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人巨细胞病毒感染对体外培养成纤维细胞E2F1表达的时序性影响
目的研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染对体外培养成纤维细胞E2F1表达的时序性影响,进一步揭示HCMV的致病机制.方法用高和低感染复数(multiplicity of infection,MOI)HCMV病毒感染体外培养的成纤维细胞,在不同时间点用Western blot法检测细胞E2F1蛋白表达水平.结果低MOI和高MOI感染都可时序性上调宿主细胞E2F1蛋白表达,均以感染后2h上调幅度高(2～3倍).高MOI感染的上调作用强于低MOI感染.结论HCMV在感染初期即可激发宿主细胞E2F1表达明显增加,并在24h内呈时序性上调,提示E2F1在病毒感染早期诱导宿主细胞向S期和G2/M期偏移,进而在营造有利于病毒复制微环境的机制中起关键作用.
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RB在细胞周期中的作用及其与大肠癌的关系
视网膜母细胞瘤易感基因RB自发现以来就是细胞周期以及肿瘤研究的重点,而后发现的RB蛋白家族成员(pRB,p107,p103)在细胞周期和肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用.pRB在细胞周期中与E2F以及其细胞因子可以相互作用,并调控细胞的生长发育和分化等过程.若pRB与细胞因子的相互作用受到破坏,就可能改变细胞周期进展,甚至导致肿瘤的发生.大肠癌中RB的表达与其他肿瘤相比具有特殊性,此特殊性可能与大肠癌特殊的肿瘤成因或者RB的某些特殊功能有关.
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转录因子E2F与胃癌关系的研究进展
转录因子E2F在控制细胞周期的进展中起关键作用,E2F既能作为靶基因的激活剂使细胞由G1期向S期过渡,又能作为靶基因的抑制剂并诱导细胞凋亡.它在胃癌的形成中是起癌基因作用还是起抑癌作用,其机制正处研究之中,本文对其研究进展进行综述.
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转录因子E2F与胃癌关系的研究进展
细胞周期的调控涉及到多种细胞因子的参与,其中转录因子E2F家族的参与是重要的调控环节之一.它通过与pRb及相关蛋白等多种细胞周期依赖性蛋白及激酶的相互作用,调控细胞周期G1向S期的过渡.同时,E2F与肿瘤的发生发展、抑制及细胞凋亡之间有着紧密的联系.近年来,国际上对E2F与胃癌的相关性进行了一些研究,现予简要综述如下.
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宫颈鳞癌中癌基因C-myc与相关蛋白E2F-1P15INK4b的表达及临床意义的研究
目的 探讨宫颈鳞状细胞癌癌变过程中C-myc基因与其相关蛋白E2F-1、P15INK4b的表达以及与宫颈鳞癌临床病理特征的相关性.方法 选取60份宫颈鳞癌、61份宫颈上皮内瘤变(CIN)组织(其中CIN Ⅰ～Ⅱ级31份,CINⅢ级30份)和21份正常宫颈组织.所有病例制成组织芯片,采用原位杂交技术检测各组宫颈病变中C-mycmRNA的表达情况；免疫组织化学法(Elivison二步法)检测各组中E2F-1、P15NK4b蛋白的表达.统计学方法采用x2检验和Spearman等级相关分析.结果 随着宫颈从正常组织到发生CIN Ⅰ～Ⅱ、CINⅢ直至发展为鳞状细胞癌,C-myc mRNA、E2F-1和P15INK4b蛋白的阳性表达率显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).C-mycmRNA在2组间的表达差异均有统计学意义.E2F-1蛋白的阳性表达在CINⅢ与宫颈鳞癌组之间差异有统计学意义.P15INK4b蛋白的阳性表达在CIN Ⅰ～Ⅱ与CINⅢ、CINⅢ与鳞癌组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).C-mycmRNA与E2F-1、P15INK4b的阳性表达均呈正相关(P＜0.01).E2F-1与P15INK4b的阳性表达呈正相关(P＜0.01).结论 C-myc癌基因在子宫颈鳞状细胞癌的发生、发展过程中起重要作用,其高表达预示子宫颈鳞状细胞的不良转化.C-myc癌基因与E2F-1、P15INK4b蛋白共同作用于CINⅢ向浸润性鳞癌的发展过程.
