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多种生长因子联合使用对体外培养人骨骼肌卫星细胞免疫组化表达及分裂指数的影响
1 材料和方法1.1 材料收集武汉大学人民医院病理科2000～2006 年临床手术切取的骨瘤周围正常骨骼肌标本25例,年龄小8岁、大18岁、平均13岁,其中男性18例、女性7例.
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大鼠心肌梗死后心肌细胞核分裂指数及心肌肌动蛋白表达变化
目的通过观察大鼠心肌梗死后心肌细胞增殖分化、心肌肌动蛋白表达水平改变情况,探讨其在梗死后心肌重塑中的地位与可能的生物学意义.方法结扎大鼠左冠状动脉制备心肌梗死模型,观察大鼠心肌梗死后血流动力学及心肌组织病理形态改变评估梗死面积;荧光免疫法检测核分裂指数及心肌肌动蛋白表达量.结果大鼠心肌梗死后左心室舒张、收缩功能均下降;与对照组相比,心肌细胞核分裂指数增加了1.24、2.00、2.23、2.20和1.89 倍(均为P《0.01);保留有丝分裂能力心肌细胞主要存在于维持着较充足的血氧供应的缺血边缘及缺血远端心肌;非梗死区域肌动蛋白表达水平在心肌梗死后7、14和30 d分别增加了1.12、1.25和1.23倍(均为P《0.05).结论心肌梗死所致的心肌细胞丧失激活了心肌细胞的分裂增殖,同时心肌肌动蛋白表达增加,二者共同参与了非梗死区域心肌肥厚与心室重塑的发生发展,维持病理状态下的心脏功能.
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一种改良的骨髓染色体制备与G显带方法
目前制备骨髓染色体方法主要有直接法、短期培养法和同步化法.同步化法操作技术要求高、分裂指数低,不易推广[1].随着间期荧光原位杂交技术及比较基因组杂交技术应用于白血病的研究,拓展了染色体分析的范围,提高了识别异常的能力,但因荧光试剂和检测设备昂贵,尚难广泛应用于临床.我们介绍一种改良的骨髓染色体制备与G显带方法.我们应用该方法对150例恶性血液病患者进行骨髓染色体检查,获得了满意效果.现将具体方法介绍如下.
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灵芪胶囊含药血清对人红白血病K562细胞增殖抑制作用的影响
目的:观察灵芪胶囊(LQC)含药血清在体外对K562白血病细胞增殖抑制作用的影响.方法:采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,并测定抑制率、分裂指数以及克隆形成能力,观察灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的抑制作用;用Wright-Giemsa染色方法观察肿瘤细胞形态的变化.结果:不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系;灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的分裂指数和克隆形成能力均具有显著的降低作用,在一定的时间内与剂量呈正相关,同时亦使肿瘤细胞的形态结构发生改变.结论:灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞具有细胞毒作用,其直接杀伤和破坏肿瘤细胞的作用是灵芪胶囊抗肿瘤的主要机理之一.
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人外周血染色体标本制备的问题分析
目的:通过对比外周血染色体标本制备的常规方法与改良方法,分析影响其成败的因素.方法:对100例标本同时进行常规与改良方法的操作,对比同一个标本两种方法得出的染色体显带的差异.结果:改良方法略优于常规方法,适合在实验室开展.
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人参皂苷Rg3联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM增殖的抑制作用
背景与目的:人参皂苷(Rg3)有抑制肿瘤细胞生长的作用,顺铂为诱导肿瘤凋亡的化疗药物,中西医结合治疗肿瘤日益受到重视.本研究探讨Rg3联合顺铂对高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM增殖的抑制作用.方法:采用我院自建的高转移人卵巢癌细胞系H0-8910PM进行实验研究.实验分成6组:①空白对照组:只加新鲜的全培养液;②Rg3低浓度组:10、μg/ml Rg3培养液;③Rg3中浓度组:20μg/ml Rg3培养液;④Rg3高浓度组:40μg/ml Rg3培养液;⑤顺铂单药对照组:含10μg/ml顺铂的培养液;⑥顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组:含10μg/ml顺铂+20μg/ml Rg3培养液.分别观察各组对细胞核分裂指数、细胞集落形成率的影响.结果:随着Rg3浓度增高及Rg3和DDP的联合应用细胞核分裂指数下降,以联合用药组下降明显(F=5.498,P=0.011).空白对照组和Rg3高浓度组,顺铂单药组及顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组相比,差异有非常显著性(P=0.011,0.007和0.001);Rg3低、中浓度组分别与顺铂+Rg3(中浓度)联合用药组相比,差异有显著性(P=0.010和0.015).细胞集落形成率随着Rg3浓度增高而下降(F=100.69,P=0.000),高浓度的Rg3、DDP和联合用药组三者结果相近(P=0.887).Rg3高浓度组、顺铂单药组合顺铂+Rg3(中浓度)组与空白对照组、Rg3低浓度组和Rg3中浓度组相比,及Rg3高浓度组与其他各组相比,差异均有显著性(P<0.05).结论:Rg3对高转移人卵巢癌细胞有一定的杀伤作用,能有效抑制细胞核分裂、细胞集落形成,但未发现Rg3和顺铂联合用药会相加或协同作用.
