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清毒饮、养正片影响白血病K562细胞增殖周期、细胞凋亡的实验研究
目的:观察清毒饮、养正片诱导人白血病细胞株K562细胞凋亡及对细胞增殖周期的作用;探索其时效关系,为临床提供选择佳用药时机的实验基础.方法:制备含清毒饮、养正片药物血清,建立相应的培养体系,加入含药小鼠血清,培养K562细胞株;分别于培养12、24、36、48、72h收集细胞,固定、染色、上流式细胞仪进行细胞周期、细胞凋亡的检测.结果:人白血病K562细胞株存在有自然凋亡,正常小鼠血清无诱导该细胞凋亡的作用;清毒饮、阿糖胞苷具有诱导细胞凋亡的作用,且随着培养时间的延长凋亡率愈加明显.清毒饮对K562细胞周期的影响,还表现出明显的时间依赖性;随着培养时间的延长,当细胞出现明显凋亡时,细胞株S期显著下降,G0/G1期升高,提示清毒饮和清毒加养正合剂都可引起K562细胞株的G0/G1期阻滞,对凋亡的敏感性增强.结论:清毒饮能抑制K562细胞增殖、促进细胞分化、诱导细胞凋亡,提示该中药复方具有从分子水平抗肿瘤细胞增殖的效应,这也是中药复方协同化疗药物治疗白血病在增效减毒方面的关键机制;清毒饮对K562细胞发生细胞毒作用,是通过抑制其细胞周期S期、将其阻滞于G1期,并通过促进K562细胞凋亡实现的,其作用强度与时间呈密切正相关.
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氯化锂诱导裸鼠移植瘤模型K562细胞向红系分化的研究
目的 研究不同浓度LiCl对K562裸鼠移植瘤模型的白血病细胞增殖及凋亡的影响,并具体研究低浓度氯化锂(10mmol/L LiCl )在体外对K562裸鼠移植瘤模型的白血病细胞增殖及凋亡的影响.方法 制备慢性粒细胞白血病细胞系K562裸鼠移植瘤模型,用不同浓度的LiCl(10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L)来作用,药物作用组为不同的实验组,对照组加等量的生理盐水,以阿糖胞苷(Ara-C)药物处理作为阳性对照,在体内观察LiCl对慢性粒细胞白血病系K562裸鼠移植瘤模型的作用效果.并采用液体培养试验,四唑盐(MTT)比色试验,集落培养试验为指标观察10mmol/L LiCl对K562裸鼠细胞增殖的影响,采用联苯胺染色实验及流式细胞仪检测细胞膜分化抗原CD71的表达检测细胞的分化.结果 ①30mmol/L LiCl在瘤体大小、肿瘤浸润范围、小鼠生存期等方面明显优于其他浓度的LiCl,并都对K562细胞具有抑制增殖的作用.②在LiCl(10 mmol/L)作用下,联苯胺染色实验可见黄色的阳性细胞,流式细胞术检测CD71的表达量呈明显增强,提示10 mmol/L LiCl可诱导K562细胞向红系分化.结论 ①10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L LiCl都能抑制K562白血病细胞增殖,其中30mmol/L LiCl的效果佳②低浓度10 mmol/L LiCl 同样能抑制K562白血病细胞增殖和诱导其向红系分化.
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PTEN对髓系白血病细胞VEGF及MMP表达的影响
目的 探讨在慢性髓系白血病中与张力蛋白同源的10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)对血管内皮生长因子(VEGF)及金属基质蛋白酶(MMP)相互影响及其作用机制.方法 1)研究10例慢性髓系白血病慢性期CML-CP、10例急变期CML-BC及10例正常人骨髓单个核细胞内PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平变化.2)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性髓系白血病细胞系K562.MTT检测细胞增殖;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、VEGF、MMP-2和MMP-9 mRNA水平变化,Western blot及明胶酶谱检测PTEN、p-Akt、VEGF、MMP-2和MMP-9蛋白表达.结果 CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及正常对照组(P＜0.05),而VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及正常对照组(P＜0.05).以MOI=200转染K562细胞3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平均明显低于Ad-GPF组和未转染组(P＜0.05),PTEN与VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平呈负相关,转染Ad-PIEN-GFP组与转染Ad-GFP组比较VEGF、MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平分别降低79.12％,82.99％,82.52％,p-Akt及VEGF、MMP-2、MMPO蛋白表达水平分别降低96.15％,80.88％,65.03％,78.99％.结论 PTEN基因可能通过抑制VEGF、MMP-2、MMP-9表达,抑制髓系白血病细胞血管新生及侵袭.