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双黄升白颗粒双向调控细胞周期CyclinD-CDK4/6信号途径的进一步研究
目的:探讨双黄升白颗粒对化疗所致骨髓抑制荷瘤小鼠细胞周期CyclinD-CDK4/6信号途径的双向调控作用及其机制.方法:该研究采用Lewis肺癌荷瘤小鼠,30只小鼠随机分为空白组、模型组和治疗组.除空白组外,腹腔注射环磷酰胺制作骨髓抑制模型.治疗组用40g/( kg?d)双黄升白颗粒治疗6天后,流式细胞仪检测细胞周期情况,并计算增殖指数(proliferation index,PI),以实时荧光定量PCR法(reverse transcription quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测CyclinD-CDK4/6(cyclin D-cyclin dependent kinase 4/6,CyclinD-CDK4/6)上游激活信号CDC25A、上游抑制信号p16INK4a、p15INK4b,以及CyclinD-CDK4/6所激活的下游信号Rb、pRb、E2F的表达,并以western-blot法进行验证.结果:模型组骨髓组织的G0/G1期细胞比例均低于空白组(P＜0.05),PI和CDC25A、Rb、pRb、E2F的表达均高于空白组(P＜0.05).肿瘤组织G0/G1期细胞比例均低于空白组(P＜0.05),PI和CDC25A的表达均高于空白组(P＜0.05).治疗组骨髓G0/G1期细胞比例低于模型组及空白组(P＜0.05),PI及CDC25A、Rb、pRb、E2F的表达均高于模型组及空白组(P＜0.05).肿瘤组织G0/G1期细胞比例高于空白组及模型组(P＜0.05),PI及CDC25A的表达均低于模型组及空白组(P＜0.05).各组骨髓及肿瘤组织中p16INK4a、p15INK4b的表达经比较无统计学差异.各组肿瘤组织中Rb、pRb、E2F的表达经比较无统计学差异.结论:双黄升白颗粒对骨髓抑制Lewis肺癌荷瘤鼠的骨髓及肿瘤细胞周期具有双向调控作用,其机制可能与调控细胞周期CyclinD -CDK4/6上游激活信号CDC25A及其所激活的下游信号Rb、pRb、E2F的表达有关.
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核转录因子E2Fs家族研究进展
核转录因子E2Fs家族(E2F转录因子)是视网膜母细胞瘤相关基因(RB/E2F)通路中调控细胞有丝分裂事件的重要因子,E2F是否进入核内发挥核转录因子作用取决于RB蛋白的磷酸化状态,E2F调控的下游基因分为激活与抑制两种方式,涉及细胞周期调控、生长与凋亡、增殖与分化等重要生命活动.E2F在细胞周期中的功能失调将导致细胞上述机能的改变并有可能与肿瘤发生有关,深入研究无疑将对完整阐述细胞周期调控及肿瘤发生机制乃至寻求新的肿瘤治疗靶点提供帮助.
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转录因子E2F在前列腺增生组织中表达的意义
目的探讨细胞周期转录因子E2F在良性前列腺增生症(BPH)发病过程中作用.方法应用免疫组化方法检测E2F、细胞周期蛋白E(cyclinE)、cyclinD1和PCNA在62例BPH组织和14例正常前列腺(NP)组织中的表达;应用DNA图像定量分析法测定BPH组织中DNA含量和细胞周期不同时相细胞比率.结果E2F表达主要位于前列腺上皮细胞,BPH中阳性率为66.1%,显著高于NP的28.6%(P＜0.01).BPH组织中E2F阳性表达者的G0/G1期细胞比率较阴性表达者呈降低趋势(P=0.051)、而S期细胞比率、DNA含量和PCNA指数显著高于阴性表达者(P＜0.05).BPH组织中E2F表达与cycliE表达之间密切相关.结论E2F异常高表达导致细胞周期紊乱、细胞增殖增加,从而促使BPH的发生发展.
