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hCG 促进绒癌细胞系中HLA-G的表达
目的探讨hCG对绒癌细胞系中HLA-G的调节作用.方法选用表达HLA-G的绒癌细胞系JEG-3,应用hCG(5 IU/ml)连续处理此细胞系12、24、48、72 h,用Real-time RT-PCR方法检测HLA-G的mRNA水平;通过Western 杂交及流式细胞学测定HLA-G的蛋白水平.结果 hCG作用48和72 h后可以显著上调HLA-G的mRNA及蛋白的表达.结论 hCG在HLA-G的表达调节上具有重要的作用,高表达的hCG可能在绒癌中通过上调HLA-G参与免疫逃逸方面具有重要意义.
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天花粉蛋白对绒癌细胞JEG-3体外增殖和HLA-G、HLA-E表达的影响
目的 探讨天花粉蛋白对绒癌细胞JEG-3体外增殖及对HLA-G、HLA-E表达的影响,为临床应用天花粉蛋白抗肿瘤治疗提供理论依据.方法 体外培养高表达HLA-G、HLA-E的绒癌细胞株JEG-3,采用MTT法检测天花粉蛋白对细胞增殖的影响,通过RT-PCR技术和流式细胞分析技术观察其对该细胞中HLA-G、HLA-E mRNA和蛋白水平表达的影响.结果 实验组不同浓度天花粉蛋白对JEG-3细胞均表现出一定程度的抑制作用,呈浓度依赖性.同100 μg/ml组和对照组相比,1 000μg/ml组天花粉蛋白能明显下调JEG-3细胞中HLA-G mRNA和蛋白水平(均P＜0.01).各组之间HLA-E mRNA和蛋白水平有统计学差异(分别为P=0.014,P=0.028).进一步组间比较,1 000μg/ml组HLA-E mRNA和蛋白水平明显低于对照组(分别为P=0.004,P=0.009).结论 天花粉蛋白能显著抑制绒癌JEG-3细胞的增殖,并能下调该细胞系HLA-G、HLA-E mRNA和蛋白水平,提示天花粉蛋白抗肿瘤的另一机制可能是其可以打破机体对肿瘤的免疫耐受,从而遏制肿瘤的生长.
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JEG-3细胞分泌孕激素与HLA-G mRNA表达的相关性研究
目的:探讨JEG-3细胞自身分泌孕激素与其HLA-G mRNA表达的相关性,为进行滋养叶细胞HLA-G分子表达的调控研究提供线索和依据.方法:培养JEG-3细胞,在不同时点(1,2,3,4,6,12,24h)收集细胞和培养上清液,分别采用实时定量PCR方法和EIA方法测定JEG-3细胞的HLA-G mRNA的表达及孕激素的浓度.结果:JEG-3细胞培养上清液中孕激素浓度与JEG-3细胞HLA-G mRNA表达的强度随时间进程具有相似变化趋势,经Spearman等级相关分析,JEG-3细胞自身孕激素的分泌与其HLA-G mRNA的表达量呈显著正相关(r=0.964,P＜0.05).结论:JEG-3细胞孕激素的分泌与其HLA-GmRNA的表达量具有高度相关性,进一步体外研究孕激素对滋养叶细胞HLA-G分子表达的调节作用时,应考虑到JEG-3细胞自身孕激素分泌的影响.
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HLA-G反义寡核苷酸对绒癌细胞免疫逃逸的影响
采用非经典MHC I类免疫耐受分子HLA-G反义基因,封闭和阻断肿瘤细胞上HLA-G分子的释放,逆转肿瘤细胞的免疫抑制作用,为肿瘤生物治疗提供新的理论和实验依据.利用反义核酸技术,合成HLA-G反义寡核苷酸(ASODN),硫代化修饰与脂质体形成复合物,转导入表达HLA-G的绒毛膜癌细胞系JEG-3.采用RT-PCR方法检测HLA-G mRNA表达水平的变化.流式细胞术检测细胞表面HLA-G蛋白表达水平的变化;ASODN处理后,对JEG-3诱导外周血单个核细胞凋亡的影响;MTT法检测ASODN作用后,JEG-3作为第3种抑制细胞对同种异体混合淋巴细胞反应的影响.结果表明,HLA-G ASODN可显著抑制JEG-3细胞HLA-G mRNA和蛋白水平的表达,逆转HLA-G分子诱导的免疫效应细胞的凋亡作用,逆转HLA-G分子对同种异体混合淋巴细胞反应的抑制作用.
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HLA-G反义基因增强免疫效应细胞杀伤活性的研究
目的:研究HLA-G反义寡核苷酸逆转肿瘤细胞免疫逃逸,提高免疫效应细胞识别杀伤活性的作用和机制.方法:采用反义核酸技术合成HLA-G反义寡核苷酸(ASODN),硫代化修饰与脂质体形成复合物,转导入高表达HLA-G的绒毛膜癌细胞系JEG-3.采用RT-PCR方法检测HLA-G mRNA表达水平的变化;流式细胞术检测细胞表面HLA-G蛋白表达水平的变化;MTT法检测:NK杀伤活性、CD3AK杀伤、增殖活性的变化;ELISA方法探讨ASODN调节CD3AK细胞因子IFN-γ产生的变化.结果:HLA-G ASODN可显著抑制HLA-G mRNA和蛋白水平的表达,逆转可溶型HLA-G分子对NK细胞杀伤活性的抑制作用;可部分逆转HLA-G分子对CD3AK细胞产生IFN-γ的抑制作用,并增强CD3AK的增殖活性,增强JEG-3细胞对CD3AK的杀伤敏感性.结论:HLA-G ASODN通过抑制肿瘤细胞HLA-G mRNA和蛋白水平的表达,增强NK,CD3AK的杀伤作用和机制,发挥逆转肿瘤细胞免疫逃逸作用.
