增生作用.结论 HGF能够激活STAT3;STAT3参与HGF介导的WB细胞的增生作用.
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STAT3在肝细胞生长因子促进大鼠WB细胞增生过程中的作用
目的 研究STAT3如何参与肝细胞生长因子对大鼠WB细胞增生过程的调控.方法 以大鼠肝干细胞系WB-F344细胞为研究对象;肝细胞生长因子(HGF)及STAT3抑制剂AG490作用WB-F344细胞后,应用免疫荧光及Western blot方法检测STAT3蛋白的表达;应用噻唑蓝(MTT)方法检测应用HGF及STAT3抑制剂AG490作用下,WBF-344细胞增生的变化.结果 HGF能够激活STAT3信号分子,磷酸化的STAT3在刺激后30 min达到高峰;HGF作用于WB-F344细胞后细胞数增加,这种作用呈剂量效应关系;应用STAT3信号通路的抑制剂后能够阻断生长因子介导的肝干细胞的增生作用.结论 HGF能够激活STAT3;STAT3参与HGF介导的WB细胞的增生作用.
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STAT3基因沉默对结肠癌细胞SW480凋亡的影响
目的:探讨转染信号传导和转录激活子3(STAT3)的短发夹RNA(shRNA)对结肠癌细胞SW480凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据.方法:设计、构建针对STAT3的shRNA真核表达载体,脂质体法转染SW 480细胞,MTT法观察细胞增殖情况,流式细胞仪检测检凋亡,QRT-PCR检测STAT3、Bcl-2、Caspase-3mRNA的变化.结果:成功构建了携带STAT3基因的shRNA的重组质粒,PCR和测序证实重组质粒构建正确.重组质粒转染结肠癌细胞后,细胞增值活性明显减弱,细胞阻滞于G1→S期,并出现早期凋亡.重组质粒转染组STAT3 mRNA的表达与对照组相比明显减弱(P＜0.01),同时Bcl-2表达增强、Caspase-3mRNA表达减弱(P＜0.05).结论:STAT3 shRNA能抑制结肠癌细胞的增值,促进其凋亡,其促凋亡机制可能与STAT3基因沉默后影响Bcl-2、Caspase-3凋亡基因的表达有关.
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Stat3信号通路与恶性肿瘤发生发展关系的研究进展
Stat3是一种存在于细胞浆中与酪氨酸磷酸化信号通道相偶联、激活后能够转入核内并与DNA相结合的蛋白，具有信号转导和转录调控双重功能，与促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤的侵袭和转移，增强肿瘤免疫逃逸能力密切相关。有效阻断Stat3信号通路，将为肿瘤的临床治疗开辟新的途径。文章结合文献综述Stat3信号通路与恶性肿瘤发生、发展关系的研究进展。
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Stat3信号通路与恶性肿瘤发生 发展关系的研究进展
Stat3是一种存在于细胞浆中与酪氨酸磷酸化信号通道相耦联、激活后能够转入核内并与DNA相结合的蛋白，具有信号转导和转录调控双重功能，与促进肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤的侵袭和转移、增强肿瘤免疫逃逸能力密切相关。有效阻断Stat3信号通路，将为肿瘤的临床治疗开辟新的途径。本文结合文献，综述Stat3信号通路与恶性肿瘤发生、发展关系的研究进展。
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益脾养肝方对大鼠肝癌癌前病变NF-κB、STAT3蛋白表达的影响
目的:研究益脾养肝方对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的大鼠肝癌癌前病变病理组织和NF-κB、STAT3蛋白表达的影响.方法:将大鼠随机分成对照组、模型组、益脾养肝方大、小剂量组.采用腹腔注射DEN诱发大鼠肝癌前病变模型,给药16周后处死.观察大鼠一般情况和体质量,肝功变化,肝组织HE染色以及免疫组化检测NF-κB和STAT3蛋白表达.结果:与模型组比较,YPYGF大、小剂量组的ALT、AST和GGT均明显降低,其中YPYGF大剂量组效果佳(P＜0.01).病理组织结果显示,益脾养肝方可以改善大鼠肝癌癌前病变的病理形态,能显著抑制肝组织NF-κB和STAT3的蛋白表达.结论:益脾养肝方对于大鼠肝癌癌前病变具有抑制作用,其作用可能与抑制炎症因子NF-κB和STAT3表达有关.
