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胃癌相关基因β-catenin、APC、siah-1、cyclin D1的研究
随着分子生物学技术的发展,人们对胃癌发病机制的研究已经深入到分子水平,发现和了解了较多的胃癌相关基因.本文就癌基因、抑癌基因、细胞周期调节因子作一综述,介绍4种基因:癌基因β-catenin、抑癌基因siah-1、结肠息肉病基因APC和细胞周期调节因子cyclin D1的定位、作用机制及与胃癌发生发展的关系.对这四种基因进行检测,对于胃癌早期诊断、预后评估都具有重要意义.
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苯并芘诱导人胚肺成纤维细胞cyclin D1、CDK4和E2F-1/4的表达改变
目的建立苯并芘诱导的具有转化细胞部分特征的人胚肺成纤维细胞(T-HELF)模型,并观察T-HELF细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白表达的改变.方法以200、100、50、25、5、1μmol/L的苯并芘处理人胚肺成纤维细胞(HELF)24小时,用噻唑蓝(MTT)比色法测定苯并芘的细胞毒性.根据MTT结果确定以100和200μmol/L苯并芘给HELF细胞染毒3次,染毒结束后培养6周观察细胞的形态变化,培养12周后观察其形态变化及软琼脂中细胞克隆的生长.用流式细胞仪检测T-HELF细胞周期的变化,用Western blot检测T-HELF细胞中cyclin D1、CDK4和E2F-1/4蛋白表达的改变.结果MTT结果显示苯并芘浓度在25～200μmol/L之间时,细胞存活率为78%～80%.苯并芘200μmol/L组染毒4周后细胞死亡.100μmol/L组染毒结束后培养6周,观察到细胞变大,核增大或多核;12周后,在软琼脂中可以生长为细胞克隆,说明HELF细胞具有了转化细胞的部分特征.T-HELF细胞在无血清培养时,细胞周期没有停滞.用Western blot检测发现和正常HELF细胞相比T-HELF细胞的cyclin D1表达明显增加,CDK4、E2F-1和E2F-4的表达没有明显变化.结论建立了苯并芘诱导的具有转化细胞部分特征的人胚肺成纤维细胞模型,可用于苯并芘致癌的分子机制研究.无血清培养时,T-HELF细胞周期没有停滞,和正常HELF细胞相比T-HELF细胞cyclin D1表达明显增加,cyclin D1可能与T-HELF细胞的快速增殖有关.
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cyclin D1和survivin在大肠癌组织中的表达
目的：研究Survivin和cyclin D1在大肠癌的表达及临床意义。方法应用Real-time PCR和Western blot分别检测大肠癌及癌旁组织中Survivin、cyclin D1 mRNA和蛋白表达情况，并探讨其临床意义。结果癌旁组织与大肠癌组织RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳结果表明，Cyclin D1及survivin mRNA和蛋白质在大肠癌中高表达，而癌旁组织中不表达或低表达，两者比较，差异均有统计学意义（ P<0.05）。Western blot结果表明，Survivin、cyclin D1在结直肠癌组织中均呈高表达（ P<0.05）。结论 Cyclin D1和survivin的表达水平与大肠癌发生发展及恶性程度密切相关，有望成为大肠癌诊断的新靶点。
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复方阿胶浆对小鼠lewis肺癌CyclinD1、CD44表达的影响
目的:观察复方阿胶浆对小鼠lewis肺癌周期素D1、黏附分子CD44表达的影响,深入探索复方阿胶浆的抗肿瘤机制.方法:建模后,按体重随机分为6组,分别为复方阿胶浆组(中剂量)、环磷酰胺组、复方阿胶浆大、中、小剂量联合环磷酰胺及模型对照组.实验一,取材后以SP免疫组化染色法检测各组肿瘤组织中Cyclin D1、CD44的表达水平.实验二,同期观察生存期,连续观察2个月.结果:复方阿胶浆组及复方阿胶浆大剂量联合CTX组能明显下调Cyclin D1的表达水平,与模型对照组比较,有统计学意义(P<0.05);除复方阿胶浆小剂量联合CTX组外,余给药组均能下调CD44的表达,与模型组比较有统计学意义(P<0.05);Cyclin D1与CD44的表达水平无明显线性相关性(r=0.232 21,P>0.05);复方阿胶浆组在一定程度上能够延长小鼠的生存时间.结论:复方阿胶浆的抗肿瘤作用可能与下调肿瘤组织中Cyclin D1、CD44的表达水平,干预细胞周期、抑制肿瘤的侵袭性有密切关系,并有可能改善预后.