关键词： PTEN基因 血管内皮细胞生长因子 金属基质蛋白酶 白血病 K562细胞系 -
熊果酸促进K562细胞凋亡
本研究旨在探讨熊果酸在体外对人红白血病K562细胞系的作用机制.采用MTT法和流式细胞术检测熊果酸对K562细胞的增殖抑制和杀伤效应;用彗星电泳分析熊果酸对K562细胞DNA的损伤;Hoechst33258荧光染色观察DNA片段化;细胞免疫化学染色检测Bcl-2和Bax的表达;Western blotting检测K562细胞内Caspase-3和磷酸化酪氨酸的表达和活性. 结果显示熊果酸在体外对K562细胞具有中度增殖抑制效应, 并呈浓度和时间依赖性.在熊果酸作用下K562细胞呈现凋亡征象,同时细胞内Bcl-2表达下降,Bax表达升高,Caspase-3被激活,磷酸化酪氨酸表达下降, 说明熊果酸在体外对K562细胞有诱导凋亡作用, 而提高Bax的表达、诱导Caspase-3活化及降低BCR/ABL的酪氨酸激酶活性可能是其作用机制之一.
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粉防己碱诱导人红白血病细胞凋亡的研究
目的探讨粉防己碱诱导人红白血病细胞(K562)凋亡的作用. 方法采用光镜、电镜、免疫荧光观察K 562细胞形态的改变,以流式细胞仪分析细胞周期,以ABC法检测细胞中Bcl-2和p53 蛋白的改变,以TUNEL法检测细胞凋亡. 结果 K562细胞经粉防己碱诱导48 h后,出现细胞凋亡早期形态学改变;流式细胞仪显示细胞DNA合成受到抑制;ABC法检测出细胞中Bcl-2水平降低和p53 水平升高;TUNEL法原位检测揭示有DNA断裂.结论粉防己碱可抑制K562细胞的生长,其作用与浓度相关, 终可导致细胞凋亡.
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Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562的抗肿瘤作用及机制研究
目的:探讨Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562细胞的凋亡、增殖和细胞周期的影响及其作用机制.方法:Rigosertib梯度浓度作用于HEL和K562细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,WST-1法绘制细胞增殖曲线,PI染色流式细胞术检测细胞周期,流式细胞术胞内染色检测胞内信号通路蛋白表达.结果:Rigosertib明显诱导HEL和K562细胞凋亡且呈现时间依赖性(r =0.997)和剂量依赖性(r =0.987);以低剂量Rigosertib浓度(0.5μnol/L)分别作用于HEL和K562细胞6-54 h,明显抑制HEL和K562细胞增殖,诱导HEL和K562细胞阻滞于G0/M期,G1期细胞比例明显降低.流式细胞术分析显示,Rigosertib激活胞内凋亡蛋白cleaved caspase 3和cleaved PARP蛋白的表达,同时抑制增殖蛋白BCL-2和Cyclin D1蛋白的表达.此外Rigosertib明显抑制AKT、磷酸化AKT(S473)和磷酸化GSK-3α/β(S21/9)的表达.结论:Rigosertib诱导白血病细胞系HEL和K562细胞凋亡,增殖抑制和细胞周期阻滞,其抗肿瘤作用可能通过抑制AKT-GSK信号通路而实现的.本研究为rigosertib进一步应用于临床前研究提供了实验依据.