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扶正抗癌方抑制PC9细胞转移的分子机制
目的:探讨扶正抗癌方抑制PC9细胞转移的分子机制.方法:台盼蓝活力检测探索扶正抗癌方对PC9细胞增殖的影响;transwell实验探索扶正抗癌方对PC9细胞侵袭和迁移的影响;基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活力检测探索扶正抗癌方对MMP-9活力的影响,Real-time quantitative PCR探索扶正抗癌方对MMP-9 mRNA表达的影响,蛋白质印迹法探索扶正抗癌方对MMP-9、磷酸化的信号转导子及转录激活子3[p-STAT3(Tyr705)]蛋白表达的影响并探讨两者的关系.结果:扶正抗癌方以浓度依赖性抑制PC9细胞的增殖、侵袭和迁移(P＜0.05);以浓度依赖性下调MMP-9活力、mRNA和蛋白的表达(P＜0.05),以时间依赖性下调p-STAT3(Tyr705)蛋白的表达(P＜0.05);过表达STAT3逆转了扶正抗癌方对MMP-9的下调(P＜0.05).结论:扶正抗癌方通过抑制STAT3的表达下调MMP-9,进而抑制PC9细胞的转移.
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Th17-STAT3正反馈通路在类风湿性关节炎促炎机制中的研究进展
类风湿性关节炎是一种慢性炎症性系统性的自身免疫性疾病,发病可累及多关节以及全身多个系统.其发病机制与多种细胞因子有着密切的关系.Th17细胞是T细胞新发现的亚群,经研究证实其分泌的IL-17等多种细胞因子能诱导严重的自身免疫性反应.JAK/STAT信号通路,尤其是STAT3信号通路对类风湿慢性炎症有着重要的正反馈促进作用.Th17细胞的分化与调节机制和STAT3信号通路正反馈调节作用的进一步研究可以为探索类风湿性关节炎的治疗方法提供新的思路.
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加味小柴胡汤人含药血清对HepG2.2.15细胞的干预作用研究
目的:探讨加味小柴胡汤治疗慢性乙型肝炎(CHB)的可能作用机制.方法:临床CHB肝郁脾虚证患者随机分为中药治疗组、西药治疗组,各30例,分别予加味小柴胡汤、恩替卡韦治疗7d后收集合药血清,另设健康组30例取血清,将上述人血清分别作用于HepG2.2.15细胞中药组(10％中药组、20％中药组)、西药组、对照组,在48、72、144h3个时间节点收集细胞与上清,用EUSA法检测细胞上清HBsAg含量;实时荧光定量PCR法检测细胞上清HBV DNA含量及细胞JAK2、STAT3 mRNA表达水平.结果:经过干预,10％中药组、20％中药组HBsAg在干预48、96、144 h后明显下降(P＜0.01).干预48 h、96 h后,20％中药组STAT3 mRNA表达水平较对照组、西药组明显升高(P＜0.01,P＜0.05).结论:加味小柴胡汤可抑制细胞内HBV,上调STAB的表达,这可能是其治疗CHB的作用机制之一.
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“调气”电针远端腧穴对CSR大鼠局部脊髓组织中JAK1、STAT3蛋白表达的影响
目的:以JAK1、STST3蛋白为指标探讨“调气”电针远端腧穴对神经根型颈椎病大鼠的镇痛机制.方法:将SPF级Wistar大鼠60只雌雄各半,随机分为正常组,模型对照组,“调气”电针组.除正常组外均造成神经根型颈椎病模型,“调气”电针组造模后第3天开始电针治疗,参照大鼠穴位图谱取双侧合谷、太冲,每天1次,每次20 min,连续治疗7d后处死.模型对照组于造模后第3天开始,每日抓取1次,不做针刺处置.正常组不做任何处置.治疗后对3组大鼠采用YLS-3E型痛分析仪测量机械性痛阈,采用SABC免疫组织化学染色法对各组造模段脊髓及神经根组织,分别进行IgG染色,进行JAK1、STAT3免疫组化测定.结果:①造模后模型组各大鼠的痛阈值较正常组明显下降(P＜0.05);治疗后电针组各大鼠的痛阈值较模型组明显升高(P＜0.05);(②与正常组相比,模型组的脊髓段及神经根组织中JAK1蛋白、STAT3蛋白表达显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,“调气”电针组的表达显著降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:“调气”电针远端腧穴对CSR大鼠具有镇痛作用,对CSR脊髓及神经组织的JAK1-STAT3信号转导通路的抑制可能是实现其镇痛作用的重要机制之一.