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人参皂甙对不同代龄人胚肺成纤维细胞的增殖及Cyclin D1基因表达的影响
目的:探讨人参皂甙对衰老的人胚肺成纤维细胞增殖及Cyclin D1基因表达的调节作用,以进一步研究人参皂甙抗细胞衰老的机制.方法:用体外培养的人胚肺成纤维细胞为细胞衰老模型,通过细胞流式分析、免疫组化及RT-PCR方法,观察了人参皂甙对成纤维细胞的增殖周期、DNA合成,Cyclin D1 mRNA和蛋白质表达情况.结果:衰老的成纤维细胞用人参皂甙连续处理4代后,处于G1期的细胞数明显减少,进入S期的细胞由16.7%增加到33%(P＜0.05);Cyclin D1 mRNA表达比对照组下降,Cyclin D1蛋白质表达由原来的77.1±2.9明显下降为52±6.3(P＜0.001),DNA合成增加17%(P＜0.05).人参皂甙对低代龄细胞的Cyclin D1 RNA合成有所增加,对Cyclin D1蛋白质、DNA的作用影响不大.结论:人参皂甙对人胚肺成纤维细胞具有双向作用,对高代龄细胞具有促进细胞增殖,调节Cyclin D1基因表达的作用.
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土槿乙酸诱导前列腺癌DU-145细胞周期阻滞的机制研究
目的:探讨土槿乙酸(pseudolaric acid B,PLAB)对人前列腺癌细胞株DU-145细胞增殖和细胞周期的影响.方法:MTT法检测PLAB对细胞生长抑制作用；Hoechst 33342荧光染色分析细胞死亡特征；流式细胞术检测细胞周期；Real-time PCR和Western blot检测周期相关基因cyclin B1,CDK1和cyclin D1的表达变化.结果:PLAB明显抑制DU-145细胞生长,且抑制作用呈浓度-作用时间依赖性(P＜0.05),其24,48,72 h的IC50分别为4.53,2.39,2.08 μmol·L-1.5μmol·L-1PLAB处理细胞24 h,细胞出现核染色质凝集、凋亡小体等典型凋亡特征,随着PLAB浓度升高,G2/M期细胞比例明显增大并表现出时间依赖性(P＜0.05),同时伴有cyclin B1和CDK1呈高表达状态(P＜0.05),cyclin D1呈低表达状态(P＜0.05).结论:PLAB可抑制DU-145细胞生长,引起细胞G2/M期阻滞,伴随cyclin B1和CDK1呈高表达状态,可能与其调控周期相关蛋白降解有关.
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黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制
目的:研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASⅣ)对H2O2诱导肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)氧化应激损伤的保护作用,并进一步探讨其分子机制.方法:将培养的肾小球系膜细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、AS Ⅳ(12.5,100 nmol·L-1)组、阳性药(Tempol,1×105nmol·L-1)组.采用MTT法观察细胞活力；Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;DHE染色检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生；流式细胞术检测细胞周期变化情况；Western blot方法测定细胞周期蛋白Cyclin D1,Cyclin A及磷酸化p38,T-p38的表达.结果:1×105,2×105,3×105,4×105nmol·L-1H2O2均能诱导肾小球系膜细胞发牛氧化应激损伤:细胞存活率明显降低,细胞活力与H2O2浓度及其作用的时间呈正相关下降趋势.100 nmol·L-1黄芪甲苷能够显著减轻H2O2(3×l05nmol·L-1)诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤:提高细胞存活率及细胞活力,抑制细胞凋亡,降低胞内ROS产量；恢复细胞周期蛋白Cyclin D1表达及各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖；降低磷酸化p38的表达.结论:黄芪甲苷对H2O2诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤有一定的保护作用.其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路,影响细胞周期蛋白Cyclin D1的表达及降低H2O2诱导的细胞内ROS氧化应激损伤有关.
