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RNA干扰p38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用
目的 探讨RNA干扰p38基因对人肾癌细胞株786 0增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响.方法 构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组.应用RT-PCR技术检测786-0细胞p38 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达.CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-0细胞p38mRNA及蛋白的表达均降低.与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后3～5 d时的增殖率均降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞对舒尼替尼的敏感性增加,两组对舒尼替尼的IC50值均低于阴性对照组[(3.2±0.3)、(1.4±0.1) μmol/mL vs (5.4±0.2)μmol/mL,P＜0.05].siRNA531组、siRNA659组G1期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G0/G1阻滞.转染24 h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组(76.27±5.08)相比,两组细胞的侵袭能力均下降(P＜0.01).结论 通过转染p38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的p38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础.
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siRNA干扰ski基因的表达对人肝癌HepG2细胞生物学功能的影响
目的:设计并化学合成针对原癌基因ski的siRNA分子片段,转染人肝癌HepG2细胞,观察其对HepG2细胞增殖、细胞周期和凋亡等生物学功能方面的影响.方法:设计并化学合成针对原癌基因ski的3个siRNA分子序列,阳离子脂质体法瞬间转染HepG2细胞,运用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞中ski基因在mRNA水平和蛋白水平的变化.然后利用MTT法和流式细胞术检测转染ski-siRNA的HepG2细胞增殖、细胞周期和凋亡等生物学功能方面指标的变化.结果:3对特异性ski-siRNA均有效地抑制了ski基因的表达,以siRNA-B抑制效果好,可达到70%,而且随着转染时间的延长,ski的表达呈逐步下降趋势.转染ski-siRNA后HepG2细胞的增殖能力明显受到抑制(P<0.05),S期细胞明显减少,是阴性对照组的2倍以上.结论:靶向ski基因的siRNA分子片段可以有效地抑制人肝癌HepG2细胞的生长,使进入S期的细胞明显减少,其作用与下调ski基因的表达有关,ski可能是肝癌治疗的一个潜在靶点.
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siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2(SMS2)基因对药物转运体的影响
目的 研究鞘磷脂合酶2 (sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响.方法 SMS2特异性siRNA转染至Caco 2细胞.采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco 2细胞中P-gp及MRP2功能的影响.结果 应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱.结论 SMS2基因表达下调对Caco 2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响.
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靶向hTERT的特异性siRNA抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖机制研究
目的 筛选有效抑制肝癌细胞hTERT表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并检测其对hTERT蛋白表达、细胞凋亡的影响.方法 设计并合成针对hTERT的6条siRNA双链及一条阴性对照siRNA,以LipofectaminTM2000转染至肝癌SMMC-7721细胞.用磺基罗丹明B法(sulforhodamine B法,SRB法)测定干扰后细胞增殖的变化,RT-PCR测定hTERT mRNA的表达,筛选出有效序列.有效序列转染后,进一步采用Western blot法检测hTERT蛋白水平的变化,Annexin V-FITC/PI双染、流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 以SRB和RT-PCR法筛选出的两条有效siRNA:siRNA-2和siRNA-6,能明显抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,对细胞的抑制率分别为45.3%、38.2%,能高度沉默hTERT mRNA的基因,沉默率分别为80%、75%.二者还能明显下调hTERT蛋白表达(P<0.05),明显增加凋亡,凋亡率分别为20.23%、17.94%.结论 siRNA-2和siRNA-6能特异性沉默肝癌SMMC-7721细胞hTERT基因表达,抑制增殖,降低hTERT蛋白水平,诱导凋亡,为肝癌基因治疗提供了有力的实验依据.
