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益生菌在当前市场的应用现状
近年来，一些益生菌已被卫生部批准作为新资源食品，广泛应用于乳制品行业，同时也逐步被应用于其他功能性食品，如固体饮料、果汁、冰淇淋、糖果、巧克力、泡菜等。在亚洲地区益生菌普遍应用于奶制品领域，例如酸奶、乳酸菌饮品等。常见益生菌主要指两大类乳酸菌群：一类为双歧杆菌，常见的有婴儿双歧杆菌，长双歧杆菌，短双歧杆菌，青春双歧杆菌等；另一类为乳杆菌，如嗜酸乳杆菌，干酪乳杆菌，副干酪乳杆菌，鼠李糖乳杆菌，植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌等。
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青春双歧杆菌抑制铜绿假单胞菌对肠上皮细胞粘附和侵袭作用的研究
肠粘膜屏障X功能受损、肠道生物屏障破坏、机体免疫功能降低是促进细菌移位的主要原因。应用双歧杆菌改善肠道生物屏障减轻细菌移位的发生是近几年来新的研究热点。双歧杆菌是人体肠道中的重要生理性细菌，具有益生、营养、免疫等作用，对维持肠道生物屏障起主导作用。双歧杆菌与宿主肠上皮细胞的粘附是其发挥生理作用的第一步，铜绿假单胞菌是肠道细菌移位的常见菌，其粘附于肠粘膜细胞是其移位的首要条件。为了更系统地探讨双歧杆菌粘附后生物保护作用，我们以青春双歧杆菌(B.ado0926)体外粘附培养鼠肠上皮细胞株IEC-6，观察其是否具有抑制铜绿假单胞菌(ATCC 27853)粘附和侵袭的作用为双歧杆菌对肠粘膜屏障的生物保护作用的机制提供实验依据。
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荷瘤裸鼠口腔鳞状细胞癌乏氧状况的初步研究
目的 检测荷口腔鳞状细胞癌裸鼠肿瘤组织乏氧区域分布,明确厌氧菌能否在肿瘤乏氧区内生长,为认识和开发利用肿瘤乏氧区域提供依据.方法 荷瘤裸鼠尾静脉注射99mTc-HL91,应用SPECT检测鳞癌组织及正常组织乏氧区域分布.荷瘤裸鼠尾静脉注射青春双歧杆菌菌悬液,切取鳞癌组织及其它正常组织,匀浆后厌氧培养.结果 99mTc-HL91在肿瘤组织内高浓度聚集,与肿瘤体积呈线性相关;肿瘤区域、肿瘤对侧部位及头胸部位平均像素99mTc-HL91吸收值有显著性差异.肿瘤组织内可见青春双歧杆菌生长,其它正常组织内未见青春双歧杆菌生长.结论 口腔鳞癌组织中乏氧区域分布广泛,且与肿瘤体积密切相关.口腔鳞癌组织乏氧微环境适合严格厌氧菌-青春双歧杆菌的生长.
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双歧杆菌在蛋白类载体混合发酵中活菌率的生长研究
微生态学的崛起和医学科学的发展,使双歧杆菌研究的重要性越来越被学术界认识.由于双歧杆菌制品在世界范围获得广泛应用,广大群众已经认识到其重要,这就为双歧杆菌的开发奠定了基础[1].我院"青春双歧杆菌多元蛋白的保健功能及发酵工艺的研究"获得较高的社会效益和经济效益.但无论是酸奶还是含乳饮料中双歧杆菌的数量、形态对产品质量都起着至关重要的作用.只有当双歧杆菌含量达105～106CFU/ml以上时,该菌在体内才能发挥生理保健功能[2].因此发酵乳中双歧杆菌活菌数对于确保产品质量、保护消费者利益十分必要.
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青春双歧杆菌原生质体与乳杆菌原生质体的融合
目的通过青春双歧杆菌原生质体与乳杆菌原生质体的融合构建耐氧双歧杆菌,以解决双歧杆菌制剂开发中始终存在的"活菌数低"和存活时间短等问题.方法将双歧杆菌、乳杆菌分别制成原生质体(Protoplast).在电脉冲(电融合法)条件下进行融合,近一步促进细胞核的融合,后达到基因重组.结果成功地构建出几株较为稳定的兼具双歧杆菌和保加利亚乳杆菌生物学特点的融合株.其中融合株B具有良好的耐氧性,并能在有氧、CO2条件下良好生长.结论通过原生质体融合技术改良双歧杆菌的严格厌氧特性,有利于对双歧杆菌的开发和应用.