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藏药诃子提取物HZ4对脑梗死模型的神经保护作用及分子机制研究
为研究藏药诃子提取物HZ4对局灶性脑梗死大鼠模型的作用和分子网络机制.将雄性SD大鼠90只随机分为6组:假手术组,模型组,诃子提取物HZ4高、中、低剂量(80,40,20 mg·kg-1·d-1,ig)组和阳性对照组(三七总皂苷,30 mg·kg-1·d-1,ig).采用光化学法制备局灶性脑缺血模型,连续给药7d,对各组大鼠进行Beam balance,Foot-fault神经行为学评价,采用HE染色法研究脑梗死灶半暗带细胞形态学病变,利用TTC染色法研究脑梗死体积,利用RT-PCR技术检测病灶半暗带组织Wnt信号通路中关键节点基因β-catenin和cyclin D1的表达.结果发现,给药组与模型组相比,大鼠的行为学指标明显改善,脑梗死体积减小,脑梗半暗带病理指标有所改善.与模型组相比,给药组Wnt信号通路中关键节点基因β-catenin和cyclin D1表达明显上调(P＜0.01).该研究首次在整体水平证明了诃子HZ4具有减少脑梗死体积、提高运动能力评分、促进模型动物康复的作用,同时证明β-catenin和cyclin D1基因比模型组大鼠明显上调,其分子机制可能与Wnt信号通路有关,研究具有一定的创新性.
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结直肠癌Stat3表达与细胞增殖、凋亡及预后的关系
目的 探讨结直肠癌Stat3蛋白表达与细胞增殖、凋亡、临床病理特征及预后的关系.方法 应用免疫组织化学及DNA末端标记(TUNEL)技术分别检测129例结直肠癌及癌旁组织芯片中Stat3、Cyclin D1蛋白表达及凋亡指数(AI),分析Stat3表达与临床病理特征和预后的关系及其与增殖、凋亡之间的相关性.结果 结直肠癌组织中Stat3、Cyclin D1阳性表达率分别为67.4％和79.8％,均高于癌旁组织的43.4％和5.4％(P＜0.05),结直肠癌组织AI(5.62)低于癌旁(7.86)(P＜0.05).Stat3的表达与结直肠癌的Dukes分期、淋巴结转移、肿瘤发生部位明显相关(P＜0.05).结直肠癌组织中Stat3和Cyclin D1的表达呈正相关(P＜0.05).Kaplan-Meier生存分析显示Stat3、Dukes分期、淋巴结转移及凋亡指数与生存期相关(P＜0.05);Cox回归分析显示Dukes分期为独立的风险预后因子.结论 Stat3可能参与了结直肠癌的发生发展,检测Stat3可作为评估结直肠癌患者预后及淋巴结转移的指标.
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姜黄素通过下调IκBα磷酸化抑制食管鳞癌细胞的体外增殖
目的 探讨姜黄素是否能够通过下调IκBα的磷酸化而抑制食管鳞癌细胞的增殖并对其细胞周期产生影响.方法 MTT法检测姜黄素作用下食管鳞癌细胞的增殖;Western blot法检测EC9706和Eca109细胞在姜黄素作用下pIκBα和细胞周期蛋白cyclin D1的表达情况.两种细胞中加入姜黄素培养72 h,或联合5-FU培养72 h,流式细胞仪检测细胞周期.结果 EC9706和Eca109细胞的存活率均随着姜黄素浓度的增加逐渐下降;姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中pIκBα和cyclin D1蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降,且G0/G1期的细胞开始增加,S期的细胞逐渐减少;当姜黄素联合使用5-Fu时,G0/G1期的细胞明显增加,S期的细胞明显减少.结论 姜黄素通过下调IκBα及cyclin D1的表达而抑制食管鳞癌细胞的增殖,或许有望成为食管癌治疗中的一个辅助用药.
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重组人内抑素对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织p21、cyclin D1及CDK4表达的影响
目的 观察重组人内抑素(rhEndostatin)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织p21,细胞周期素D1(cyclin D1)及细胞周期素依赖性激酶4(CDK4)基因表达的影响,探讨rhEndostatin抑制AA大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的分子机制. 方法 雄性SD大鼠36只,随机分为正常组(n=12)、AA模型组(n=12)和rhEndostatin(2.5mg/kg)治疗组(n=12).制备AA大鼠模型,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法,定量分析rhEndostatin对AA大鼠滑膜组织p21、cyclin D1、CDK4 mRNA及cyclin D1蛋白表达的影响. 结果 rhEndostatin治疗组大鼠滑膜组织p21、cyclin D1 mRNA和cyclin D1蛋白表达水平降低,CDK4 mRNA表达水平增加,与AA模型组比较,差异均有统计学意义(P< 0.01). 结论 rhEndostatin降低AA大鼠滑膜组织 cyclin D1表达水平可能是其抑制AA FLS增殖的分子机制之一.