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siRNA干扰与卵巢癌多药耐药的关系
化疗是综合治疗卵巢癌不可缺少的重要手段之一,但是临床上肿瘤所表现出来的耐药,却大大限制了化疗药物的疗效.多药耐药是指肿瘤细胞对多种结构与作用机制或靶位不同的化疗药物的抵抗耐受.目前,各种方法已用于逆转肿瘤的多药耐药,包括钙通道阻滞剂、环孢菌素A及其衍生物、反义核苷酸和合成转录因子,但效果不是很理想.小分子RNA干扰(small-interference RNA,siRNA)是近几年发展起来的较新技术,已广泛用于卵巢癌等肿瘤耐药的研究.
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白芍总苷对肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM耐药性的逆转作用及机制探讨
目的 观察白芍总苷(TPG)对肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM耐药性的逆转作用,并探讨其作用机制.方法 体外培养人肝癌ADM敏感细胞BEL-7402(亲本组)和ADM耐药细胞BEL-7402/ADM(耐药组),将BEL-7402/ADM细胞转染HDAC3基因siRNA干扰质粒(干扰组)及空载质粒(空载组)24 h,用白芍总苷孵育BEL-7402/ADM细胞48 h(用药组).取亲本组、耐药组、用药组细胞,分别以不同浓度ADM作用48 h;MTT法测算增殖抑制率,计算各组ADM的半数抑制浓度(IC50).取亲本组、耐药组、空载组、干扰组及用药组细胞,分别采用RT-qPCR法和Western blot法检测细胞多药耐药基因MDR1和去乙酰化酶(HDAC3) mRNA和蛋白.结果 亲本组、耐药组和用药组细胞ADM的IC50分别为0.139、8.807、4.890 nmoL/L;用药组细胞对ADM耐药的逆转倍数为1.80倍,逆转率为45.23％.MDR1 mRNA及蛋白相对表达量耐药组、空载组＞用药组＞干扰组＞亲本组(P均＜0.05或0.01),HDAC3 mRNA及蛋白相对表达量耐药组、空载组＞干扰组＞亲本组、用药组(P均＜0.05或0.01).结论 白芍总苷通过抑制HDAC3的表达,引起MDR1表达下调,从而逆转BEL-7402/ADM细胞的耐药性.
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DEPTOR蛋白对胶质瘤间叶细胞转化能力影响及机制的探讨
目的 探讨siRNA干扰降低DEPTOR蛋白表达对U87细胞侵袭能力的影响及其机制.方法采用Western blot方法 检测U87细胞中DEPTOR蛋白表达.应用siRNA干扰技术转染U87细胞株,并用Western blot法检测瞬时转染以后DEPTOR蛋白的表达.体外侵袭实验观察转染后侵袭能力的改变.DEPTOR蛋白降低后,用Western blot检测间叶细胞来源的T-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白和调节因子Snail、Twist1、Slug、Zeb1的表达.结果 转染DEPTOR质粒的U87细胞DEPTOR表达降低.DEPTOR表达降低的SiDEPTOR/U87细胞侵袭并穿透Matrigel膜基质的细胞数量为(42±0.789),明显比SCR/U87组(22±1.197)多,差异有统计学意义(P＜0.05);同时Western blot结果显示:T-cadherin降低,N-cadherin、Vimentin蛋白表达量升高,与间质转化相关的转录因子仅Twist1的表达升高,而转录因子Slug、Snail、Zeb1表达无明显改变.结论 应用siRNA干扰技术降低DEPTOR蛋白的表达使U87细胞侵袭转移能力增强,同时T-cadherin降低,N-cadherin、Vimentin蛋白和转录因子Twist1的表达量升高,提示DEPTOR蛋白表达降低可通过调节转录因子Twist1进一步影响U87细胞的侵袭.
