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血管内皮生长因子基因治疗促进球囊损伤后内皮细胞再生
血管内皮细胞再生是血管内膜损伤或剥脱后的主要修复方式.本研究在自行成功构建人血管内皮生长因子(hVEGF165)真核表达载体pcDNA3/hVEGF165基础上,将hVEGF165裸质粒DNA直接转染球囊损伤后的血管壁,观察其对内皮细胞再生以及内膜增生的影响,为血管损伤性疾病的防治提供实验依据.
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环氧合酶-2抑制剂NS398对小鼠前列腺癌抑瘤作用的研究
为探讨环氧合酶(COX)-2选择性抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺( NS398)抗前列腺癌的作用,我们建立了前列腺癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,观察NS398在动物体内的抑瘤作用.材料与方法人雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3由青岛大学医学院病理生理教研室惠赠.培养于DMEM培养液中,5% CO,、37℃孵箱中扩增,每2~3天换液传代.NS398(美国Sigma公司),鼠抗人血管内皮生长因子(VEGF,美国SANTA CRUZ公司),CD34鼠单克隆抗体、P-V6000免疫组化试剂盒、DAB显色剂、兔抗鼠二抗、ECL发光剂(北京中杉生物技术有限公司).
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人源化抗血管内皮生长因子单克隆抗体质控方法的建立
目的 建立人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体的质控方法.方法 采用还原/非还原型毛细管凝胶电泳(CE-SDS)测定人源化抗VEGF单抗的纯度;在0.5和25.0 mg·mL-1浓度条件下,采用分子排阻高效液相色谱(SE-HPLC)测定制品中单体和聚合物含量;毛细管等电聚焦电泳(cIEF)测定其等电点;阳离子交换高效色谱(CEX-HPLC)测定电荷异构体含量;反相高效色谱(RP-HPLC)和LC-MS检测Lys-C酶切后制品肽图;人血管内皮细胞(human umbilicalvein endothelial cells,HuVEC)增殖抑制试验测定其生物学活性;其余项目按照2015年版《中国药典》要求进行.结果 人源化抗VEGF单抗原液和成品的还原型CE-SDS的纯度分别(97.77±0.25)%和(97.43±0.57)%,非还原型CE-SDS纯度分别为(98.97±0.15)%和(98.73±0.06)%;0.5 mg·mL-1浓度下,原液和成品的单体含量分别为(98.07±0.55)%和(98.20±0.52)%;25.0 mg·mL-1浓度下,原液和成品的聚合物含量分别为(2.00±0.53)%和(1.93±0.55)%;CEX-HPLC检测原液和成品的酸性区含量分别为(18.33±0.64)%和(18.60±0.44)%,主峰含量分别为(69.03±0.80)%和(69.20±0.44)%,碱性区含量分别为(12.70±1.37)%和(12.20±0.87)%;cIEF和LC-MS测定原液和成品的等电点和肽图均与参比品一致;HUVEC增殖抑制法测定原液和成品的生物学活性分别为参比品的(107±6)%和(100±10)%.其他各项指标均符合《中国药典》要求及其他相关要求.结论 初步建立了人源化抗VEGF单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制.
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阿瓦斯汀联合多西他赛治疗乳腺癌不良反应的观察与护理
阿瓦斯汀是近年来用于治疗肿瘤的新型靶向药,是重组的人源化单克隆抗体,其作用机制可结合人血管内皮生长因子(VEGF)并防止其与内皮细胞表面的受体(Flt-1和KDR)结合[1],切断肿瘤组织的血液供应,从而抑制肿瘤的生长.阿瓦斯汀为无色透明,浅乳白色或灰棕色,pH值为6.2的无菌液体,有100 mg和400 mg 2种规格,对应的体积为4 mL和16 mL(25 mg/mL),不含防腐剂,以一次性小瓶包装,用于静脉输注.
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贝伐珠单抗治疗肿瘤患者的护理
贝伐珠单抗(bevacizumab、安维汀、Avastin)是一种重组的人源化单克隆抗体,可以选择性的与人血管内皮生长因子(VEGF)结合并阻断其生物活性,减少肿瘤的血管形成[1],从而抑制肿瘤的生长.国内应用贝伐珠单抗治疗肿瘤的经验比较缺乏,现将护理体会总结如下.