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幕上星形细胞瘤的细胞凋亡及其与增殖的关系
目的为揭示幕上星形细胞瘤的细胞凋亡及其与增殖的关系.方法采用TUNEL法检测肿瘤凋亡细胞、HE染色检测分裂相肿瘤细胞.结果肿瘤细胞凋亡指数(AI)随着肿瘤的恶性程度的增加而增大;AI值越大,预后越差;凋亡指数/分裂指数(AI/MI)在高与低级别肿瘤间的差别有显著性意义(P＜0.01);多因素分析年龄分组、AI、AI/MI、放疗与预后关系密切(均P＜0.05).结论AI是提示幕上星形细胞瘤预后的重要指标,亦是肿瘤分级的重要辅助指标,但多个指标的结合更有利于对预后的判断.
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大肠良恶性病变细胞凋亡与增殖的观察
目的观察凋亡指数(AI)和分裂指数(MI)在病变的生物学行为及判断预后中的价值.方法用62例大肠良恶性病变标本,利用图像分析系统,观察分析细胞的凋亡指数及分裂指数与病变性质的关系.结果正常粘膜上皮细胞AI为5±1,在浸润性大肠癌病变中AI为3.4±1.87.统计学分析处理发现,浸润性癌细胞AI显著低于其他病变(P＜0.01),而MI显著高于其他病变(P＜0.01),表明细胞生长旺盛.结论提示AI,MI在病变的生物学行为及其判断病人预后有一定的参考价值.
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029 川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的影响
目的: 探讨川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的防治机制. 方法: 以高脂高胆固醇(Cho)膳食制备大白兔高脂高Cho血清. 贴块培养法进行VSMCs原代培养及传代. 原代培养到第9～12天, 组织块周围的细胞生长融合成片并铺满瓶底时, 进行VSMCs传代培养. 实验选用第3代传代培养的VSMCs. 实验分为正常组用含双抗和胎牛血清的RPMI1640培养液培养, 高脂组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液培养, 秋水仙碱组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液加入秋水仙碱培养, 川芎嗪低、中、高剂量组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液分别加入20、 200、 2000 μg/ml川芎嗪培养. 结果: 川芎嗪能明显减轻高脂血清诱导培养VSMCs之组织形态和超微结构改变, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs具有典型收缩表型的VSMCs形态和超微结构, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs为典型合成表型的VSMCs源性泡沫细胞形态和超微结构, 在含川芎嗪的高脂血清培养基中培养VSMCs的细胞形态界于泡沫细胞与VSMCs之间. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之迁移距离, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定的运动而具有一定的迁移距离, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的迁移距离增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs迁移距离降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之生长计数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能分裂增生而具有一定的生长计数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的生长计数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs的生长计数降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之分裂指数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定程度的分裂而具有一定的分裂指数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs生的分裂指数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs分裂指数降低. 结论: 川芎嗪能通过抑制的VSMCs表型转换, 迁移速率, 生长速度, 分裂指数, 荷脂过程和损伤过程等多个环节, 逆转高脂血清诱导培养VSMCs的粥样硬化样细胞病变.
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眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对人鼻咽癌CNE-2细胞株的影响
目的:了解眼镜蛇毒灌胃后的兔血清(serum of rabbit taking orally cobra venom,SRCV)对人鼻咽癌CNE-2细胞的影响.方法:采用体外细胞培养的方法,观察SRCV对人鼻咽癌CNE-2细胞及人胚肺成纤维细胞的细胞毒作用,及对细胞生长和分裂指数的影响.结果:发现SRCV能够明显抑制鼻咽癌CNE-2细胞的生长,且其抑制效应随剂量的增加而增加,但该血清对正常人胚肺成纤维细胞的生长却没有明显影响.结论:SRCV对鼻咽癌CNE-2细胞的生长有明显的抑制作用,并且有高度的选择性.
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人外周血淋巴细胞高分辨染色体制备技术的研究
目的:建立一种具有分裂指数高和染色体分散好等优点的550～850条带纹高分辨染色体的制备方法.方法:取10例健康人外周血为样本制备淋巴细胞高分辨染色体.固定5-氟尿嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、胸腺嘧啶核苷、溴化乙锭、秋水仙胺的剂量,进行5个因素3个水平的正交设计15种实验方案.5个因素分别为培养时间、胸腺嘧啶核苷、溴化乙锭、秋水仙胺作用时间以及低渗时间.3个水平分别为培养时间64、72、80 h；胸腺嘧啶核苷作用时间16、17、18 h；溴化乙锭作用时间3、4、5h;秋水仙胺作用时间10、15、20 min以及低渗时间30、40、50 min.每例样本同时采用15种方案进行实验,比较各方案带纹在550条以上时染色体分裂指数和分裂相分散的情况.结果:在15种方案中培养时间以及秋水仙胺作用时间对分裂指数有显著影响(P＜0.01),其中培养72 h后加5-氟尿嘧啶核苷和尿嘧啶核苷进行同步化和秋水仙胺作用15 min高分辨染色体分裂指数大.37℃低渗40 min高分辨染色体分散效果佳.结论:本实验方案的高分辨染色体制备方法,具有分裂指数高和染色体分散好等优点,具有较好的推广价值.