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MTT与HOECHST染色法检测膜联蛋白A7基因沉默对Hela细胞的影响
目的 探讨膜联蛋白A7 (ANXA7)低表达对人宫颈癌细胞系Hela细胞增殖和凋亡的影响.方法 (1)体外培养Hela细胞,应用免疫组化和Western blot鉴定细胞膜联蛋白A7的表达,Westernblot鉴定siRNA干扰对膜联蛋白A7表达的抑制效果;(2)MTT实验检测siRNA抑制膜联蛋白A7的表达后对Hela细胞增殖情况的影响;(3)激光共聚焦检测siRNA抑制膜联蛋白A7的表达后对Hela细胞凋亡情况的影响.结果 (1)免疫组化和Western blot结果均显示Hela细胞内有膜联蛋白A7的表达.siRNA干扰效率的检测显示:siRNA干扰组与阴性对照组、空白对照组比较膜联蛋白A7的表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);(2) MTT实验显示:siRNA干扰组与阴性对照组、空白对照组比较细胞增殖速度无显著性差异(P＞0.05);(3)激光共聚焦检测结果显示:与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA干扰组细胞凋亡率显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 膜联蛋白A7的低表达可促进人宫颈癌细胞系HeLa细胞的凋亡.
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siRNA干扰相互作用蛋白1表达抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移
目的：探讨小干扰RNA（siRNA）干扰降低PC4和SFRS1相互作用蛋白1（PSIP1）的表达对人胶质瘤U87细胞侵袭和迁移的影响并初步探讨其机制。方法采用化学合成靶向PSIP1的siRNA，脂质体法转染U87细胞，用Real-time PCR检测RNA干扰效率；Transwell侵袭实验测细胞侵袭能力；划痕实验检测其迁移能力；干扰PSIP1表达后，Western blot检测间质细胞来源的N-cadherin、β-catenin蛋白和转录因子Slug的表达。结果 PSIP1-siRNA转染胶质瘤U87细胞后，PSIP1的mRNA水平及蛋白水平明显下降（P<0.001），U87细胞侵袭和迁移能力下降，与阴性转染组及未转染组相比差异有统计学意义（P<0.001，P<0.001），Western blot显示，间质细胞来源的N-cadherin、β-catenin蛋白表达量降低，同时与上皮间质转化（EMT）相关的转录因子Slug的表达降低。结论在胶质瘤中，抑制PSIP1的表达可抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移，N-cadherin、β-catenin蛋白和转录因子Slug的表达量降低，提示PSIP1可通过调控经典Wnt/β-catenin信号通路来调节Slug的表达，进而调控EMT，从而参与胶质瘤U87细胞的侵袭及迁移。
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基因干扰Sirtuin3后对缺氧预处理的影响
[目的]探讨基因干扰Sirtuin3 (SIRT3)后对缺氧预处理的影响.[方法]使用空白载体pGCSIL-GFP进行预实验,筛选适合的感染复数(MOI).正式实验使用pGCSIL-PUR-SIRT3转染PC12细胞.成功构建空白载体(empty vector)及SIRT3-/-稳定细胞株后,将两种细胞分别分为对照组(control);缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD)；单纯缺氧组(OGD)；MTT测定细胞活性.ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平.Western Blot法测定各组细胞内SIRT3、过氧化物酶体增生激活受体-γ的共刺激因子-1α(PGC-1α),锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的蛋白表达水平.[结果]OGD后SIRT3-/-组(0.430±0.009)与Vector组(0.562±0.140)相比,细胞活性下降更明显(P＜0.05),经预处理后SIRT3-/-组细胞活性增加,且与Vector组间差异无统计学意义(P=0.311＞0.05).OGD后SIRT3-/-组(0.334±0.006)与Vector组(0.453±0.015)相比,ATP下降更明显(P＜0.05).经预处理后SIRT3-/-组ATP水平增加,且与Vector组间差异无统计学意义(P=0.866＞0.05).SIRT3-/-3组细胞间PGC-1α及MnSOD蛋白的表达与Vector组对应的3组比较明显下降(P＜0.05),Hyp+OGD及OGD相对于各自control组均上调(P＜0.05),且预处理组的上调更明显(与OGD组比较,P＜0.05)[结论]干扰SIRT3基因后PGC-1α及MnSOD的表达下降,SIRT3为预处理或缺氧处理上调PGC-1α及MnSOD的其中一条途径,干扰SIRT3后其他的途径仍然在预处理中发挥重要的细胞保护作用.
