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MHC-表位肽四聚体技术在病毒性肝炎研究中的应用
可溶性MHC-肽四聚体是根据T细胞活化的双识别原理,用生物工程技术将MHC-Ⅰ类分子重链α与β2微球蛋白在体外组装,并结合抗原表位肽,形成一个能够与相应TCR特异性结合的单体,再将4个单体组装在一起,称为四聚体.四聚体用荧光染料标记,供流式细胞仪检测,就可以用于具有特定TCR的T细胞的研究.在病毒性肝炎的研究中,四聚体技术可以直接检测抗原特异性CTL数量,在感染急性期抗原特异性CTL比恢复期高,肝炎自愈者高于慢性感染,肝内高于外周血,但明显低于其他病毒性疾病.四聚体标记联合其他膜表面分子的标记(或细胞内细胞因子染色),可以评价抗原特异性CTL的功能状态,还可以联合一些特殊的荧光染料,评价抗原特异性CTL的分裂增生能力.
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纳米粒子的生物学性能及光学应用前景
近年来,纳米粒子材料逐渐成为临床肿瘤研究的热点之一。纳米粒子可由多种材料构成(如复合高分子、脂质、蛋白、金属或半导体材料等)。纳米粒子因表面积较大、负载量大而作为肿瘤治疗的药物载体并可提高药物的溶解度,延长药物代谢的半衰期及控制药物的释放,促使肿瘤区域达到高药物浓度和长药物作用时间。多功能纳米载体可因体内环境的变化而控制药物的释放,如PH、温度等。新研究表明纳米粒子材料还可以扩展负载量使其负载影像探针及造影剂用于临床肿瘤的早期精准诊断。例如,可以把有机荧光染料标记的探针整合成为纳米材料示踪肿瘤的种植及转移,靶向肿瘤的脂质纳米微泡及磁性纳米粒子高浓度聚集于肿瘤及肿瘤血管,通过体内外超声及核磁等用于肿瘤的精确影像诊断。纳米材料表面易被修饰,对纳米粒子材料表面生物化修饰后可以把多种治疗药物和影像探针整合在同一个单一的纳米载体平台上实现肿瘤诊断及治疗一体化,为未来肿瘤的诊断及治疗开创新的思路。
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基因芯片技术在肿瘤研究中的应用
基因芯片是将大量靶基因(或基因片段)用点样仪有序地(点与点之间的距离一般小于500μm)点在玻璃、硅等载体上制作而成,包括DNA芯片(DNA微阵列)与cDNA芯片(cDNA微阵列)两种.将待测样品用荧光染料标记制成的探针与芯片杂交,杂交信号用激光扫描仪检测,计算机分析检测结果,可获得类似于传统的点杂交等的分子杂交数据,比较各组间靶基因表达谱的差异,可达到快速、高效、高通量及平行性地分析生物信息的目的.近年来,基因芯片技术已广泛地应用于肿瘤的多项研究中.
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普通墨汁对中、小血管行荧光染色
自发荧光的生物物质或经荧光染料标记的物质可在荧光显微镜下发荧光.但市售普通墨汁对组织结构可行荧光染色,经查未见报告.我们给小鼠、大鼠、幼兔注射普通墨汁,分别取肺、肾、肝、肠系膜,均可见其中、小血管显现很强的黑色荧光,其他组织无荧光.碘化钾对血管荧光有很强的猝灭作用.现报道如下:1 材料与方法1.1 材料 (1)A液即市售普通墨汁原液.(2)B液取墨汁100ml,明胶3g,隔水加温,使明胶溶解于墨汁中即成.(3)C液蒸馏水100ml,明胶3g,加温溶解.1.2 动物实验动物分三组,每组小鼠、大鼠、幼兔各一只.1.3 方法小鼠、大鼠均断颈处死,幼兔耳静脉空气注射处死.迅速开胸,从心脏作全身注射.第一组注入A液,第二组注入B液,第三组注入C液.20min后取材,所有动物分别取肺、肾、肝、肠系膜,10%福尔马林固定24hr.肺、肾、肝行常规石蜡切片, 片厚15μm.肠系膜行铺片.常规二甲苯脱蜡封片.另取A组肾切片分别浸0.01%、 1%碘化钾5sec、5min,烘干后封片.荧光显微镜(激发滤片BG12,阻断滤片 535)及普通光镜观察.2 结果与分析2.1 在普通光镜下,墨汁组和墨汁明胶组的各器官组织中、小血管均清晰可见,但以墨汁明胶组效果略好.而明胶组则看不到血管(肠系膜上较粗血管肉眼可见除外).2.2 荧光显微镜观察,墨汁组各器官中、小血管呈现很强的黑色荧光,墨汁明胶组强度较弱,单纯明胶组根本不可见.2.3 碘化钾对血管荧光有很强猝灭作用,当切片经过不同浓度的碘化钾后其血管均不显荧光,其他组织亦无荧光.2.4 普通墨汁有市售,经济易得,荧光强度大,保持时间长.我们有保存十多年的切片, 其荧光强度几乎未减.利用其行荧光染色,有一定实用价值.