首页 > 文献资料
-
已烯雌酚对雌性BALB/c小鼠脾细胞凋亡影响的动态观察
目的 了解新生期注射己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)对雌性BALB/c小鼠生后不同时期脾细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响.方法 新生雌性BALB/c小鼠,在生后24h内颈背部皮下注射 DES 40 μg,每隔24h注射一次,共连续5次.对照组平行注射等量无菌豆油.分别在生后7、14、21、35和49 d将小鼠处死,取其脾进行常规石蜡包埋和切片,进行TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling,)检测以及Bcl-2、Bax的免疫组织化学检测.结果 与对照组相比,DES组雌性BALB/c小鼠脾细胞的TUNEL阳性细胞数目在生后各点均有显著性增加.Bcl-2在各时间点DES组的表达均弱于相应的对照组.Bax在生后7d的对照组和DES组中的表达差异无统计学意义,而在生后14、21、35和49d DES组的阳性表达明显多于对照组.结论 新生期注射 DES 可以导致雌性BALB/c小鼠脾细胞凋亡明显增加.细胞凋亡在对照组和DES组不同时间点的动态变化以及在两组间相同时间点的差异可能与Bcl-2表达的减少以及Bax表达的增加有关.
-
低渗肿胀实验、苯胺蓝染色及染色质扩散实验检测精子核蛋白及膜完整性对比研究
目的 通过对低渗肿胀实验(HOST)、苯胺蓝(AB)染色实验、染色质扩散(SCD)实验、脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)实验、AB/HOST实验,SCD/HOST实验、HOST/TUNEL实验的检测结果中精子活性分级进行比较,探索优化精子活性的检验方法. 方法 选取2012年5月-2016年10月已育成年健康男性志愿者30例.每例样本分为7组,分别为:HOST组、AB组、SCD组、TUNEL组、HOST/AB组和HOST/SCD组、HOST/TUNEL组.分别进行相应方法的染色,观察精子尾部肿胀及核蛋白、DNA受损情况,计算各级活力精子的比例. 结果 单独AB和单独HOST与HOST/AB比较,精子分级差异有统计学意义;单独SCD和单独HOST与HOST/SCD比较,精子分级差异有统计学意义;单独TUNEL和单独HOST与HOST/TUNEL比较,精子分级差异有统计学意义. 结论 HOST/AB联合染色及HOST/SCD联合染色是对精子的核蛋白、DNA及膜完整性判断更为准确和实用的方法.
-
榆耳酸溶性多糖对肝癌H22小鼠的抑瘤作用研究
目的:研究榆耳酸溶性多糖对小鼠H22移植瘤的生长抑制作用及其机理.方法:以抑瘤率、肝指数、胸和脾脏指数、白细胞介素-2、γ-干扰素、肿瘤坏死因子-α等指标来考察榆耳酸溶性多糖对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制作用,以H&E染色法观察肿瘤组织的病理改变,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:榆耳酸溶性多糖3个剂量组能显著抑制肿瘤的增殖,提高荷瘤小鼠脾脏、胸腺指数以及血清细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α;肿瘤组织H&E染色和TUNEL实验表明,榆耳酸溶性多糖可以通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抑制肿瘤生长作用.结论:榆耳酸溶性多糖具有显著的抗肿瘤作用,其作用机制可能与免疫调节、促细胞凋亡、保护肝脏功能有关.
-
参附强心丸对心肾综合征大鼠心肾Bcl-2/Bax抗凋亡作用机制研究
目的:基于大鼠心肾综合征(cardiorenal syndrome,CRS)模型,探讨参附强心丸对CRS大鼠心肾部位Bcl-2/Bax蛋白表达及抗凋亡的作用机制.方法:采用腹主动脉缩窄合并肾脏急性缺血再灌注致大鼠心肾综合征模型,大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、参附强心丸高、中、低剂量组、卡托普利对照组6组,给药4周后测定血液中脑钠肽、醛固酮、肌酐等,计算左肾、心室脏器指数,TUNEL法测定心、肾凋亡,免疫组化测定心、肾Bax、Bcl-2蛋白表达.结果:模型组大鼠血浆脑钠肽、醛固酮、肌酐、心室指数明显高于假手术组,肾素活性、左肾指数明显降低,组织凋亡明显.参附强心丸中剂量组脑钠肽、肌酐降低明显;高剂量组醛固酮明显降低,可明显改善心肌肥厚及左肾坏死萎缩状态,上调大鼠心肾组织Bcl-2表达,抑制Bax表达,降低心、肾细胞凋亡率.结论:参附强心丸高、中剂量组可以改善CRS大鼠肾功能、水钠潴留状态,通过上调Bcl-2表达,抑制Bax表达,降低心肾组织凋亡,起到对心肾的保护作用.