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全反式维甲酸联合猪胆酸钠对K562和Kasumi-1细胞系生物活性抑制作用
本研究旨在探索全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合猪胆酸钠(SBA-Na)对人白血病K562细胞系及Kasumi-1细胞系生物学活性的影响及其作用机制.分别配制浓度为10-6 mol/L(W1)、10-4 mol/L(W2)的ATRA溶液及浓度为100 μg/ml(Z1)、200 μg/ml (Z2)的SBA-Na溶液,分别使用W1、W2、Z1、Z2、W1+ Z1、W2+Z2处理上述2种细胞系,并设立不加药的空白对照组.镜下观察不同处理组细胞形态及生长情况;应用CCK-8法检测细胞增殖能力,绘制细胞生长抑制曲线;分别采用PI单染和PI/Annexin V双染流式细胞术检测各加药组K562细胞和Kasumi-1细胞的细胞周期及凋亡的变化;采用实时荧光定量PCR (RQ-PCR)法检测K562细胞系各组Cyclin A基因表达量的变化.结果表明,ATRA及SBA-Na对2种细胞均有抑制增殖作用,两者联合用药的作用更明显;各给药组与对照组相比,细胞周期分布发生明显变化,处理组细胞凋亡明显增加,尤以ATRA联合SBA-Na给药组凋亡为明显.低浓度SBA-Na处理组Cyclin A表达上调,其他处理组Cyclin A表达均下调,且存在量效关系.结论:ATRA及SBA-Na均可抑制K562细胞及Kasumi-1胞系增殖,促进其凋亡,且二者联合效果更明显,对于K562细胞系,两者可能是通过下调Cyclin A基因表达而发挥作用.
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MicroRNA-17-92簇对K562细胞生物学特性的影响及机制初探
本研究旨在探讨microRNA-17-92对K562细胞生物学特性的影响.以K562细胞系为模型,采用lipofectin2000转染miR-17-92 mimic,应用Q-PCR方法鉴定基因表达水平,CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测K562细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI标记检测K562细胞的凋亡;细胞经过乙醇固定后利用流式细胞仪检测K562细胞周期变化,Western blotting检测相关蛋白Crk的表达.结果显示:K562细胞系转染miR-17-92 mimic后miR-17-92表达增高;miR-17-92高表达后K562细胞的增殖能力增强、在细胞周期方面由G1期向S期细胞增加;同时,miR-17-92 mimic能够抑制乏血清诱导的K562细胞凋亡;Western blot检测显示miR-17-92 mimic促进Crk蛋白的表达.结论:miR-17-92可以促进K562细胞增殖,抑制其凋亡并调控细胞周期变化.
关键词： miR-17-92簇 慢性髓性白血病 K562细胞系 -
miRNA-663在不同的白血病细胞系的表达水平及其生物学功能的初步研究
本研究通过5-氮杂胞苷(5-aza)处理K562细胞系,寻找去甲基化后表达上调的microRNA(miRNA),检测其在正常人、慢性髓系白血病(CML)病人和白血病细胞系的表达水平,探讨其对K562细胞系增殖的影响.采用miRNA芯片筛选5-aza处理后表达上调的miRNA,结合生物信息学在上调的芯片结果中选取miRNA前体上游带有CpG岛的miR-663、miR-638及miR-92b,通过荧光实时定量PCR的方法验证在芯片结果中这3个上调的miRNA,证实miR-663在去甲基化后表达上调.分别在K562细胞系、U937细胞系、Kasumi细胞系、初治CML患者外周血白细胞及正常人骨髓白细胞检测miR-663的表达水平.通过甲基化特异性PCR(MSP)的方法,在K562细胞系检测miR-663前体上游CpG岛是否存在甲基化.通过瞬时转染的方法在K562细胞系过表达合成的miR663成熟体,观察其对K562细胞增殖的影响.结果表明:去甲基化后能在K562细胞系上调miR-663的表达水平,与正常人骨髓白细胞相比,初治CML病人的白细胞、白血病细胞系K562、U937及Kasumi的miR-663表达水平相对较低;MSP检测表明,在K562细胞系miR-663上游的CpG岛是甲基化的.体外K562细胞系过表达miR-663可以抑制K562细胞系的增殖.结论:在K562细胞系miR-663上游的CpG岛存在甲基化.与正常人相比,miRNA-663在CML病人、白血病细胞系K562、U937及Kasumi表达水平相对较低,5-aza可以上调miRNA-663在K562细胞系的表达,在K562细胞系过表达tniRNA-663可抑制K562细胞的增殖,提示miRNA-663在白血病中可能具有抑癌作用.