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p16和cyclin D1蛋白在鼻咽癌组织中的表达及其意义
目的探讨鼻咽癌组织中p16和cyclin D1蛋白的表达及其意义.方法应用免疫组化S-P法检测p16和cyclin D1蛋白在85例鼻咽癌和18例鼻咽部炎性黏膜组织中的表达.结果85例鼻咽癌中p16的表达率为41.2%(35/85);cyclin D1的过表达率为63.5%(54/85).18例鼻咽部炎性黏膜中,p16的表达率为100%;cyclin D1的表达全部为阴性.高分化鳞癌p16的表达率为75.0%(6/8),低分化鳞癌为38.2%(26/68),两者差异显著(P＜0.05).有淋巴结转移的p16表达率为28.6%(14/49),无淋巴结转移的为58.3%(21/36),两者差异非常显著(P＜0.01).35例p16(+)的癌组织中有28例cyclin D1呈过表达;50例p16(-)的癌组织中有26例cyclin D1呈过表达.结论 p16的缺失表达和cyclin D1的过表达两者可能单独或共同参与了鼻咽癌的发生发展过程.p16的缺失可能还与鼻咽癌细胞的分化、转移有关.
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套细胞淋巴瘤中P53基因的研究进展
套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)是2001年WHO淋巴造血组织肿瘤新分类中的一种独立的B细胞非霍奇金淋巴瘤,几乎所有的MCL都有t(11;14)(q13;q32)易位,此易位使11q13上的BCL-1癌基因(cyclin D1)与14q32上的IgH基因重排,导致cyclin D1过度表达,促进细胞由G1期进入S期而使G1期缩短.MCL临床病程和转归呈异质性,许多临床和实验室特征可影响其预后,其中P53基因的异常与MCL的病程及转归密切相关.本文就P53基因的缺失、突变与MCL的关系,P53异常患者的治疗作一综述.
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shRNA干扰mPGES-1基因对K562细胞在裸鼠体内成瘤的影响
目的:探讨抑制前列腺素E2合酶1(mPGES-1)表达对人急性白血病K562细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制.方法:通过shRNA干扰技术下调K562细胞中mPGES-1表达,实验设立了如下研究小组:①干扰组(KD),②阴性细胞(NC)非特异序列shRNA干扰组;③未处理组(CON组);应用Western blot法检测β-catenin 和cyclin D1在3组细胞中的表达;构建K562细胞人-裸鼠移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况;应用HE染色观察各组肿瘤组织的结构;应用免疫组织化学法检测β-catenin和cyclin D1的表达水平.结果:与CON组和NC组比较,细胞体外实验结果显示KD组β-catenin和cyclin D1表达量减少(P＜0.05);动物体内实验结果显示,KD组瘤体生长明显减慢,移植瘤体积明显缩小,重量明显减轻(P＜0.01);HE染色显示,KD组细胞排列相对松散,间质较多,肿瘤细胞核小,细胞质较少;免疫组织化学检测显示,KD组β-catenin和cyclin D1表达量明显下降(P＜0.05).结论:下调mPGES-1表达能显著抑制人急性白血病K562细胞在裸鼠体内成瘤,其机制可能与抑制β-catenin和cyclinD1表达相关.
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Cyclin D1及Survivin蛋白表达与鼻咽癌放疗敏感性的关系
目的 研究Cyclin D1和Survivin蛋白表达与鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)放疗敏感性的关系.方法 选取72例NPC患者放疗前活检组织标本(其中放疗敏感组49例,放疗不敏感组23例),常规HE染色确定组织分型；免疫组化技术S-P法检测Cyclin D1和Survivin蛋白表达情况;应用统计学软件进行统计学分析.结果 72例NPC患者标本中,30例Cydin D1蛋白高表达,阳性表达率为41.7％.在NPC放疗敏感组和放疗不敏感组的高表达率分别为28.6％(14/49)和69.6％( 16/23),两组比较差异有统计学意义(P＜ 0.05);72例NPC患者标本中,34例Survivin蛋白高表达,阳性率为47.2％,在放疗敏感组和放疗不敏感组高表达率分别为34.7％( 17/49)和73.9％( 17/23),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).Cyclin D1和Survivin蛋白的表达在NPC患者中呈正相关性,r=0.353 (P＜0.05).结论 Cyclin D1和Survivin蛋白的表达与NPC放射敏感性呈负相关.Cyclin D1和Survivin可以作为预测NPC患者放疗敏感性的分子标志物.