-
灯盏花素抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡
目的:现察灯盏花素( breviscapine,bre)对大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法:采用结扎大鼠左冠状动脉前降支方法制备心肌缺血再灌注模型.40只SD大鼠随机分为正常对照组(control)、缺血再灌注组(ischemiareperfusion,IR)和灯盏花素组.灯盏花素组大鼠于术前1周分别腹腔注射不同别全的灯盏花素(25,50 mg·kg-1·d-1 ),另2组给予等I生理盐水.缺血30min、再灌注2h后,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,western blotting检测Caspase-3蛋白表达的变化.结果:缺血再灌注组凋亡指数和Caspase-3蛋白表达较正常对照组明显升高(P<0.01),灯盏花素组各指标较缺血再灌注组降低(P<0.05,P<0.01).结论:灯盏花素对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制与通过下调Caspase-3基因表达抑制心肌缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡有关.
-
蕨麻乙醇提取物抑制大鼠急性心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡
目的:观察蕨麻乙醇提取物对大鼠结扎冠状动脉所致急性心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡的保护作用,以及对心肌细胞凋亡信号通路中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶9、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-9,Caspase-3)表达的影响.方法:选取雄性SD大鼠96只随机分为手术对照组,模型组,蕨麻乙醇提取物0.9,1.8,3.6g· kg-1干预组,阳性药物恬尔心组(盐酸地尔硫卓,diltiazem,30 mg·kg -).通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血再灌注模型.采用原位末端标记法检测心肌细胞凋亡;RT-PCR检测心肌组织Caspase-3,Caspase-9 mRNA水平;免疫组化染色半定量检测Caspase-3,Caspase-9蛋白水平.结果:TUNEL结果提示心肌缺血再灌注损伤后,心肌细胞出现大量凋亡,模型组凋亡指数为(31.5±3.6)％;各组蕨麻乙醇提取物均明显抑制缺血再灌注损伤所致的心肌细胞凋亡.模型组细胞凋亡导致Caspase-3,Caspase-9 mRNA及蛋白大量表达,而给予蕨麻乙醇提取物后,1.8,3.6 g·kg-1剂量组缺氧损伤心肌Caspase-9mRNA水平显著降低(P＜0.05),0.9 g·kg-1剂量组与模型组相比未见明显差异.各剂量组蕨麻乙醇提取物均可显著降低心肌组织Caspase-3 mRNA水平(P＜0.05).免疫组化分析提示各干预组蕨麻乙醇提取物均可显著抑制Caspase-3,Caspase-9蛋白的表达(P＜0.05).结论:蕨麻乙醇提取物能够显著抑制急性心肌缺血再灌注所致心肌细胞凋亡,并抑制Caspase-3,Caspase-9 mRNA水平及蛋白水平的表达.
-
瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤组方对小型猪痰瘀互结证冠心病模型心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
传统方药瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤组方在冠心病心肌缺血损伤中对抑制凋亡的研究很少,本实验通过瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤组方对小型猪痰瘀互结证冠心病模型进行干预,观察此组方对该模型心肌细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9表达的影响.采用中国实验小型猪15只,随机分成对照组、模型组和痰瘀同治组.模型组和痰瘀同治组以高脂饲料喂养2周后,用介入法行冠状动脉拉伤,然后开始喂药同时继续予高脂饲料喂养8周.对照组以普通饲料喂养10周,不做冠状动脉拉伤.实验结束后处死动物,取梗死交界处心肌,固定,常规制备石蜡切片,采用TUNEL技术检测心肌凋亡,免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)技术检测心肌组织的Bcl-2,Bax,Caspase-3,Caspase-9水平.结果显示TUNEL法检测的对照组、模型组及痰瘀同治组的凋亡指数(apoptosis index,AI)分别为0.92％,27.68％,17.28％,痰瘀同治组的细胞凋亡指数明显小于模型组的凋亡指数(P＜0.01).痰瘀同治组与模型组比较,Bcl-2蛋白表达显著增强(P＜0.01),Bax蛋白表达显著降低(P＜0.01);痰瘀同治组Caspase-3,Caspase-9表达均显著低于模型组(P＜0.01).以上结果表明瓜蒌薤白半夏汤合血府逐瘀汤组方对小型猪痰瘀互结冠心病模型心肌凋亡细胞有明显的保护作用.