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欣胃颗粒对胃癌前病变大鼠STAT3、p-STAT3信号通路表达影响的研究
目的:探讨欣胃颗粒对胃癌前病变(PLGC)大鼠STAT3、p-STAT3信号通路的影响.方法:采用N-甲基-N'-硝基-亚硝基胍(MNNG)为主的复合因素造模法制备PLGC大鼠模型,造模成功后,随机分为6组,模型组、欣胃颗粒高、中、低剂量(高、中、低剂量)组,维酶素对照(维酶素)组,另设空白对照(空白)组未予造模.各组分别给予相应的处理,12周实验结束,观察各组大鼠的一般状态和胃黏膜组织病理学的变化,观察其对STAT3、p-STAT3表达的影响.结果:欣胃颗粒各剂量组大鼠活动度、进食水量、体重等一般状态好转；模型组与空白组比较,STAT3、p-STAT3表达水平增高,欣胃颗粒低、高剂量组与模型组比较,STAT3、p-STAT3表达水平降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:欣胃颗粒对PLGC大鼠胃黏膜组织病理具有明显的改善作用,可以下调STAT3、p-STAT3的表达以达到对抗PLGC的作用.
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高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠JAK/STAT3信号通路的影响
目的 探讨高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠JAK/STAT3信号通路的影响.方法 选取36只7日龄SD新生大鼠,随机分为3组:假手术组(n=12),缺氧缺血性脑损伤组(n=12),高压氧治疗组(n=12).采用Rice法制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,假手术组大鼠分离左颈总动脉后不结扎直接缝合皮肤,高压氧治疗组大鼠在模型制作成功后,给予高压氧治疗,1h/d,连续7d.测定各组大鼠体质量增长率与左/右脑重量比值;应用TUNEL法检测脑组织神经细胞凋亡情况,Western blot方法与real time PCR方法分别检测各组新生大鼠脑组织JAK与STAT3蛋白与mRNA的表达.结果 高压氧治疗可使缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的体质量增长率和左/右脑重量比值增加(P＜0.05).与假手术组相比,缺氧缺血性脑损伤组新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡数目、JAK与STAT3蛋白与mRNA的表达均显著升高(P＜0.01);与缺氧缺血性脑损伤组相比,高压氧治疗组新生大鼠脑组织的神经细胞凋亡数目、JAK与STAT3蛋白与mRNA的表达均显著降低(P＜0.01).结论 高压氧减轻缺氧缺血性脑损伤新生大鼠的脑组织损伤可能与抑制JAK/STAT3信号通路相关.
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miR-125b通过靶向STAT3抑制胃癌细胞SGC-7901的侵袭迁移能力
目的 研究miR-125b靶向STAT3对胃癌细胞SGC-7901侵袭迁移能力的影响.方法 运用qPCR法检测miR-125b在胃癌及癌旁组织中的表达,运用Western blot法检测STAT3在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达,用双荧光素酶报告基因系统检测miR-125b对STAT3转录活性的影响,用Transwell实验检测过表达miR-125b对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响,用Western blot法检测过表达miR-125b后SGC-7901细胞STAT3的表达变化.结果 与癌旁正常组织比较,胃癌组织miR-125b的表达水平明显降低,STAT3蛋白表达水平明显升(P＜0.01).双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-125b可以直接调控STAT3的转录活性.过表达miR-125b后,SGC-7901细胞的侵袭和转移能力明显降低,STAT3的表达水平下调(P＜0.01).结论 miR-125b可靶向STAT3的表达调控SGC-7901细胞的侵袭迁移能力.