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涎腺腺样囊性癌组织中细胞周期相关蛋白cyclin D1与Ki-67的表达
目的:探讨涎腺腺样囊性癌组织中cyclin D1、Ki-67的表达及其与涎腺腺样囊性癌的发生发展及临床生物学行为特点的关系.方法:采用免疫组织化学方法榆测41例涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)、15例涎腺混合瘤(pleomorphic adenoma,PA)及12例正常涎腺组织(normal salivary gland,NSG)中cyclin D1、Ki-67蛋白的阳性表达率和标记指数(labeling index,LI).结果:三组中的cyclin D1阳性表达率分别为0%、53.3%、68.3%,PA组与NSG组、SACC组与NSG组组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);三组的cyclin D1 L1分别为2.35、16.57、44.63,三组总体及组间比较均有统计学意义(P＜0.05);Ki-67在NSG组、PA组、SACC组的阳性表达率分别为0.0%、0.0%和58.5%,SACC组与NSG组、SACC组与PA组组间差异有统计学意义(P＜0.05).三组的Ki-67 LI分别为0.00、3.44、20.22,在三组总体及组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);腺-管型和实性型SACC中Ki-67的阳性表达率分别为46.7%、90.9%,Ki-67 LI分别为4.64、51.85,组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05);cyclin D1与Ki-67在SACC中的表达存在正相关关系(rs=0.703,P＜0.05).结论:cyclin D1的高表达促进了细胞的异常增殖,在SACC的发生发展中发挥作用,检测Ki-67表达水平可用以辅助诊断腺样囊性癌的分型.
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Cyclin D1表达与周围型非小细胞肺癌CT征象及其预后的关系
目的探讨Cyclin D1表达与周围型非小细胞肺癌CT征象及其预后的关系.方法利用免疫组化方法及螺旋CT扫描,回顾性分析66例经病理证实的周围型非小细胞肺癌Cyclin D1表达与CT征象及预后的关系.结果深分叶、毛刺征、淋巴结转移与Cyclin D1过度表达有关;肿瘤大小、空洞、胸膜凹陷、分化程度、分期及组织类型与Cyclin D1表达无关;Cyclin D1为负性预后因子,其过度表达提示预后不良.结论 Cyclin D1表达在肺癌的发生、发展及CT征象中可能起重要作用,检测该基因并结合CT征象可作为临床诊断及预后评估的指标.
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上调及下调MicroRNA-195对人脑胶质瘤影响的初步研究
目的：观察上调及下调microRNA-195（miR-195）对裸鼠皮下荷SHG-44人脑胶质瘤生长的影响并探讨其机制。方法使用脂质体瞬时转染法将miR-195 mimics和inhibitor分别转入人脑胶质瘤细胞系SHG-44，同时设立空白对照组和阴性对照组；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测转染前后miR-195的含量变化；流式细胞法检测各组细胞周期分布；裸鼠成瘤实验观察miR-195对体内胶质瘤增殖的影响；肿瘤组织HE染色观察病理学改变；Western blot、免疫组织化学染色检测肿瘤组织周期相关蛋白P21、Cyclin D1的表达变化。结果 qRT-PCR测得转染mimics后miR-195的表达水平提高19倍左右，而转染inhibitor后miR-195的表达水平降低为空白对照组的42%；与空白对照和阴性对照组相比，miR-195mimics组细胞阻滞于G0/G1期（P＜0.05）；而miR-195 inhibitor组则相反（P＜0.05）；裸鼠成瘤实验显示，miR-195 mimics组与空白对照组和阴性对照组相比，肿瘤生长速度减慢，体积减小（P＜0.05），而miR-195 inhibitor组则结果相反（P＜0.05）；HE染色结果显示miR-195 mimics组肿瘤组织异型性下降，新生血管数减少，而miR-195 inhibitor组则相反；Western blot检测示与空白对照组和阴性对照组比较，miR-195 mimics组P21表达上调，而Cyclin D1表达下调，miR-195 inhibitor组结果相反（P均＜0.05）；免疫组化染色检测显示，与空白对照组和阴性对照组比较，miR-195 mimics组中P21表达阳性率较高，而Cyclin D1的表达阳性率较低（P均＜0.05），miR-195 inhibitor组情况则相反（P均＜0.05）。结论 MiR-195可使P21表达升高，下调Cyclin D1的表达，阻滞G0/G1期向S期转换，从而抑制人脑胶质瘤细胞SHG-44的增殖能力。