-
SARS男性患者睾丸组织的病理改变
目的 研究严重急性呼吸综合征(SARS)男性患者睾丸组织的病理变化.方法 对5例SARS死亡患者的睾丸组织进行常规组织学、TUNEL及免疫组化染色.结果 5例SARS患者睾丸生精小管基膜增厚、纤维化,生精上皮坏死、脱落,睾丸中几乎未见精子.生精细胞凋亡大量增加(P＜0.05),间质充血,睾丸组织中有明显的白细胞浸润.CD3+T淋巴细胞、CD68+巨噬细胞较对照组明显增多(P＜0.05),并浸润到生精小管中.结论 SARS导致男性患者并发睾丸炎.
关键词： 严重急性呼吸综合征(SARS) TUNEL 睾丸 睾丸炎 -
糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变
目的 探讨糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞死亡的形态学改变. 方法 4～6周龄雌性BALB/C小鼠腹腔注射地塞米松,采用末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测DNA单链或双链的裂解,TUNEL和酸性磷酸酶(ACP)双重染色法进行酸性磷酸酶的检测,观察细胞凋亡后吞噬细胞的活动,透射电子显微镜检测凋亡细胞和吞噬细胞的超微结构.结果 光镜观察地塞米松组,TUNEL阳性细胞较多并且分散在皮质各处,凋亡指数为0.460±0.012;正常对照组TUNEL阳性细胞数目较少,凋亡指数为0.020±0.001,与地塞米松组比较,差异有显著性(P<0.05).TUNEL和酸性磷酸酶双重染色法显示,所有TUNEL阳性胸腺细胞均被ACP阳性细胞吞噬.透射电子显微镜观察发现,大部分凋亡细胞均被吞噬细胞所吞噬,少量未被吞噬的胸腺细胞表现出大范围的染色质浓集,这些少量未被吞噬的胸腺细胞显然是死细胞. 结论 典型的细胞凋亡的特点是DNA裂解,但这不是糖皮质激素诱导胸腺细胞死亡的主要方式,死亡的胸腺细胞均是被ACP阳性细胞所吞噬;糖皮质激素对胸腺细胞的首要影响是可诱导无DNA裂解的细胞固缩.
-
高糖对培养大鼠施万细胞生长、凋亡的影响及其机制探讨
目的 研究高糖对大鼠施万细胞(SCs)生长及凋亡的影响,并探讨其可能机制. 方法将培养的SCs分别用含不同浓度葡萄糖的培养液孵育72h,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞活力,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡,Western blotting检测Bcl-2及Bax的表达. 结果 高浓度葡萄糖(60mmol/L、90mmol/L)组SCs活力降低,细胞凋亡率增加,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降及凋亡蛋白Bax表达升高. 结论 高糖抑制SCs生长,诱导细胞凋亡,可能与Bcl-2表达下降及Bax表达升高有关.
-
磷酸肌酸对大鼠心肺复苏后心肌细胞凋亡的影响
目的 通过观察大鼠心肺复苏(CPR)后心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bax,Bcl-2的表达及外源性磷酸肌酸(CP)干预的影响,研究大鼠CPR后心肌损伤机制及外源性CP的保护作用.方法 将32只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(A组)、常规复苏组(B组)、常规剂量CP组(C组,胸外按压时首次给药CP 0.5g/kg,2 h后再次给药1.0g/kg)、大剂量CP组(D组,胸外按压时首次给药CP 1.0g/kg,2 h后再次给药2.0g/kg).每组动物8只.建立窒息型大鼠心搏骤停(CA)-CPR模型,ROSC后24 h取心肌标本待测.以脱氧核糖核昔酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测ROSC后24h的心肌细胞凋亡指数(AI);以免疫组化法检测ROSC后24h的心肌细胞Bcl-2,Bax蛋白表达.数据比较采用方差分析.结果 与A组比较,CPR后24h B,C,D各组心肌凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均显著升高(均P＜0.01),Bcl-2/Bax值均明显降低(P＜0.01);与B组比较,C组和D组心肌的凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bcl-2/Bax值均明显上升(P＜0.01);与C组比较,D组的凋亡指数及Bax,Bcl-2蛋白表达均明显降低,Bcl-2/Bax值明显上升(P＜0.05).结论 外源性磷酸肌酸可明显抑制窒息型大鼠CPR后心肌细胞凋亡,对心肺复苏后心肌损伤具有保护作用,该作用以大剂量时更明显.