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DNA甲基化调控K562细胞系kir3dll基因表达
为分析kir3dl1基因启动子区的甲基化模式及其与基因表达的关系,探讨kir3dl1基因的表达调控机制,采用亚硫酸氢盐测序法检测K562细胞中kir3dil基因启动子区的甲基化状况,应用甲基化抑制剂5-氮胞苷处理K562细胞以诱导CpG岛去甲基化,观察启动子区CpG岛甲基化与kir3dl1基因表达的关系.结果显示:K562细胞中kir3dl1基因核心启动子区CpG二核苷酸甲基化频率在20%-100%之间;K562细胞中kir3dl1基因启动子序列在转录因子E2F可能的结合位点上存在1个碱基的突变,并形成1个新的被甲基化的CpG二核苷酸;应用甲基化抑制荆5-氮胞苷可以诱导不表达kir3dl1基因的K562细胞重新表达该基因.结论:K562细胞中kir3dll基因表达受启动子甲基化调控,对转录因子E2F的深入研究有助于了解其在kir3dll基因表达调控中可能的作用.
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Bmi-1沉默对K562细胞功能的影响
Bmi-1是一种转录抑制子,属于Polycomb家族成员之一.Bmi-1基因在调控正常或白血病干细胞的自我更新中起着至关重要的作用.缺乏Bmi-1表达的急性髓系白血病细胞遭遇了增殖阻止和表现了分化和凋亡的征兆,这些发现导致有人提议和认为Bmi-1在白血病治疗中可作为潜在靶点.本研究探讨靶向针对Bmi-1的短发夹RNA(shRNA)对人慢性髓系白血病K562细胞功能的影响.采用RNA干扰技术,构建靶向针对Bmi-1的shRNA真核表达载体,利用脂质体lipofactamine 2000将shRNA真核表达载体转染入K562细胞中,经G418(400 μg/ml)筛选得到抗性克隆.用PCR和Western blot分别检测转染shRNA后K562细胞中Bmi-1的mRNA和蛋白水平的变化;以MTT法检测干扰组、对照组和未转染组细胞间的增殖情况;以集落形成实验测定3组间集落形成能力.结果表明:在设计的4个shRNA片段中,有1个片段显示显著的抑制效果.该shRNA转染K562细胞后,在mRNA水平上Bmi-1的表达明显下调,Western blot在蛋白水平上也证实了Bmi-1表达显著下调.MTT法和集落形成实验显示了干扰组、时照组和未转染组细胞3者间的增殖能力没有显著差异.结论:抑制Bmi-1的表达并不能减少K562细胞的增殖,这提示了可能存在其它一些平行的信号通路在细胞转化中起重要作用,而且可能独立于Bmi-1的过表达.Bmi-1在慢性髓系白血病的转化中起着次要的作用.
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野生型p16和p53抑癌基因共转染对 K562细胞增殖的抑制作用
抑癌基因p16和p53在抑制肿瘤的发生中起重要作用,在髓细胞白血病细胞系K562中检测出这两种基因有纯合缺失.为探讨野生型p16和p53基因的转染与表达对K562细胞的生长影响,采用了脂质体介导外源野生型p16和p53共转染K562细胞,用免疫细胞化学染色检测p16和p53基因的表达,检测细胞生长曲线,采用流式细胞术进行细胞周期分析.结果显示,共转染后p53和p16在K562细胞中表达阳性率分别为23%和28%;细胞生长受到一定程度的抑制,G1期细胞的比例增加,S期细胞减少,与单独转染p53或p16基因的抑制作用有明显差别(P＜0.05).结论:外源野生型p16和p53基因的共转染比转染单基因对K562细胞生长有更明显的抑制作用,有可能成为白血病基因治疗的一种方法.
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Wilms瘤基因WT1表达与急性白血病微小残留病的检测
近年来发现急性髓性白血病(AML)有Wilms瘤抑制基因WT1的异常表达,且表达水平与预后呈负相关,提示其可作为一种新的白血病标志.为探讨WT1能否作为急性白血病微小残留病(minimal residual disease,MRD)的标志,我们采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定了WT1基因的灵敏度,并与肿瘤特异性标志基因进行比较.所有样本RNA的质量均用内对照c-abl基因证实.以两轮RT-PCR扩增WT1和肿瘤特异性融合基因检测白血病细胞的极限在NB4细胞分别为10-4和10,而在K562细胞分别为10-3-10-4和高于10-6;在29例供血员的外周血单个核细胞(MNC)均未检测到WT1基因表达,但在21例非恶性疾病患者骨髓MNC中有8例呈WT1基因阳性(38.1%).本研究提示,监测WT1表达可用于AML的疗效评价及MRD随访,并与是否存在肿瘤特异性标志无关.