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E-cadherin,β-catenin,Cyclin D1在胃腺癌中的表达及临床意义
目的:研究E-cadherin,β-catenin,Cyclin D1在胃腺癌组织中的表达,探讨三者的表达及临床病理意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测73例胃腺癌组织及18例正常胃黏膜组织中E-cadherin,β-catenin,Cyclin D1蛋白的表达.结果:正常胃黏膜组织中E-cadherin和β-catenin均呈清晰的棕褐色染色在上皮细胞细胞膜.E-cadherin和β-catenin在胃癌细胞中出现细胞质和/或细胞核异常染色,其异常表达率分别为63.01%(46/73)和56.16%(41/73),且两者的异常表达与胃腺癌的分化程度、TNM分期、浸润深度及淋巴结转移相关,与患者的性别、年龄、肿瘤大小无关.胃腺癌中E-cadherin和β-catenin表达密切相关.Cyclin D1在胃腺癌组织中的阳性表达率为67.12%(49/73),明显高于其在正常胃黏膜组织中的表达(0%,0/18),且与胃腺癌的分化程度和淋巴结转移相关.E-cadherin和β-catenin在胃癌中的异常表达与Cyclin D1的过表达呈显著的正相关(r=0.249,r=0.376,P＜0.05).结论:胃腺癌中存在E-cadherin和β-catenin基因的失活及蛋白表达下调.E-cadherin和β-catenin的异常表达可能通过促使或激活Cyclin D1的过表达而参与胃癌的发生和发展.
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野生型XPD转染对胆管癌QBC939细胞生物学行为的影响
目的:探讨野生型XPD基因对人胆管癌QBC939细胞的生物学影响.方法:用碱裂解法提取空载质粒pEGFP-N2和重组质粒pEGFP-N2-XPD,提取出的质粒以KPNⅠ、BGIⅡ和SPHⅠ酶切鉴定.实验分4组,重组质粒pEGFP-N2-XPD组、空载质粒pEGFP-N2组、脂质体组,并用具有相同遗传背景和代数的QBC939细胞作为空白对照.用脂质体转染法瞬时转染四组细胞.荧光显微镜下观察转染后绿色荧光蛋白报告基因表达情况.提取各组细胞总RNA,合成cDNA,用聚合酶链反应(PCR)检测4组细胞中XPD、p53、cyclin D1、c-myc表达情况.并用四甲基偶氮唑盐(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及其细胞周期的变化.结果:pEGFP-N2-XPD细胞与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组相比,XPD mRNA表达量明显增加(0.778±0.018 vs 0.561±0.039,0.544±0.035,0.542±0.034,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞中p53 mRNA相对表达量与pEGFP-N2、脂质体组和空白对照组比较具有统计学意义(0.421±0.019 vs 0.256±0.014,0.267±0.015,0.274±0.018,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,cyclin D1 mRNA相对表达量明显降低(0.339±0.041 vs 0.560±0.039,0.558±0.050,0.560±0.041,均P<0.01).pEGFP-N2-XPD细胞与其他组相比,c-myc mRNA相对表达量明显降低(0.355±0.045 vs 0.570±0.075,0.560±0.041,0.537±0.050,均P<0.01).流式细胞仪检测pEGFP-N2-XPD组细胞周期G1期为81.65%,S期为11.83%,其他组G1期分别为65.54%、56.61%、63.26%;S期分别为24.10%、29.52%、27.28%,结果具有统计学意义(P<0.05).MTT检测示pEGFP-N2-XPD细胞生长率为0.249±0.02,与其他组相比,细胞增殖力明显减弱(P<0.01).结论:野生型XPD基因可以抑制胆管癌细胞的生长,XPD基因可抑制c-myc、cyclin D1基因的表达,增加p53基因表达.