-
促红细胞生成素对大鼠脑出血神经的保护作用
目的 研究促红细胞生成素(EPO)对脑出血神经保护作用的机制.方法 用立体定向技术,将自体小凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型.110只Wistar雄性大鼠,随机分成四组:正常组、假手术组、ICH对照组、rhEPO治疗组.应用免疫组化及原位细胞凋亡检测脑出血灶周组织Bcl-2、Bax表达及凋亡细胞.统计学方法采用LSD-t检验及Pearson相关分析.结果 ICH对照组及rhEPO治疗组术后6 h血肿周围皮质TUNEL,Bcl-2,Bax阳性细胞明显增加,72 h达到高峰,120 h下降,各时间点与假手术组比较,差异具有统计学意义(P<0.01).rhEPO治疗组TUNEL、Bax阳性细胞数明显少于同时点ICH对照组(P<0.01),但Bcl-2阳性细胞数明显增加(P<0.01).Bax蛋白表达及Bax/Bcl-2均与细胞凋亡呈正相关(P<0.01).结论 凋亡机制参与脑出血后继发性损伤过程,EPO通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑出血后神经损伤起保护作用.
-
萝卜硫素对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的神经元保护机制
目的 研究萝卜硫素(SFN)对大鼠局部脑缺血-再灌注损伤的神经保护机制.方法 24只雄性SD大鼠,随机(随机数字法)分为3组,A组:假手术组(n=8),B组:缺血-再灌注模型组(n=8),C组:萝卜硫素干预组(n=8);A组:假手术后腹腔注射等量磷酸盐缓冲液(PBS),B组:缺血-再灌注术后腹腔注射等量PBS,C组:缺血-再灌注术后腹腔注射萝卜硫5 mg/kg.通过四氮唑红(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测定脑梗死体积,苏木精伊红染色法(HE)观察组织学形态改变,TUNEL法检测脑神经元凋亡变化,RT-PCR测定缺血脑组织核转录因子kappa B亚单位p65(NF-κBp65)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达,免疫蛋白印记法(Western-bloting)检测脑组织iNOS、NF-κBp蛋白表达水平.结果 与B组比,C组脑梗死体积降低[(96.34±3.72) vs.(124.65 ±3.85),P＜0.01],且脑神经元凋亡减少,RT-PCR法显示C组脑组织NF-κBpmRNA和iNOS mRNA含量降低[(0.26 ±0.018)vs.(0.43±0.031),P＜0.01].Western-bloting结果显示,C组NF-κB和iNOS含量降低[(0.67 ±0.042) vs.(0.56 ±0.032),P＜0.01].结论 SFN可通过减少脑局灶性缺血-再灌注损伤后缺血脑组织NF-κB和iNOS表达,减少脑梗死体积,抑制神经元细胞凋亡,具有脑神经保护作用.
-
缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌凋亡及bcl-2、bax蛋白的表达的影响
目的探讨自发性高血压大鼠(SHR),左心室肥厚过程中,心肌组织凋亡情况及凋亡调节蛋白bcl-2、bax表达的变化,AT1受体拮抗剂缬沙坦对心肌细胞凋亡的影响.方法实验动物为8周龄分为缬沙坦治疗组和非治疗组(SHR无药组),以Wistar鼠作为正常血压对照组,观察期限为8周.采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)判定心肌细胞凋亡,并行免疫组化、Western印迹等方法检测实验动物心肌组织凋亡调节蛋白bcl-2、bax的表达情况.结果 SHR心肌组织中存在细胞凋亡现象,并有bax高表达.缬沙坦治疗8周后,SHR心肌组织bax蛋白表达显著降低至接近Wistar组.Bcl-2蛋白在SHR治疗组及Wistar组表达较SHR非治疗组有增高趋势(P>0.05).前两组bax/bcl-2比值较后者显著降低(P<0.05).结论心肌细胞凋亡是代偿性心肌肥厚可能机制之一.高血压病早期缬沙坦在降压同时可有效抑制心肌细胞凋亡,具有积极的抗心室重建作用.