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RNA干扰FUT6对人肝癌细胞HepG2侵袭迁移的影响
目的 初步探讨α1,3岩藻糖基转移酶-Ⅵ(FUT6)基因在肝癌细胞侵袭和转移中的作用,为肝癌FUT6基因治疗的可行性提供初步依据.方法 靶向FUT6的siRNA转染肝癌细胞株HepG2后,分为3组:空白对照组、阴性对照组和实验组,分别予等体积无RNase水、scrambled-siRNA和iRNA-FUT6,通过Western blot检测FUT6蛋白的表达,Transwell小室方法进行细胞迁移和侵袭实验检测肝癌细胞株HepG2转移和侵袭能力的变化.结果 空白对照组、阴性对照组及实验组FUT6蛋白的表达分别为1.24±0.07、1.09±0.04和0.30±0.06,实验组FUT6蛋白比空白对照组降低75.8％,差异有统计学意义(P＜0.05),阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).与空白对照组比较,实验组HepG2细胞迁移能力降低了73.3％,侵袭能力降低了73.7％.结论 通过siRNA靶向沉默HepG2细胞的FUT6蛋白表达能削弱HepG2细胞在体外的迁移和侵袭能力.
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人肝癌细胞氧化应激模型中热休克蛋白90α对20S蛋白酶体功能的影响
目的 观察人肝癌细胞氧化应激模型中细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达的变化以及Hsp90α表达下调后对20S蛋白酶体功能的影响；明确热休克蛋白90α对20s蛋白酶体功能的影响.方法 以500μM H2O2建立氧化应激HepG2细胞模型；通过ROS探针法观察细胞在不同氧化应激条件下ROS的分布和含量,通过MTT比色法观察氧化应激对细胞存活的影响；以免疫印迹方法检测氧化应激对细胞内Hsp90α及20S蛋白酶体的合成的影响；以pSilencer 2.1-U6 neo载体,用电穿孔法建立稳定的Hsp90α抑制表达细胞株,通过检测糜蛋白酶活性观察氧化应激和降低Hsp90α表达对蛋白酶体活性的影响.结果 氧化应激后细胞内ROS的含量增多,且分布从胞浆向胞核转移；随着作用时间延长,H2O2对HepG2细胞增殖的抑制程度增强；氧化应激导致胞内Hsp90α表达量先增加后降低,20S蛋白酶体表达量明显降低；siRNA干扰组蛋白酶体活性显著下降.结论 氧化应激可影响细胞内Hsp90α和20S蛋白酶体的表达并改变其细胞内分布；氧化应激及降低Hsp90α的表达均可影响蛋白酶体的活性；Hsp90α对蛋白酶体功能维持起保护性的作用.