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双歧豆奶菌种的驯化研究
选用青春双歧杆菌在A、B、C三种培养基上进行耐氧和凝固驯化,经28代筛选出一株耐氧性并在C培养基上进行耐氧和凝固驯化,经28代筛选出一株耐氧性并在C培养基中由56h可发生凝固,后缩短到12h发生凝固的青春双歧杆菌;在PYG和豆乳培养基中进行耐酸驯化,经15代筛出一株能在pH4.7°T90的发酵豆乳中存活的青春双歧杆菌;在BCPYC液体和固体培养基中进行耐热驯化,经14代筛选出一株能在47℃±1℃的环境中生长的青春双歧杆菌.本菌在改良的NPNL双歧选择培养基中生长,形态、培养与生化特性与原菌种无差异.
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双歧杆菌模拟胃肠环境中抗性的研究
采用PYG培养基,模拟胃肠环境,即低pH值(1.5～4.5),高胆汁酸盐(0.1%～0.4%)对青春双歧杆菌进行抗性研究.同时对肠道致病性大肠埃希菌、福氏志贺菌和金黄色葡萄球菌拮抗性以及对氨苄青霉素、庆大霉素、卡那霉素和氯霉素的耐药性进行研究.结果表明,青春双歧杆菌在pH4.5时有较强的生存能力,4 h活菌数可达107CFU/ml以上.且能在含0.1%～0.4%的胆汁盐中存活,在0.1%～0.2%时4 h活菌总数可达106CFU/ml以上.同时对致病性大肠埃希菌、福氏志贺菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑菌作用,且对庆大霉素中度敏感,对氨苄青霉素、卡那霉素和氯霉素有耐受性.
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灭活的双歧杆菌对EPEC的黏附抑制作用
目的:研究灭活的青春双歧杆菌DM8504对肠致病性大肠埃希菌(EPEC)黏附抑制作用.方法:通过与活菌比较,观察灭活的双歧杆菌粘附于人大肠癌CCL-229细胞后对EPEC的黏附抑制作用.结果:用SCS或pH5.0新鲜BS肉汤悬浮的双歧杆菌能够完全抑制EPEC的黏附,而仅用SCS或pH5.0新鲜BS肉汤均不能抑制其黏附.
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青春双歧杆菌对1型糖尿病小鼠胰岛β细胞的保护作用
目的 探讨青春双歧杆菌对1型糖尿病小鼠胰岛β细胞的保护作用.方法 给予1型糖尿病小鼠口服青春双歧杆菌,观察实验组和对照组体重的变化及糖尿病发病率.ELISA法测定血清、脾细胞上清IL-4和IFN-γ浓度,电镜观察胰岛超微结构变化.结果 15周龄时实验组体重(23.41±1.64)g, 而对照组为(22.31±1.32)g(P<0.05);实验组发病率低于对照组(P＜0.05);实验组血清、脾细胞上清IL-4浓度明显高于对照组,而IFN-γ低于对照组(P<0.05);对照组残存胰岛的β细胞数目稀少,有核膜和内浆网扩张、核糖体脱颗粒和分泌颗粒空泡样变等超微结构异常,而实验组胰岛β细胞数显著多于对照组(P<0.05),且无上述超微异常.结论 青春双歧杆菌通过上调IL-4水平,降低IFN-γ水平,促使免疫平衡向Th2方向偏移,且有保护胰岛β细胞超微结构的作用,在一定程度上可预防和延缓NOD鼠糖尿病的发生.
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青春双歧杆菌对2型糖尿病模型大鼠肠道菌群和脂质代谢的影响
目的 通过观察青春双歧杆菌对2型糖尿病模型大鼠肠道菌群的变化,和血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平,探讨青春双歧杆菌对2型糖尿病模型大鼠肠道功能和脂质代谢的影响.方法 采用青春双歧杆菌灌胃2型糖尿病模型大鼠,取粪便检查正常菌群,取血和脏器检测TC、TG、HDL-C、SOD和MDA含量.结果 青春双歧杆菌导致肠道内双歧杆菌、乳杆菌的数量增加,而肠杆菌、肠球菌数量下降;TC、TG和MDA水平下降,而HDL-C和SOD水平升高.结论 青春双歧杆菌具有改善2型糖尿病模型大鼠肠道功能和降血脂作用,与二甲双胍联合应用效果更佳.