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普萘洛尔对HUVEC-12细胞VGEF/ERK胞内信号转导影响
目的:通过血管内皮生长因子/细胞外信号调节激酶(VEGF/ERK)的胞内信号转导途径研究普萘洛尔治疗血管瘤的疗效机制.方法:以离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)为模型,观察普萘洛尔对体外培养内皮细胞磷酸化ERK影响.摸索合适的重组人VEGF浓度,建立HUVEC-12细胞VEGF阳性系统,在其基础上采用四甲基偶氮唑蓝法测定普萘洛尔对VEGF阳性系统HUVEC-12细胞的细胞毒作用及蛋白质免疫印迹法测ERK变化.结果:普萘洛尔对体外培养内皮细胞磷酸化ERK影响差异无统计学意义.VEGF在20 μg/L时HUVEC-12细胞磷酸化ERK表达强,以该浓度建立HUVEC-12细胞VEGF阳性系统.与空白对照组相比,普萘洛尔对VEGF阳性系统的HUVEC-12细胞细胞毒作用差异无统计学意义(P>0.05);在普萘洛尔浓度为8~16 mg/L时磷酸化ERK表达受到抑制.结论:普萘洛尔治疗血管瘤的机制可能为通过抑制VEGF诱导的内皮细胞的胞内ERK信号转导,从而促进血管瘤的消退.
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慢病毒介导的血管内皮生长因子干扰对瘢痕成纤维细胞及内皮细胞的影响
增生性瘢痕是创面愈合过程中的病理现象,严重影响患者的容貌、外观,有的甚至引发功能障碍.在临床上,瘢痕进展的过程中皮肤颜色的变化提示瘢痕的形成和成熟与组织中血管的作用有关.抗血管生成可能能够治疗增生性瘢痕.本实验室前期已构建了针对人血管内皮生长因子(VEGF)的干扰慢病毒,本研究拟在体外瘢痕成纤维细胞培养模型上探讨稳定的干扰VEGF对成纤维细胞的影响和内皮细胞的影响.
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血清血管内皮因子浓度检测在恶性肿瘤预后监测中的意义
目的研究人血管内皮因子的浓度与恶性肿瘤之间的关系.方法用自制备的VEGF多克隆抗体对342例肿瘤患者与正常人群血清VEGF浓度进行检测.结果恶性肿瘤血清VEGF水平高于正常人(P<0.01),另外对122例非小细胞肺癌患者血清VEGF水平进行了检测和动态观察,结果显示血清VEGF浓度大于350μg/l的患者两年生存率低于血清浓度小于350μg/l的患者(P<0.01).结论 VEGF是重要的肿瘤血管生成因子,其血清浓度的检测可作为评价肿瘤预后的一项有价值的指标,并为抗肿瘤血管治疗提供一定参考.
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miR-29a靶基因VEGF-A的生物信息学预测及鉴定
目的 预测并鉴定miR-29a的靶基因血管内皮生长因子VEGF-A.方法 采用生物信息学技术,预测miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR结合位点;分别采用RT-qPCR、Western blot技术检测过表达miR-29a后,BGC-823细胞内VEGF-A表达水平的变化;采用双荧光素酶实验,验证miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR的结合位点.结果 生物信息学技术预测显示miR-29a可稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR;miR-29a过表达后可明显抑制BGC-823细胞VEGF-AmRNA及蛋白表达水平;双荧光素酶实验证实,与阴性对照相比,miR-29a拟似物(mimics)可通过稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR抑制荧火虫荧光素酶活性(0.48±0.08 vs 1.00±0.22,P<0.05).结论 miR-29a通过直接结合于靶基因VEGF-A mRNA 3'UTR抑制VEGF-A蛋白表达.
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重组人血管内皮细胞生长因子的表达及活性研究
目的:用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子(VEGF),分离纯化并检测其生物学活性,以研究其在药学领域潜在的药用价值.方法:利用PCR技术扩增VEGF基因片段,克隆到pQE30表达载体中,转化E.coli M15菌株后用IPTG进行诱导表达.经裂解细胞、变性、复性和Ni-NTA agarose金属螯合柱层析等方法纯化得到VEGF.用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成实验检测VEGF的生物活性.结果:重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为20 600的融合蛋白,它以不溶性的包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%左右.经分离纯化融合蛋白SDS-PAGE显示为单一区带.CAM结果表明给药组血管生成数(21.7±3.1、39.3±2.8) 与对照组(15.4±1.9、29.2±4.2)相比有明显增加(P<0.05).结论:利用原核表达系统得到血管内皮生长因子具有天然VEGF生物学活性,为进一步的应用研究奠定了基础.