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SCL基因反义寡核苷酸对K562和CEM细胞系的作用
干细胞白血病(SCL)基因是新发现的与白血病发生有关的癌基因.为进一步探讨SCL反义寡核苷酸对白血病细胞的作用,本研究应用SCL基因的反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(AS-PS-ODN)分别与K562和CEM白血病细胞系作用,观察细胞生长、分化、凋亡和SCL mRNA变化.结果显示:(1)AS-PS-ODN对K562和CEM细胞的生长有不同程度的抑制作用,并呈量效和时效关系;(2)AS-PS-ODN作用后K562细胞联苯胺染色阳性率明显增加;(3)AS-PS-ODN作用后K562细胞发生凋亡现象,但未观察到CEM细胞凋亡;(4)AS-PS-ODN作用后K562细胞和CEM细胞SCL mRNA表达水平减低,同时CEM细胞SIL-SCL mRNA表达水平也减低.结论:AS-PS-ODN能特异性抑制K562和CEM细胞的增殖,减低SCL mRNA和SIL-SCL mRNA表达水平,同时促进红系分化,诱导K562细胞过早凋亡.
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醛脱氢酶基因转导介导的K562细胞对环磷酰胺的耐受性
本研究的目的是观察经醛脱氢酶基因(ALDH1)转导的造血细胞对环磷酰胺的耐受性.以逆转录病毒载体pLXSN-ALDH1将醛脱氢酶基因导入人造血细胞系K562,应用PCR证实原病毒的整合,用RT-PCR检测ALDH1基因表达和用MTT法分析ALDH1过表达导致的4-氢过氧环磷酰胺的耐药表型.结果发现,逆转录病毒成功地介导了醛脱氢酶基因转移,全长ALDH1 cDNA以原病毒形式整合入受体K562细胞基因组,RT-PCR检测到ALDH1基因转录表达.ALDH1过表达的基因转移细胞对环磷酰胺的耐受性明显提高(4倍),IC50≈10 μmol/L.结论提示,体外ALDHl过表达足以引起对环磷酰胺耐受,为体内ALDH1基因转移以保护骨髓细胞免受环磷酰胺的毒性作用提供了实验依据.
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高三尖杉酯碱通过抑制P210bcr/abl诱导K562细胞凋亡
为探讨高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)抗慢性髓细胞白血病(CML)的机制,以CML细胞系K562细胞为对象,应用Annexin V-PI双标志和Western印迹杂交技术,观察HHT对细胞凋亡和P210bcr/abl癌蛋白的影响.结果表明,5-20 ng/ml浓度的HHT可诱导K562细胞凋亡,但随着药物浓度的增加细胞出现坏死性死亡;HHT可使细胞内融合蛋白P210bcr/abl的含量约减少70%,而对正常存在于细胞内的P145c-abl无影响.上述结果证实,HHT通过对P210bcr/abl的定向抑制作用促进CML细胞凋亡,这可能是其抗CML的分子机制.本研究为HHT在临床上的进一步应用提供了实验基础.
关键词： 高三尖杉酯碱 P210bcr/abl K562细胞系 慢性髓细胞白血病 -
5-氮杂-2＇-脱氧胞苷对人红白血病K562细胞系生物学活性及DNA结合抑制因子4基因表达的影响
本研究探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人慢性髓系白血病(CML)急红变细胞系K562细胞生物学活性和DNA结合抑制因子4(ID4)基因表达的影响,探寻白血病基因治疗的新靶点.应用甲基化特异性PCR方法检测K562细胞中ID4基因甲基化情况;实时荧光定量PCR检测5-Aza-CdR处理K562细胞后ID4 mRNA的表达水平;流式细胞术分析5 -Aza-CdR处理后细胞凋亡率和细胞周期的变化.结果表明,K562细胞中存在ID4基因的甲基化;5-Aza-CdR处理后K562细胞ID4 mRNA表达增加,并具有浓度依赖性,不同浓度药物处理组之间差异具有统计学意义(p＜0.01).5 -Aza-CdR可使K562细胞凋亡率增加,并且作用呈时间剂量依赖性.且细胞凋亡率与ID4 mRNA的相对表达水平呈高度相关(r=0.95).5-Aza-CdR处理K562细胞48小时后,随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞逐渐增多,G2/M期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G0/G1期.结论:甲基化转移酶抑制剂5-Aza-CdR 能促使CML急红变细胞系K562细胞中沉默的ID4基因重新表达,可能进而参与K562细胞凋亡和细胞周期阻滞的调控.