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吲哚胺2,3双加氧酶对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及迁移能力的影响
目的 观察吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)对人绒毛膜癌JEG-3细胞体外增殖、迁移能力的影响.方法 通过IDO抑制剂(1-L-MT)及短发夹RNA基因干扰抑制IDO表达,利用MTS增殖实验、Transwell迁移试验检测对细胞增殖和迁移能力的影响.结果 基因敲减能明显降低IDO表达水平.1-L-MT和基因敲减的JEG-3细胞与对照组相比,细胞的增殖和迁移能力明显下降.结论 抑制IDO能够降低绒癌细胞系JEG-3细胞的增殖和迁移能力.
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过表达和抑制miR-133a对JEG-3中HLA-G表达的影响
目的 研究微小miR-133a在人绒癌细胞株(JEG-3)中对人类白细胞抗原G(HLA-G)的表达调控作用.方法 用脂质体包裹化学合成的miR-133a前体分子并转染JEG-3,从而过表达及抑制miR-133a,逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测转染后miR-133a及HLA-G在mRNA水平的表达情况.Western blot法检测转染miR-133a后细胞中HLA-G蛋白水平的表达.结果 JEG-3细胞中抑制miR-133a后HLA-G在mRNA及蛋白水平均表达增加;在JEG-3细胞中过表达miR-133a后HLA-G在mRNA及蛋白水平均表达下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在JEG-3细胞中miR-133a能够负性调控HLA-G的表达,进一步验证了miR-133a与自然流产、子痫前期等疾病的相关性,并为进一步探索相关疾病机制及临床诊治提供了一定的实验基础.
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PPARγ及配体对JEG-3细胞系浸润能力的影响
目的:探讨过氧化物酶增殖物激活受体PPARγ(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ)及其配体对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3浸润能力的影响.方法:通过免疫荧光细胞化学方法检测JEG-3细胞系中PPARγ的表达,采用Transwell侵入系统检测PPARγ的天然激动配体15脱氧-前列腺素J2(15d-PGJ2)对滋养细胞浸润能力的影响.结果:在JEG-3滋养细胞系中有PPARγ蛋白表达,PPARγ激动配体15d-PGJ2处理后浸润穿膜细胞数明显减少,与对照比较差异有统计学意义(P＜0.01),且具有剂量依赖关系.结论:PPARγ被配体15d-PGJ2激活后抑制JEG-3滋养细胞浸润能力,为今后PPARγ配体在滋养细胞浸润异常有关的妊娠并发症治疗中可能的临床应用提供理论和实验基础.
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黄荆子乙酸乙酯提取物对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制
目的:观察黄荆子乙酸乙酯提取物(purified vitexin compound 2,VB2)对人类绒毛膜癌JEG-3细胞体外增殖及凋亡活性,及对凋亡相关基因mTOR/4E-BP1 mRNA表达的影响.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度的VB2对JEG-3细胞的体外增殖活性;Hoechst 33258染色观察细胞形态学变化;流式细胞分析方法定量检测不同浓度药物作用后细胞凋亡率;RT-PCR法检测mTOR/4E-BP1 mRNA水平表达的变化.结果:1)2.5,5.0,10.0,20.0,40.0,80.0,160.0 μmol/L的VB2分别作用JEG-3细胞(24,48,72 h)后,其生长抑制率由(6.34±0.41)％增加至(85.89±0.81)％,且与剂量及作用时间呈明显正相关(P＜0.05).2)0,5.0,10.0,20.0 μmol/L的VB2处理JEG-3细胞48 h后,加药组细胞有明显的凋亡形态特征;其凋亡率由(9.26±1.02)％增至(35.55±1.24)％,并呈明显剂量依赖性(P＜0.05);mTOR及4EBP1 mRNA表达水平随着VB2作用浓度增高逐渐降低,二者呈负相关(P＜0.05).结论:VB2能抑制人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖,诱导其凋亡,此作用可能与VB2抑制JEG-3细胞mTOR和4E-BP1mRNA的表达有关.
关键词： 绒毛膜癌 JEG-3 黄荆子乙酸乙酯提取物 mTOR 4E-BP1 -
HBxAg对胎盘滋养细胞凋亡的影响及其作用机制
目的 探讨乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对胎盘滋养层细胞凋亡水平的影响及可能的作用机制.方法 将已构建好的HBx基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx瞬时转染人绒毛膜癌细胞株JEG-3及HTR-8,分别以转染空载体pcDNA3.1(+)和未转染作为阴性对照组和空白对照组,转染后48 h,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)鉴定HBx-mRNA,间接免疫荧光法和蛋白印迹法(Western blot)鉴定HBxAg的表达;流式细胞仪AnnexinⅤ+PI双染方法检测细胞凋亡状态;间接免疫荧光法、流式细胞仪及Western blot检测PI3K、pAKT的表达.结果JEG-3及HTR-8转染组中均有HBx蛋白表达,而在对照组未被检测到;转染组JEG-3、HTR-8细胞早期凋亡率小于阴性对照组(P<0.05),PI3K和pAKT1的表达水平高于阴性对照组(P<0.05),然而AKT1蛋白表达水平在转染组、阴性对照组和空白对照组间无显著性差别.结论 HBx 基因可以成功地转入 JEG-3 及 HTR-8 细胞,HBx 转染后可抑制滋养细胞凋亡,这可能与 HBx 激活 PI3K/pAKT 信号通路有关.