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青春双歧杆菌对溃疡性结肠炎患者血清相关因子的影响
目的：研究青春双歧杆菌对溃疡性结肠炎（UC）患者血清相关因子的影响。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测 UC 患者治疗前后及正常对照组血清肿瘤坏死因子（TNF）－α，干扰素（IFN）－γ，白细胞介素（IL）－6及 IL－10的水平，并分别比较各组细胞因子水平的差异。结果 UC 患者血清 TNF－α、IFN－γ、IL－6水平明显高于正常对照组，而 IL－10水平明显低于正常对照组（P＜0．05）；传统治疗组及双歧杆菌治疗组血清TNF－α、IFN－γ、IL－6水平较治疗前下降，而 IL－10水平较治疗前升高（P＜0．05），两治疗组与正常对照组相比无明显差异（P＞0．05）。结论青春双歧杆菌可以降低 UC 患者血清促炎因子 TNF－α、IFN－γ及 IL－6水平，还可升高抑炎因子 IL－10水平，调节肠黏膜的细胞免疫功能，可用于 UC 的治疗。
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双歧杆菌对大肠癌细胞凋亡的影响
目的 探讨双歧杆菌的体外抗肿瘤作用及其对肿瘤细胞凋亡的影响.方法 将双歧杆菌体外直接作用于大肠癌LoVo细胞,以MTT法检测双歧杆菌对肿瘤细胞的杀伤作用;用流式细胞仪检测双歧杆菌对肿瘤细胞凋亡的影响.结果 双歧杆菌在体外对大肠癌LoVo细胞具有显著的杀伤作用,且浓度越大、作用时间越长,其抑制作用越强,具有浓度和时间依赖性,且双歧杆菌能诱导肿瘤细胞凋亡.结论 双歧杆菌对大肠癌LoVo细胞具有生长抑制作用,其机制可能是通过诱导细胞凋亡达到抑制肿瘤生长的作用.
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低聚果糖对青春双歧杆菌生物膜形成的影响
目的:探讨低聚果糖对益生菌制剂来源的青春双歧杆菌生物膜形成的影响.方法:采用微量板法和置片法培养青春双歧杆菌生物膜,应用结晶紫染色法及活菌计数法检测青春双歧杆菌生物膜.结果:低聚果糖可使青春双歧杆菌生物膜形成时间提前24h.结论:应用益生菌制剂联合低聚果糖可提高其生理功能.
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青春双歧杆菌的体外抑菌作用研究
目的:研究益生茵制剂来源的青春双歧杆茵对大肠埃希茵的体外抑茵作用.方法:将青春双歧杆菌与大肠埃希茵分别单独培养,测定不同培养时间的pH值和活茵数,然后将两茵进行混合培养,再测pH值和活茵数,并与单独培养时的结果进行比较.结果:琼脂平板打孔法显示青春双歧杆菌上清液有抑菌功能;共培养法显示青春双歧杆茵可抑制大肠埃希茵增殖的数量,而自身数量不受影响.结论:该益生茵制剂来源的青春双歧杆菌的酸性代谢产物是主要的抑茵物质.
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大豆低聚糖对肠道微生物的作用效应及各组分含量检测方法
目的:观察大豆低聚糖的肠道微生物的作用效应并建立一种大豆低聚糖各组分含量的检测方法.方法:采用青春双歧杆菌和产气荚膜梭菌为肠道微生物指示菌;使用μBondpak/CH氨基柱,高压液相色谱法,以纯水为洗脱液,分离大豆低聚糖各组分.结果:大豆低聚糖能有效促进青春双歧杆菌在体外的增殖,而产气荚膜梭菌则几乎不能利用;HPLC法有效分离和准确测定大豆低聚糖中的各组份.结论:大豆低聚糖是双歧杆菌的有效促生因子,HPLC方法是一种快速、准确、前处理简单、分离度高的含量检测方法.
