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益生菌在当前市场的应用现状
近年来，一些益生菌已被卫生部批准作为新资源食品，广泛应用于乳制品行业，同时也逐步被应用于其他功能性食品，如固体饮料、果汁、冰淇淋、糖果、巧克力、泡菜等。在亚洲地区益生菌普遍应用于奶制品领域，例如酸奶、乳酸菌饮品等。常见益生菌主要指两大类乳酸菌群：一类为双歧杆菌，常见的有婴儿双歧杆菌，长双歧杆菌，短双歧杆菌，青春双歧杆菌等；另一类为乳杆菌，如嗜酸乳杆菌，干酪乳杆菌，副干酪乳杆菌，鼠李糖乳杆菌，植物乳杆菌和罗伊氏乳杆菌等。
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表达干扰素-α2b重组长双歧杆菌工程菌的制备
目的 构建表达人干扰素-α2b(hIFN-α2b)蛋白的双歧杆菌工程菌,并验证靶蛋白的表达水平. 方法 人工合成hIFN-α2b基因,插入双酶切的pBAD质粒,构建重组质粒pBAD-IFN.制备双歧杆菌感受态,用pBAD-IFN电转化后PCR鉴定、筛选阳性克隆,筛选的阳性双歧杆菌克隆在L-阿拉伯糖诱导下表达靶蛋白,并进行Western blot检测.结果测序和双酶切鉴定表明成功构建重组质粒pBAD-IFN,Western blot检测证明氨苄青霉素筛选出的该质粒转化双歧杆菌阳性克隆经L-阿拉伯糖诱导表达分子质量单位为18 ku的hIFN-α2b蛋白. 结论 hIFN-α2b表达载体pBAD-IFN转化双歧杆菌后可表达hIFN-α2b蛋白.
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双歧杆菌肠道内调控表达肠道病毒71型VP1蛋白的实验研究
目的 构建重组肠道病毒71 VP1基因双歧杆菌,制成口服疫苗,用于EV71感染预防. 方法 扩增EV71病毒VP1基因并将其插入到大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pBBAD/Xs中,构建VP1表达载体(pBBADs-VP1),通过Western blot检测VP1蛋白在pBBADs-VP1转化菌中的表达.选取BALB/c小鼠,分为B-VP1组、VP1组、GFP组和生理盐水组,B-VP1组口服pBBADs-VP1-转化双岐杆菌,VP1组腹腔注射大肠埃希菌表达纯化的重组VP1蛋白,GFP组口服pBBADs GFP转化双岐杆菌,生理盐水组口服生理盐水,观察pBBADs-VP1-转化双岐杆菌口服免疫对EV71感染的免疫反应:包括病毒的中和抗体滴度、抗EV71-VP1抗体以及诱导脾脏和淋巴集结中Th1免疫反应. 结果 与GFP组及生理盐水组比较,B-VP1组及VP1组中和抗体滴度及抗EV71 VP1抗体水平,均显著增加;口服表达VP1蛋白长双歧杆菌和注射VP1蛋白都会诱导Th1细胞因子免疫反应(P＜0.05),表达VP1蛋白长双歧杆菌较易诱导局部肠道的Th1模式,而注射VP1蛋白较易诱导全身性免疫.攻毒试验显示,VPI和B-VP1组新生鼠攻击后第15 d(剂量1 000 LD50)存活率分别为20.00％和16.67％,对照组无小鼠存活. 结论 利用长双歧杆菌表达VP1蛋白的口服疫苗可能成功激发针对EV71病毒感染的特异性免疫应答.用表达VP1的重组双歧杆菌免疫母鼠,可以赋予新生小鼠以保护.
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长双歧杆菌液态发酵条件的优化及生长曲线的测定
目的 优化长双歧杆菌的液态发酵条件.方法 通过单因素试验方法,考察长双歧杆菌液态培养基的佳初始pH、培养温度、接种量和培养时间.结果 长双歧杆菌的佳发酵条件为:发酵液初始pH 7.0、发酵培养温度39℃、发酵接种量6%、佳培养时间8～10 h.结论 本课题研究确定的发酵工艺有效地提高了长双歧杆菌的培养效率.