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腺病毒过表达及 siRNA 干扰人肝癌 HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶 I表达的影响
目的：观察腺病毒（Ad-11β-HSD1）过表达系统及特异性siRNA（siRNA-11β-HSD1）干扰人肝癌HepG2细胞对11β-羟基类固醇脱氢酶I（11β-HSD1）表达的影响。方法应用Ad-11β-HSD1以及siRNA-11β-HSD1转染人肝癌HepG2细胞，用实时荧光定量PCR及Western Blot 检测11β-HSD1表达。结果转染72 h后，对照组及腺病毒过表达组细胞中均可见明显 GFP荧光，且转染48 h后蛋白水平明显升高；siRNA干扰48 h后，mRNA及蛋白水平均明显降低。结论腺病毒转染可有效过表达11β-HSD1，而siRNA干扰可有效抑制11β-HSD1表达。
关键词： HepG2 腺病毒 SiRNA干扰 11β-羟基类固醇脱氢酶I -
siRNA干扰IRX2对骨肉瘤细胞增殖的影响及其机制
目的 探讨易洛魁族同源盒2(iroquois homebox 2,IRX2)基因在骨肉瘤细胞中的表达及其对细胞增殖和细胞周期的影响.方法 体外培养骨肉瘤细胞系,应用RT-PCR和Western blot检测各细胞系中IRX2表达;IRX2-siRNA干扰IRX2的表达后,分别用MTT和流式细胞仪检测MG-63细胞的增殖和周期;Western blot检测JAK3和STAT5活化水平.结果 IRX2在骨肉瘤细胞系中的表达显著高于人成骨细胞系(P＜0.05);沉默IRX2的表达可显著抑制骨肉瘤细胞系MG-63的增殖,促使其S期细胞比例[(23.93±1.92)％]较对照组[(15.84±1.76)％]增加(P＜0.05),而G2/M期细胞比例[(10.44±1.99)％]较对照组[(23.14±3.19)％]降低(P＜0.05).IRX2-siRNA可下调p-JAK3和p-STAT5水平(P＜0.05),而过表达IRX2可上调p-JAK3和p-STAT5水平,并促进MG-63细胞增殖(P＜0.05).在JAK3和STAT5抑制剂的作用下,过表达IRX2对MG-63细胞的促增殖作用显著减弱.结论 IRX2可部分通过JAK3/STAT5信号通路调控骨肉瘤细胞的增殖.
关键词： 骨肉瘤 SiRNA干扰 细胞增殖 细胞周期 易洛魁族同源盒2基因 -
TGF-β1表达对成纤维细胞胶原分泌影响的实验研究
目的 通过siRNA干扰成纤维细胞中TGF-β1(TGF-β1)的表达,探讨其对成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白的影响.方法 将siRNA转染兔成纤维细胞,通过RT-PCR,检测siRNA对兔TGF-β1表达的干扰效果,并选筛选出有干扰效果的siRNA.把筛选出的有佳干扰效率的siRNA,重新转染兔成纤细胞,分别取成纤维细胞培养液行ELISA检测,观察细胞培养液中合成Ⅰ型胶原蛋白变化情况.结果 和对照组相比,siTGF-β1对成纤维细胞有明显的干扰效果;siTGF-β1转染成纤维细胞后,转染组细胞分泌Ⅰ型胶原浓度曲线明显低于空白细胞组,胶原蛋白合成明显降低.结论 siRNA可通过干扰TGF-β1的表达抑制成纤维细胞I型胶原蛋白的分泌,从而抑制瘢痕生成,为临床上尿道瘢痕的基因治疗提供了理论依据.
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RNA干扰抑制FANCD2基因对多药耐药骨髓瘤细胞株药物敏感性的影响
目的:探讨FA/BRCA(fanconi anemia/BRCA)中siRNA干扰对多药耐药骨髓瘤细胞株的影响.方法:体外培养多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞系,通过相应渐增浓度的马法兰药物处理,选择性获得多药耐药的子代肿瘤细胞株RPMI-8226/R细胞.MTT法检测RPMI-8226和RPMI-8226/R细胞马法兰、ADM、VCR、CTX、Ara-C、VP-16及DDP的敏感性.siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达,观察多发性骨髓瘤多药耐药细胞株对烷化剂药物敏感性的变化.结果:成功构建针对FANCD2基因的siRNA,将其转染多药耐药骨髓瘤细胞株,可以抑制细胞中FANCD2基因表达,转染细胞较转染前细胞FANCD2基因表达降低,对烷化剂的敏感性升高.结论:人多发性骨髓瘤多药耐药细胞株RPMI-8226/R其多药耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中FANCD2表达增强有关,可通过抑制FANCD2表达而逆转细胞的耐药性达到增强烷化剂对耐药肿瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.沉默FANCD2表达可以提高多药耐药MM细胞对烷化剂的敏感性,而RNA干扰是一种沉默FANCD2表达的理想方法,因此它可能是一种有潜力的耐药MM辅助治疗新方法.