关键词： 大豆低聚糖 青春双歧杆菌 产气荚膜梭菌 高压液相色谱法(HPLC) -
嗜酸乳杆菌和青春双歧杆菌对牙周致病菌的拮抗作用
目的:研究体外共培养时,嗜酸乳杆菌伍(Lactobacillus acidophilus,La)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescents,Ba)对牙龄叶啉单胞菌((Porphyronzonas gingivalis,Pg)、具核梭杆菌(Fusobacterium nuclearum,Fn)生长的作用,为牙周病生态防治提供实验依据.方法:La、Ba为作用菌,Pg、Fn为指示菌.采用杯碟法抑菌实验,观察抑菌圈形成情况.将指示菌菌液与作用菌无细胞提取液共培养2、6、24和48h,记录不同时间点菌液OD(560)值,了解作用菌代谢产物对指示菌的生长抑制作用.采用SAS9.0软件包对数据进行单因素方差分析.结果:杯碟法抑菌实验中,La仅对Pg的生长产生抑制作用,形成明显的抑菌圈.La无细胞提取液也能显著抑制Pg的生长(P<0.001).Ba对2种牙周致病菌无拮抗作用.结论:La代谢产物中存在有效的抑菌物质,对Pg生长有显著拮抗作用,可望用于牙周生态防治.
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双歧杆菌脂磷壁酸对2型糖尿病大鼠C-反应蛋白的影响
C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是肝细胞在IL-6等细胞因子作用下合成的一种急性时相反应蛋白,当机体发生炎症、损伤等应激反应时其血清水平急剧升高.研究证实CRP在2型糖尿病患者体内含量较高,且与该病及其并发症的发生、发展关系密切[1].双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoicacid,LAT)是一种重要的免疫调节剂,具有抗感染、抗肿瘤、降血脂和延缓糖尿病发生等生物学作用[2].本实验通过研究青春双歧杆菌脂磷壁酸对2型糖尿病大鼠血清CRP含量和肝细胞CRP mRNA表达水平的影响,探讨其应用在糖尿病预防及临床治疗中的可行性.
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青春双歧杆菌酸奶治疗妊娠期便秘的临床观察
目的 观察和评价青春双歧杆菌酸奶治疗妊娠中、后期便秘的临床疗效.方法 将152例妊娠期便秘患者随机分为治疗组和对照组,均给予基础治疗,治疗组同时每天晚饭后1h饮用200 mL低活菌浓度在108 cfu/mL以上的青春双歧杆菌酸奶,10 d后观察疗效.结果 治疗组治疗总有效率为97.37％,显著高于对照组的51.32％ (P＜0.01),治疗组大便频率提高到每周4.60±2.01次,显著高于对照组的每周2.95±1.05次(P＜0.01),治疗组无不良反应.结论 青春双歧杆菌酸奶治疗妊娠中、后期便秘疗效显著.
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青春双歧杆菌耐氧菌株的筛选及生长条件研究
目的:通过自制培养基筛选耐氧双歧杆菌,并对此菌的生长特性进行研究.方法:将耐氧菌株接种于自制的增菌培养基和胰蛋白胨大豆肉汤培养基中,分别在CO2、需氧环境中37 ℃培养,于不同时间取样测定吸光值,绘制生长曲线,对细菌进行平板计数并对其形态菌落进行观察.结果:耐氧双歧杆菌在CO2、需氧环境中均能生长,但生长速度、高活菌数、形态和菌落特征不同,在CO2环境中生长较好.结论:耐氧双歧杆菌在CO2、需氧环境中均能生长.
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椰子汁对青春双歧杆菌体外增殖的影响
目的 探讨椰子汁(CM)对青春双歧杆菌(BFA)体外增殖的作用.方法 将BFA接种于不同浓度的CM培养基和MRS液体培养基中,37℃厌氧堵养;通过测定光密度值的改变(△OD)及平板菌落数,分析BFA的体外生长情况.结果 各浓度CM培养基24 h的△OD值均大于对照组(P<0.05),且E>0;培养0 h时各浓度CM培养基的平板菌落数与对照组相比差别无统计学意义(P>0.05),培养4 h、8 h、12 h、16 h、20 h时的平板菌落数均多于对照组(P<0.05);12 h、16 h、20 h时平板菌落数均多于同组培养0 h、4 h、8 h时,差异有统计学意义(P<0.05),但各CM组培养12 h、16 h、20 h时培养基的平板菌落数组内比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组培养基培养16 h及20 h时的平板菌落数相比筹别无统计学意义(P>0.05),与间组培养0 h、4 h、8 h、12 h时相比差别有统计学意义(P<0.05).结论 各浓度的CM对BFA体外增殖均起促进作用,并可以缩短该菌到达生长稳定期的时间,可以作为BFA体外培养的天然培养基.