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金双歧杆菌制剂在儿科的临床应用体会
金双歧是由长双歧杆菌、保加利亚乳杆菌及嗜热链球菌组成的复合活菌制剂,其中长双歧杆菌是人体肠道中重要的生理性细菌,在体外经过长期抗酸耐氧驯化,能经过胃酸屏障,提高稳定性;保加利亚乳酸杆菌及嗜热链球菌为双歧杆菌的生长提供了理想的厌氧环境.使双歧杆菌更易在肠道定植和繁殖.该产品采用真空包装.制成奶片可保证在保质期内有较高的活菌数,且口感好,易被儿童接受.
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微生态制剂(双歧三联活菌胶囊)治疗肠易激综合征的临床观察
双歧三联活菌胶囊(贝飞达,Bifido)是中国预防医学科学院流研所海斯药业有限公司开发出的新一代微生态制剂,为长双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌经适当配合制成的活菌制剂,该3种菌皆分离自健康人体,易于在肠道定植,能直接补充肠道正常生理细菌,通过生物拮抗,抑制病原菌,调整肠道菌群失调,改善肠道功能和肝功能,增强免疫,预防肠道肿瘤等多种生理作用.我科用双歧三联活菌胶囊治疗腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS),旨在评价双歧在联活菌胶囊在IBS治疗中的疗效和安全性,探讨肠道感染和肠道菌群失调与IBS的发病关系.
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金双歧治疗急慢性腹泻的临床观察
金双歧是由长双歧杆菌、保家利亚乳杆菌、嗜热链球菌组成的活菌制剂. 我院于1998年6月～1998年12月应用内蒙古双奇药业有限公司生产的金双歧[批号:(98)卫药试字(蒙双奇)S-01号]治疗急慢性腹泻64例,取得较好效果,现报告如下:
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菊花水煎液对长双歧杆菌促生长作用的探讨
目的 研究菊花水煎液促进长双歧杆菌的体外增殖与活性的作用,初步探讨它作为一种双歧因子的条件.方法 以菌液A600值、pH、活菌计数及发酵牛乳的凝乳时间、pH、滴定酸度等为指标,研究菊花水煎液对长双歧杆菌生长的影响,并用K-B琼脂法初步研究菊花水煎液对几种常见肠道菌群的抑/促菌作用.结果 在5%添加菊花水煎液的培养基中长双歧杆菌的菌体浓度(A600值及活菌计数)均明显高于空白对照,菌液pH也均低于空白对照;长双歧杆菌发酵含有菊花水煎液的牛奶后,凝乳时间缩短,乳液的滴定酸度高于空白对照,pH也相应降低.菊花水煎液对几种常见肠道致病菌有较强的抑菌作用.结论 菊花水煎液能促进长双歧杆菌的体外增殖与活性,且具有一定的选择性;菊花有可能成为一种良好的双歧因子或益生元制剂的候选物质.
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长双歧杆菌NQ-1501脂磷壁酸提取及免疫功能的研究
目的 确定长双歧杆菌脂磷壁酸的佳提取工艺及其免疫调节作用.方法 通过对不同方法提取长双歧杆菌脂磷壁酸含量的测定及对昆明小鼠免疫球蛋白含量和T细胞、B细胞的增殖检测来探讨长双歧杆菌脂磷壁酸对小鼠细胞免疫的调节作用.结果 采用10％ TCA水浴(38℃、3h)提取脂磷壁酸效果好,LTA对体液免疫有一定的刺激作用,并且能够促进T细胞和B细胞的增殖.结论 长双歧杆菌LTA具有免疫功能.
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富硒转白细胞介素2基因双歧杆菌对小鼠移植瘤H22的治疗作用
目的 评价富硒和转白细胞介素2(IL2)基因双歧杆菌对小鼠移植瘤H22的抑制效果.方法通过电转导将含IL2质粒导入到长双歧杆菌(Bifidobacterium longum,B.longum)中,将转IL2基因双歧杆菌接种到添加了亚硒酸钠(Na2 SeO3)的培养基中,利用微生物的富集及转化作用,形成富硒的含IL2基因质粒的双歧杆菌(Se-B.longum-IL2).结果利用双歧杆菌的肿瘤厌氧区靶向性,通过荷肝癌H22的小鼠尾静脉注射Se-B.longum-IL2,取得了良好的抑瘤效果与荷肝癌小鼠生存延长效果.结论转IL2基因双歧杆菌和富硒联合后对小鼠肝癌有明显的基因治疗前景.