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腺病毒递送BMI-1shRNA
近年来发展了一些质粒载体介导shRNA的转录,然后在细胞酶的作用下加工成功能性的siRNAs.虽然这些载体较化学合成的siRNA有更多的优点.但仍存在相当多的缺点,如转染效率低和不能在体内使用.本研究建立一种没有上述缺点的腺病毒递送BmihRNAs系统,设计靶向人Bmi-1的载体.以pAdTrack CMV质粒为模板扩增CMV-GFP表达盒,从pGEIBMIhRNA质粒上酶切下U6-BMI-1 shRNA表达盒,克隆它们入穿梭质粒pShuttle中,然后与pAdEasy-1质粒基因重组产生腺病毒质粒pAd-BMIhRNA-CVM-GFP,转染293A包装细胞,收获病毒.病毒感染K562细胞后,在mRNA和蛋白水平上分别用Real Time-PCR和Westem blot检测BMI的表达水平.结果表明:成功构建了pGEIBMIhRNA腺病毒质粒并有效包装出病毒.感染BmihRNA腺病毒的K562细胞在mRNA和蛋白水平上均显著下调了Bmi-1的表达,而时照病毒没有明显的效果.结论:腺病毒是一种有效递送siRNA入哺乳动物细胞的载体.腺病毒递送siRNA载体可能成为siRNA药物的基因治疗载体.
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线粒体神经酰胺酶上调K562细胞Bcl-2蛋白表达水平
近,克隆了一种新的选择性定位于线粒体的神经酰胺酶,提示线粒体存在着神经酰胺代谢途径,可能对线粒体的功能,特别对凋亡产生影响.本研究将线粒体神经酰胺酶基因转染到K562细胞,以此了解线粒体神经酰胺酶的细胞生物学效应.以脂质体介导将含有线粒体神经酰胺酶cDNA的pcDNA3.1/His-CDase质粒转染到K562细胞,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达线粒体神经酰胺酶的K562TC细胞株.用MTT法、annexin V/PI法、FCM及Western blot分别检测K562与K562TC细胞在细胞毒药物抗性、血清剥夺耐受性及Bcl-2蛋白表达水平方面的差异.结果表明:虽然K562TC与K562细胞对阿霉素、足叶乙甙及亚砷酸的敏感性没有差异,但是K562TC细胞Bcl-2蛋白水平明显升高,抗血清剥夺能力明显增强.以硫代反义寡核苷酸特异性封闭K562TC细胞线粒体神经酰胺酶,下调Bcl-2蛋白表达水平;二甲基鞘氨醇(鞘氨醇激酶抑制剂,降低细胞内1-磷酸鞘氨醇水平)同样下调K562TC细胞Bc1-2蛋白表达水平,而1-磷酸鞘氨醇明显上调K562细胞Bcl-2表达水平.结论:线粒体神经酰胺酶将线粒体神经酰胺代谢为鞘氨醇,进而在鞘氨醇激酶作用下生成1-磷酸鞘氨醇,此代谢途径上调K562细胞Bcl-2蛋白表达水平.
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腺病毒介导PDCD5基因转移促进依托泊甙诱导的K562细胞凋亡
本研究观察程序性细胞死亡5基因(programmed cell death 5,PDCD5)重组腺病毒转染K562细胞后对化疗药物依托泊甙的增敏作用.利用AdMaxTM腺病毒载体包装系统,通过同源重组方法构建Ad-PDCD5重组腺病毒及对照腺病毒Ad-null及Ad-eGFP;用不同感染复数将Ad-eGFP、Ad-null或Ad-PDCD5转染人白血病细胞系,实时定量PCR检测PDCD5 mRNA的相对表达水平;利用MTY法及Annexin-V-FITC/PI双染色流式细胞术观察依托泊甙对转染后K562细胞增殖与凋亡的影响.结果表明:Ad-eGFP腺病毒对白血病细胞系K562、Jurkat及CEM的转染效率可达60%-86%.Ad-PDCD5重组腺病毒能梯度增加K562细胞PDCD5 mRNA的相对表达水平,腺病毒介导的PDCD5基因转移促进依托泊甙诱导的K562细胞凋亡.结论:PDCD5重组腺病毒可能成为化疗药物的增敏剂.