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氯化两面针碱通过甲基化率调控p53和E2F介导肝癌POLD1基因表达的初步研究
探讨氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)通过影响POLD1基因启动子甲基化率及调节转录调控因子p53和E2F的特异性结合对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响.该研究采用CCK8,焦磷酸测序,RT-PCR,Western blot等技术方法论证了NC通过影响POLD1基因启动子甲基化率,间接调控POLD1基因转录活性,从而降低了DNA聚合酶ε的合成效率,抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖.不同剂量的NC(0.5,1.0,2.0 mg/mL)处理肝癌细胞SMMC-7721 48 h后,细胞增殖抑制率逐渐增大,分别为21.1％,35.2％,92.1％,呈明显的剂量依赖性.POLD1基因启动子的甲基化水平整体上升.经方差分析,与对照组相比,1.0,2.0 mg/mL实验组的E2F结合位点甲基化率随浓度增加而增高(F=10.21,P＜0.05),差异有统计学意义,0.5 mg/mL实验组与对照组相比无明显差异(P =0.694).而p53结合位点甲基化率随NC浓度增加呈下降趋势,实验组与对照组有明显差异(F =9.76,P ＜0.05),其中2.0 mg/mL实验组有显著差异(P＜0.01).实验组POLD1 mRNA和蛋白p125随NC浓度增加而下降,采用秩和检验,x2分别为40.19,36.65,P＜0.05,1.0、2.0 mg/mL实验组与对照组相比,差异有统计学意义.结果显示氯化两面针碱可能通过调节SMMC-7721细胞POLD1基因的甲基化水平,影响其启动子转录调控因子的作用,从而抑制了POLD1基因表达,降低DNA聚合酶ε活性,抑制肝癌细胞增殖的作用.
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氯化两面针碱通过Rb/E2F途径抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用机制研究
氯化两面针碱(Nitidine chloride,NC)是从芸香科植物两面针根部提取的一种天然生物碱,具有很好的抗肿瘤活性,在体外能抑制鼻咽癌,肺癌等细胞的增殖.研究表明NC可导致细胞周期G2/M期阻滞,并诱导细胞凋亡.E2F/RB在细胞周期调控中起重要作用,它们与CyclinD1、CDK4、CyclinE、CDK2构成复杂的反馈调控网路,调节细胞从G1期到S期的过渡,推动了细胞周期的转变.另外,研究表明E2F是重要的转录因子,参与了基因的转录调控.研究肝癌细胞SMMC-7721经两面针碱处理后RB/E2F通路的相关分子水平变化,以及氯化两面针碱在RB/E2F途径抑制肝癌细胞增殖,参与细胞凋亡作用的机制.应用CCK8方法测定NC对SMMC-7721细胞存活率的影响；Annexin-Ⅴ和碘化丙碇(propidium i-odide,PI)双染法检测细胞凋亡和坏死情况；RT-PCR检测不同剂量NC对E2F、RB mRNA表达影响；WB检测E2F蛋白含量的变化.结果显示NC可抑制肝癌细胞增殖,降低细胞存活率,促进细胞凋亡,明显降低细胞中E2F、RB mRNA和E2F蛋白的表达,并呈浓度依赖性.NC通过作用于E2F/RB调控通路,抑制了E2F/RB的表达,参与了细胞的增殖抑制和诱导了细胞凋亡.
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蜂毒素对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及其机制探讨
目的 研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制.方法 采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR 法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1 mRNA的表达变化;Western blot法检测Cyclin D1、CDK4、p21及E2F-1蛋白表达.结果 与对照组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降;同时Western blot结果提示蜂毒素(1,2,4 mg·L-1)可以明显降低Cyclin D1、CDK4及E2F-1表达,而上调p21表达.结论 蜂毒素能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与干扰该细胞G0/G1期相关基因的转录相关且抑制Cyclin D1/E2F信号转导.