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长双歧杆菌完整肽聚糖对小鼠免疫功能的影响
目的 比较长双歧杆菌及其完整肽聚糖的免疫调节作用.方法 通过研究长双歧杆菌完整肽聚糖对植瘤小鼠淋巴细胞的转化、抑瘤率、生命延长期以及对细胞Bcl-2和Bax表达的影响来探讨它们对小鼠细胞免疫的调节作用.结果 与对照组相比,完整肽聚糖使淋巴细胞转化增加、抑瘤率提高、延长生命期增加、Bcl-2阳性表达率减小而Bax基因表达增加.结论 长双歧杆菌与其完整肽聚糖均有抑制S180肿瘤的作用,但完整肽聚糖的效果优于长双歧杆菌.
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长双歧杆菌发酵培养基的优化
目的 对长双歧杆菌液态发酵培养基进行优化.方法 以长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)为发酵菌株,以MRS培养基为基础培养基,以发酵液活菌数为指标,通过单因素添加实验考察发酵培养基的碳源和氮源的种类,并验证优化后培养基的效果.结果 优化后培养基的适碳源为葡萄糖,适氮源为酪蛋白胨、牛肉蛋白胨、水解乳蛋白,发酵液活菌数达到2.09×109CFU/mL,比原MRS培养基(1.22×109 CFU/mL)提高了71.30％.结论 优化后培养基优于原MRS基础培养基,可应用于长双歧杆菌的液态发酵.
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高特异性长双歧杆菌多克隆抗体的制备
目的 制备高特异性长双歧杆菌多克隆抗体,为长双歧杆菌的免疫学检测提供参考.方法 以破碎的长双歧杆菌细胞碎片为抗原免疫小鼠,制备抗血清;利用偶联相同抗原的磁珠,分离纯化长双歧杆菌多抗,分别采用间接ELISA、SDS-PAGE和点杂交法检测纯化多抗的效价、纯度和交叉反应性.结果 所制备的纯化多抗效价约为1:1 500,回收率约为80%,纯度可达83%.纯化的多抗有效消除了与金黄葡萄球菌的非特异性交叉反应.结论 已制备出高特异性的长双歧杆菌多克隆抗体,可用于长双歧杆菌制剂的菌体检测.
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金双歧治疗婴儿继发性乳糖不耐受86例临床分析
金双歧是由长双歧杆菌、保家利亚乳杆菌、嗜热链球菌组成的活菌制剂.我科于1999年6月～2002年6月应用内蒙古双奇药业有限公司生产的金双歧治疗婴儿继发性乳糖不耐受86例,取得较好疗效,现报告如下.
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长双歧杆菌染色体上的基因BLJ_864和BLJ_865构成的Ⅱ型毒素—抗毒素系统
目的 鉴定Bifidobacterium longum JDM301(B.longum JDM301)染色体上的BLJ_864、BLJ_865是否构成mazEF家族的一组Ⅱ型毒素—抗毒素系统(TA系统).方法 通过RT-PCR分析BLJ_864和BLJ_865在B.longum JDM301以及E.coli中的共转录;通过将带有BLJ_864和BLJ_865的完整操纵子的质粒转化入E.coli证明同一操纵子中的BLJ_864、BLJ_865所编码的抗毒素蛋白和毒素蛋白共表达;通过在E.coli中单独表达BLJ_864编码的毒素蛋白或将其与BLJ_865编码的抗毒素蛋白共表达,鉴定BLJ_864编码的毒素蛋白对细菌生长的抑制作用及其对应的BLJ_865编码的抗毒素蛋白能否消除毒素蛋白的生长抑制作用.结果 BLJ_864和BLJ_865构成一个二元操纵子,两者在其天然菌株B.longum JDM301中可以共转录;异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下,BLJ_864和BLJ_ 865所编码的抗毒素蛋白和毒素蛋白在异源宿主E.coli中共表达.BLJ_864编码的毒素蛋白的表达抑制异源宿主E.coli的生长,而将BLJ_865所编码的抗毒素蛋白与BLJ_864编码的毒素蛋白共表达则可以拮抗毒素蛋白的生长抑制作用.结论 B.longum JDM301基因组中的假定基因BLJ_864和BLJ_ 865编码一组有功能的、隶属mazEF家族的Ⅱ型TA系统.