-
慢性乙醇中毒所致大鼠肝损伤和肝细胞凋亡
目的:研究肝细胞凋亡在实验性大鼠乙醇性肝病(ALD)发生、发展中的作用.方法:给大鼠饮用220 g/L的乙醇,并结合540 g/L乙醇分次、少量灌胃的方法建立大鼠肝损伤模型;常规HE染色,光镜观察大鼠病理学形态改变,用TUNEL法检测肝细胞凋亡,速率法检测血清ALT,AST水平.结果:灌乙醇5 wk大鼠肝脏出现轻到中度脂肪变性,脂滴为以大泡型为主的混合脂滴,脂变率为40%(8/20);10 wk,85%(17/20)大鼠发生肝脂肪变,45%(9/20)大鼠出现乙醇性肝炎的病理变化.5,10 wk大鼠血清ALT,AST均较同期对照组有显著升高(5 wk:1017±267 vs 550±133,P＜0.05;1350±333 vs 967±150,P＜0.05;10 wk:1500±267 vs 767±250,P＜0.05;2 167±533 vs 850±183,P＜0.05);灌乙醇10 wk血清ALT,AST较5 wk升高(P＜0.05),有统计学意义.5,10wk大鼠TUNEL指数分别为0.33±0.49%、2.03±1.61%,与同期对照组相比,5 wk无显著差异,10 wk有显著性差异(P＜0.05);灌乙醇10 wkTUNEL指数较5 wk高,有显著性差异(P＜0.05).按病理损伤程度,将实验组分成乙醇性肝炎(AH)组和乙醇性脂肪肝(AFL)组,结果显示AH组TUNEL指数也较AFL组高(3.24±1.50%vs1.12±0.63%,P＜0.05),差异显著.结论:过量饮用乙醇可以引起中毒性肝脏疾病,饮用乙醇及持续时间与肝损伤的发生有密切关系.细胞凋亡在乙醇诱发肝损伤时可能起着重要作用.
-
重症急性胰腺炎早期合并心肌损害与心肌细胞凋亡关系的实验研究
目的研究重症急性胰腺炎(SAP)早期心肌损害与心肌细胞凋亡的关系和意义.方法应用5%牛磺胆酸钠逆行胆胰管注射诱发大鼠SAP模型.实验设定对照组(n = 18)和SAP组(n = 18),并分为6、12、24 h三个时点,分别检测血清LDH、CK、CK-MB,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡.结果 SAP组在各时点较对照组血清LDH、CK和CK-MB显著升高(P < 0.01);对照组在各时点未见心肌细胞凋亡或仅出现极少数心肌细胞凋亡,SAP组出现较多的心肌细胞凋亡,其凋亡指数(AI)较对照组显著升高(P < 0.01).结论 SAP早期可诱发心肌损害,与心肌细胞凋亡有关.
-
脊髓损伤后急性期甲基强的松龙干预对脊髓神经细胞凋亡的影响
目的:观察脊髓损伤后即刻甲基强的松龙干预治疗对脊髓神经细胞凋亡的影响,探讨该药物促进脊髓神经功能修复的机制.方法:采用改良Allen's法建立脊髓损伤(SCI)兔动物模型,实验动物随机分为假手术组(S组)36只,单纯损伤组(C组)与MP治疗组(T组)各36只,分别于损伤后8h、24h、72h、7d、14d和28d时随机取6只动物灌注固定取材,HE染色观察损伤区脊髓组织的病理改变,TUNEL法检测各组脊髓标本细胞凋亡情况；分别于损伤后1d、3d、7d、14d及28d观察各组动物运动神经功能情况,包括Rivlin斜板试验和BBB评分.结果:术后C组和T组斜板试验临界角度值和BBB评分值随时间点延长均逐渐升高,损伤7d及之后各时间点,T组均高于C组,但小于S组(P＜0.05).HE染色S组脊髓组织在各时间点未见明显异常；T组及C组损伤后8h、24h及72h时脊髓组织结构紊乱,可见不同程度出血、神经细胞水肿、坏死,灰质中空泡形成,炎症细胞浸润,两组无明显区别:损伤后7d、14d及28d,T组脊髓组织较C组恢复较好,整体损伤程度轻,血肿逐渐吸收,空泡减少,灰质和白质坏死吸收并胶原纤维组织增生,胶质细胞减少,可见较多神经细胞.TUNEL法检测凋亡细胞,S组未发现阳性细胞,C组及T组在损伤后8h可见阳性细胞,24h达到高峰,3d时仍较多,术后7d渐渐减少,14d及28d时阳性细胞数明显降低.两组对比,在损伤后8h、24h、3d及7d四个时间点,T组阳性细胞明显少于C组(P＜0.05),14d及28d时两组比较无统计学意义(P＞0.05).结论:MP在脊髓损伤急性期干预治疗,有利于损伤的脊髓神经功能恢复,可能通过抗细胞凋亡机制产生作用.