关键词： miR-125b STAT3 侵袭 迁移 人胃癌SGC-7901细胞 -
STAT3ER慢病毒表达载体的构建及体外对神经元再生作用的研究
目的 构建携带信号转导和转录激活蛋白STAT3和基因突变的雌激素受体ER的慢病毒载体,并转染受损的大鼠背根神经节神经元,研究其对神经元突起再生的作用.方法 运用基因重组技术,将STAT3、ER和核糖体介导的绿色荧光蛋白(IRES-GFP)片段插入慢病毒载体pRRL-MCS+的PmeI位点构建慢病毒载体pRRL-STAT3ER-IRES-GFP,经RT-PCR、Western blotting和测序分析加以鉴定其正确性.将慢病毒载体3质粒细胞包装系统(主体质粒pRRL-STAT3ER-IRES-GFP、包装质粒pCMVdeltaR8.74和包膜质粒VSV-G)共转染293T细胞,包装慢病毒载体并测定滴度.切断大鼠左L5近神经节的神经根,摘取L5背根神经节做分离神经元培养,将pRRL-STAT3ER-IRES-GFP感染神经元细胞并观察神经元细胞核转运和突起的长度.结果 构建的慢病毒载体pRRL-STAT3ER-IRES-GFP经RT-PCR和Western blotting鉴定正确,测序分析与Genbank报道的STAT3基因序列完全一致.3质粒共转染293T咖胞后,测定慢病毒滴度为1010-11Tu/ml.转染pRRL-STAT3ER-IRES-GFP的神经元经4-羟基三苯氧胺(4HT)激活,STAT3ER有明显的核转运,并增强突起的生长,经X2检验与对照组有显著性差异.结论 成功构建了表达小鼠STAT3ER基因的慢病毒载体并证实STAT3信号转导有利于轴突生长.
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siRNA沉默STAT3表达对IL-17诱导人角质形成细胞HaCaT增殖的影响
目的 通过体外靶向沉默STAT3基因转录,探讨STAT3抑制对IL-17诱导人角质形成细胞HaCaT增殖能力的影响及其机制.方法 采用IL-17A (80ng/ml)刺激体外培养的HaCaT细胞,采用小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)干扰技术体外沉默人角质形成细胞HaCaT中STAT3基因转录,采用qRT-PCR和Western blot分别检测细胞内STAT3 mRNA,STAT3和pSTAT3蛋白的表达变化,证实基因沉默效果,CCK-8法检测HaCaT细胞增殖能力的变化,Western blot检测STAT3的靶分子survivin及cyclin D1表达的变化,初步探讨STAT3抑制对IL-17诱导Hacat增殖调控的分子机制.结果 转染STAT3 siRNA质粒可显著抑制HaCaT细胞中STAT3 mRNA表达,STAT3和pSTAT3蛋白表达(P＜0.05).STAT3抑制后,IL-17诱导HaCaT增殖能力显著降低(P＜0.05),STAT3的靶分子survivin及cyclin D1表达水平显著降低(P＜0.05).结论 siRNA干扰靶向抑制STAT3表达可抑制IL-17诱导HaCaT增殖,可能与其抑制survivin及cyclin D1表达有关.
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miR-124靶向调节STAT3基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响
目的 探讨miR-124及STAT3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-124对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响.方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,Western bolt法检测STAT3蛋白的表达.将miR-124 inhibitors及miR-124mimics转染至甲状腺乳头状癌K1细胞株,Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,CCK-8方法和克隆形成实验检测转染后K1细胞的增殖和侵袭情况.结果 miR-124在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织,STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P＜0.01).转染miR-124 inhibitors的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高(P＜0.01);转染miR-124 mimics的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著降低,细胞内STAT3蛋白表达亦明显降低(P＜0.01).结论 miR-124抑制甲状腺乳头状癌K1细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关.
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白杨素对脓毒症急性肺损伤大鼠STAT1和STAT3表达的影响
目的 探讨白杨素对脓毒症大鼠肺组织转录激活子1(STAT1)和转录激活子3(STAT3)表达的影响.方法 将72只健康Wistar大鼠随机分为三组:假手术组、脓毒症急性肺损伤组和白杨素干预组.通过腹腔内注射10mg/kg的脂多糖(LPS)制备脓毒症急性肺损伤大鼠模型.白杨素治疗组大鼠在注射LPS 1h后给予腹腔内注射白杨素30mg/kg,假手术组则注射等量的生理盐水.24h后水合氯醛麻醉下处死大鼠,取右肺上叶进行病理组织学检查,取右肺中叶检测肺组织湿/干质量比(W/D),应用肺细胞灌洗术方法来进行肺通透指数测定,应用Western blot方法检测肺组织STAT1、p-STAT1、STAT3和p-STAT3蛋白的表达.结果 白杨素降低了脓毒症急性肺损伤大鼠的肺水肿及肺血管通透性.LPS诱导后,脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织STAT1、p-STAT1、STAT3和p-STAT3蛋白表达的平均光密度值显著升高(P＜0.01);而给予白杨素治疗后,肺组织STAT1、p-STAT1、STAT3和p-STAT3蛋白表达的平均光密度值显著降低(P＜0.01).结论 白杨素能够通过抑制STAT1和STAT3的表达减轻脓毒症大鼠的肺损伤.