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双歧杆菌和乳杆菌原生质体融合的研究
电场诱导双歧杆菌与乳杆菌的原生质体融合来构建耐氧双岐杆菌.本文采用Mutanolysin分别制备长双歧杆菌和保加利亚乳杆菌的原生质体,通过电场诱导长双歧杆菌原生质体与热灭活的保加利亚乳杆菌原生质体融合,在双层再生培养基上筛选融合株.结果成功地构建出几株较为稳定的融合株.提高了双歧杆菌的耐性,使其在有关制剂中存活时间延长.
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长双歧杆菌抗毒素基因mazE细菌双杂交诱饵质粒的构建与鉴定﹡
目的：构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pBT－mazE，为长双歧杆菌的压力调控机制研究奠定基础。方法 PCR扩增抗毒素蛋白MazE的编码基因，插入到带有λcI基因的载体pBT构建诱饵质粒pBT－mazE。将pBT－mazE转化至大肠杆菌报告菌株XL－1 Blue MRF′Kan，检测诱饵蛋白mazE－λcI的表达。将pBT－mazE和pTRG空载体共转化报告菌株XL－1 Blue MRF′Kan，通过3－氨基－1，2，4－三氮唑（3－amino－1，2，4－triazole，3－AT）选择性筛选平板检测诱饵质粒的自激活作用。结果酶切和测序结果显示MazE蛋白编码序列成功克隆入载体pBT，融合区读码框正确。诱饵质粒pBT－mazE能够表达诱饵蛋白mazE－λcI。 pBT－mazE和pTRG空载体共转化的报告菌株XL－1 Blue MRF′Kan在含有3－AT的选择性筛选平板上无菌落生成，而在no 3－AT非选择性筛选平板上生长良好，表明诱饵质粒pBT－mazE在细菌双杂交系统中无自激活作用。结论所构建的诱饵载体pBT－mazE可以用于细菌双杂交的进一步实验。
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携带IL-10基因双歧杆菌载体的构建及鉴定
目的：构建并鉴定携带人IL-10基因的大肠杆菌-双歧杆菌穿梭分泌型表达载体，探索基因治疗的新型载体。方法选择以往试验已构建好的质粒载体pBADs-GFP与生物合成的含有hIL-10质粒，通过双酶切、酶连反应构建并鉴定 pBADs-hIL-10穿梭质粒，将 pBADs／hIL-10质粒电转化入长双歧杆菌（NCC 2705），合成BL-hIL-10，筛选出阳性克隆菌株，用RT-PCR法验证质粒hIL-10的基因表达后，以0．2％ L-阿拉伯糖（L-Arb）诱导表达12 h、24 h、36 h后，分别用ELISA和Western blot法验证转基因双歧杆菌中hIL-10蛋白表达水平，并选择佳的诱导表达时间。结果在长双歧杆菌NCC 2705中，成功的构建了能分泌hIL-10蛋白的BL-hIL-10传递体；其佳诱导的表达时间是24 h。结论在长双歧杆菌（NCC 2705）内成功构建了一种新的、有效的IL-10的传递系统，BL-hIL-10能稳定表达具有生物活性的hIL-10蛋白。为IL-10转基因双歧杆菌治疗IBS的的研究奠定了基础。
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猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达
目的 在成功构建猪带绦虫大肠杆菌双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W 4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况.方法 将猪带绦虫大肠杆菌双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W 4B TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS PAGE和Western blot分析表达情况.结果 酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX TSO45W 4B TSOL18成功转入长双歧杆菌.SDS PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为55 kD,与预期结果相一致.Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别.结论 猪带绦虫TSO45W 4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性.
关键词： 猪带绦虫 TSO45W-4B-TSOL18融合基因 长双歧杆菌 表达 -
无乳糖婴儿配方奶粉治疗秋季腹泻继发乳糖不耐受110例临床观察
婴幼儿秋季腹泻常见的病原体为轮状病毒,该病毒破坏肠黏膜可引起继发性乳糖不耐受,使腹泻迁延.我院2004年诊治秋季腹泻患儿345例中,继发性乳糖不耐受210例(占61%),治疗组110例,给予雀巢奶粉公司生产的无乳糖婴儿配方奶粉(安儿宁);对照组100例用内蒙古双歧药业有限公司生产的金双岐(金双岐为长双歧杆菌、保家利亚乳杆菌、嗜热链球菌三联活菌制剂)治疗,两组进行比较,结果治疗组腹泻病程明显缩短,总有效率高于对照组,现报告如下.