-
脊髓爆震伤后神经细胞的形态学变化及凋亡细胞的时空分布特点
目的:研究脊髓爆震伤后神经细胞的形态学变化及凋亡细胞的时空分布特点.方法:90只家兔随机分为正常组(A组,n=6)、Allen's撞击组(B组,n=42)和爆震损伤组(C组,n=42).用改良Allen's法造成B组不完全性急性脊髓损伤模型;而用0.7g单质金属炸药黑索金(cyclotrimethylene trinitramine)在垂直距离动物T9～T10节段4cm处引爆造成C组脊髓爆震伤模型,5h后B、C组动物均用诱发电位仪刺激下肢的MEP以筛选造模成功的动物.B、C两组分别于损伤后8h、1d、3d、7d、14d和30d取材(损伤段脊髓2cm).每组每个时间点取材7只,而A组动物不作任何处理,统一于30d取材.通过HE染色、透射电镜检测、DNA电泳分析和凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL),观察各组脊髓中神经细胞的形态学变化及凋亡细胞的时空分布.结果:HE染色显示,A组为正常组织学表现;B组损伤后8h即出现大片的出血坏死灶,白质呈严重的脱髓鞘样改变,1、3d时前角运动神经元大量减少,7d时白质中空洞形成,而且空洞逐渐融合.到14、30d时,可见部分巨大空洞:而C组爆震后8h仅出现散在的小型出血点,但病变进展迅速,1d时前角运动神经元即明显减少并伴有大量微型空洞形成,3、7d时整个白质结构松散,可见液化坏死灶及广泛的脱髓鞘样改变,而且透射电镜证实这种髓鞘损伤还具有方向性特征,到14、30d时,脊髓可见巨大空洞及散在的小空洞,但面积明显小于B组.B组的前角运动神经元数目在8h时的降低幅度比C组要大(P＜0.05),而到损伤7d后.两组却无明显差异.DNA电泳显示B、C两组损伤后3d均出现明显的DNA梯形条带和Smearing现象,而且这种现象逐渐向邻近节段扩散.TUNEL检测显示,B、C两组于损伤后的灰质和白质中均能检测到阳性细胞,而且分布于灰质内的阳性细胞数均于1d时达到高峰(P＜0.001),但是在白质内的阳性细胞数量,B组于3d时达到高峰(P＜0.001),C组却于7d时才达到高峰(P＜0.001).结论:与脊髓Allen's撞击模型相比,脊髓爆震伤后同样存在神经细胞的凋亡现象,而且有其时间和空间分布特点.
-
实验性自身免疫性脑脊髓炎中枢神经系统浸润细胞凋亡的研究
目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中枢神经系统(CNS)中浸润细胞的凋亡情况.方法用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术动态检测EAE病程不同阶段大鼠CNS中浸润细胞的凋亡变化.结果 TUNEL阳性细胞的数量随病情进展呈单峰曲线,形态学观察支持TUNEL阳性细胞主要为淋巴细胞、巨噬细胞和小胶质细胞.结论细胞凋亡是EAE动物CNS中浸润细胞的重要清除方式.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 中枢神经系统 细胞凋亡 TUNEL -
耳蜗半薄切片细胞凋亡检测
目的尝试在耳蜗半薄切片上用TUNEL方法检测耳蜗组织的细胞凋亡.方法基因敲除Smad5小鼠耳蜗,分别作常规石蜡切片和环氧树脂包埋的半薄切片,用TUNEL方法检测耳蜗组织的细胞凋亡.结果在半薄切片上Smad5基因敲除小鼠,耳蜗内有大量的凋亡细胞产生,主要集中在螺旋神经节细胞、血管纹上的细胞,以及基底膜上的间皮细胞等,而且能够更清楚的显示凋亡的毛细胞.而在石蜡切片上只在螺旋神经节细胞、血管纹上的细胞,以及基底膜上的间皮细胞检出凋亡细胞,但是毛细胞没有凋亡细胞的检出.结论用TUNEL方法检测耳蜗组织的细胞凋亡半薄切片明显好于石蜡切片.