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化学合成siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中STAT3基因表达的抑制作用
目的:观察小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对卵巢癌SKOV3细胞STAT3表达的抑制作用及其诱导凋亡作用的机制.方法:将STAT3 siRNA经LipofectamineTM2000脂质体介导的方法将其转染到卵巢癌细胞株SKOV3.实验分为以下3组:空白对照组(未经转染的人卵巢癌SKOV3细胞)、阴性对照转染组(阴性干扰STAT3)及特异性转染组(干扰STAT3).用MTT法检测siRNA转染后SKOV3细胞增殖活性；流式细胞仪检测其对细胞凋亡的影响,免疫荧光法检测STAT3蛋白水平的变化,qRT- PCR和Western blot方法分别检测STAT3 mRNA和蛋白表达水平的变化.结果:成功转染STAT3干扰片段,转染率达90％.siRNA干扰STAT3组明显抑制卵巢癌细胞增殖活性,细胞凋亡率33.7％,并且下调STAT3蛋白在SKOV3细胞中的表达.RT - PCR和Western blot结果显示:siRNA STAT3组明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3中STAT3 mRNA和蛋白的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:特异性转染组48h后能有效地抑制SK-OV3细胞内STAT3的表达、抑制细胞增殖,其抑制卵巢癌细胞的机制可能与抑制了STAT3信号通路,促进细胞凋亡有关,为卵巢癌的生物治疗提供了一定的依据.
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siRNA干扰技术逆转MHCC97肝癌细胞多药耐药性
目的: 探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌MHCC97细胞株多药耐药性(multi -drug resistance,MDR)的影响.方法: 设计合成1对靶向针对多药耐药基因(multi-drug resistance 1 MDR1)的siRNA,与脂质体转染复合体转染至MHCC97细胞.采用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)和Western blot分别检测MDR1 mRNA和P-糖蛋白(P-glycopmtein,P-gp)的表达;MTT法检测细胞对化疗药物的敏感性.结果: RT-PCR和Western blot显示转染siRNA后MDR1 mRNA和P-gp的表达水平均下降.MTT法测定siRNA处理后对细胞的杀伤作用,结果显示转染后MDR1-siRNA组细胞增强了对5-FU、Adriamycin、Vincristine药物的敏感性.结论: siRNA可逆转肝癌细胞的MDR,为提高肝癌的化疗效率提供了一种新方法.
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SHBG 基因在人滋养细胞凋亡中的作用
目的：研究性激素结合球蛋白（SHBG）基因在人滋养细胞凋亡中的作用。方法用不同siRNA干扰沉默人滋养细胞 SHBG 基因的表达并分为6组，即正常对照组未经转染（Ⅰ组）、空白对照组仅转染脂质体（Ⅱ组）、阴性对照组转染 Nonspecific siRNA（Ⅲ组）、转染组分别转染 SHBGsiRNA-Ⅰ、SHBGsiRNA-Ⅱ、SHBGsiRNA-Ⅲ（Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组），然后通过 Hoechst 33258染色检测人滋养细胞凋亡情况，Real-time PCR 和 Western blot 测定 SHBG mRNA 及蛋白和凋亡相关抗体 Caspase-3 mRNA 及蛋白的表达水平。结果Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组 SHBG 和 Caspase-3 mRNA 及蛋白表达水平组间比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组 SHBG和 Caspase-3 mRNA 及蛋白表达水平组间比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。与Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组比较，Ⅳ组、Ⅴ组、Ⅵ组 SHBG mR-NA 和蛋白表达量明显下调，Caspase-3 mRNA 及蛋白表达水平升高，滋养层细胞凋亡增加，差异均具有统计学意义（P ＜0．05）。结论采用 siRNA 干扰技术能够降低人滋养细胞中 SHBG 基因表达量，导致人滋养细胞凋亡。