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细胞外信号调节激酶对细胞周期调控的影响
目的:研究脑缺血后细胞外信号调节激酶(ERK)对细胞周期调控的影响。方法:建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型，随机分为脑缺血组（对照组及干预组）和假手术组。干预组于缺血前30 min尾静脉注入ERK阻滞剂U0126，对照组尾静脉注入相同体积不含U0126的DMSO稀释溶液。应用免疫组织荧光化学法观察细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和细胞周期蛋白E(Cyclin E)阳性细胞表达；免疫印迹(Western blot)检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、Cyclin D1和Cyclin E的蛋白表达；半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察转录因子E2F mRNA的表达。结果:干预组Cyclin D1和Cyclin E阳性表达的细胞数较对照组显著减少(P＜0.05)；缺血对照组pERK1/2蛋白表达明显强于干预组(P＜0.05)，4h时间点表达为明显，12h时间点恢复到基线水平，Cyclin D1和Cyclin E表达6h开始升高，12 h表达为明显，干预组较对照组显著减弱(P＜0.05)；缺血对照组E2FmRNA的表达显著强于干预组和假手术组(P＜0.05)，以7d表达为明显。结论:ERK在大鼠脑缺血中发挥重要作用，抑制脑缺血引起的pERK1/2磷酸化可降低细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin E和E2F的表达，即细胞外信号调节激酶可影响细胞周期的调控。
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E2F decoy对培养的人视网膜色素上皮细胞增生的影响
为探讨转录因子E2F decoy策略对培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的抑制作用,在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下将1 μmol/L E2F decoy或无义decoy转入人RPE细胞中,用MTT法检测其对细胞增生活性的影响,RT-PCR检测细胞中PCNA mRNA表达水平的变化.结果显示:转录因子E2F decoy能抑制RPE细胞的增生,为增生性玻璃体视网膜病变(PVR)提供了新的基因治疗手段.
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细胞外信号调节激酶对大鼠局灶性脑缺血后细胞周期调控的影响
目的 研究脑缺血后细胞外信号调节激酶(ERKs)对细胞周期调控的影响.方法 建立光化学法诱导大鼠局灶性脑缺血模型,分为脑缺血组(对照组及治疗组)和假手术组.治疗组于缺血前30min尾静脉注入U0126溶液,对照组尾静脉注入相同体积不含U0126的DMSO稀释溶液.应用免疫组织荧光化学法观察细胞周期蛋白D1(CyclinD1)和细胞周期蛋白E(CyclinE)阳性细胞表达:免疫印迹(Weaem blot)检测磷酸化ERK1/2(pERK1/2)、CyclinD1和CyclinE的蛋白表达;半定量逆转录-聚合酶链反应(PT-PCR)观察转录因子E2F mRNA的表达.结果 治疗组CyclinD1和CyclinE阳性表达的细胞数较对照组显著减少(P<0.05);缺血对照组pERK1/2蛋白表达显著强于治疗组(P<0.05),4h时间点表达为明显,12h时间点恢复到基线水平,CyclinD1和CyelinE表达6h开始升高,12h表达为明显,治疗组较对照组显著减弱(P<0.05);缺血对照组E2F mRNA的表达显著强于治疗组和假手术组(P<0.05),以7d表达为明显.结论 ERKs在大鼠脑缺血中发挥重要作用,抑制脑缺血引起的ERK1/2磷酸化,可降低细胞周期蛋白CyelinD1、CyclinE和E2F的表达.即ERKs可影响细胞周期的调控.
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细胞周期与抗肿瘤治疗展望
各类cyclins、CDKs、CKIs和chk等因素作为细胞周期的调控机制,对细胞的增殖、分化和凋亡瘤是一类细胞周期性疾病,它们可能会成为抗肿瘤药物的新靶点,达到治疗肿瘤的目的.
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视神经母细胞瘤蛋白与血液系统肿瘤
视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)以其磷酸化和去磷酸化形式决定着转录因子E2F的活性,在细胞周期调控中处于中心环节,从而控制着细胞的生长和分化.并且Rb基因作为第一个被克隆成功的抑癌基因,在包括血液系统肿瘤在内的多种肿瘤中发现有pRb表达的异常.这种异常表达对血液系统恶性肿瘤的发生发展以及决定其对化疗药物的敏感性等方面具有重要意义.
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E2F对细胞周期的影响
细胞增殖是一种有序的、高度调节的过程,包括细胞外生长信号、细胞大小和DNA完整性.体细胞周期可以分为分裂间期和有丝分裂期:分裂间期(包括G1、G2和S阶段),细胞生长并合成DNA;有丝分裂期,一个单细胞分裂成两个子细胞.
