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siRNA干扰Caco-2细胞鞘磷脂合酶2(SMS2)基因对药物转运体的影响
目的 研究鞘磷脂合酶2 (sphingomyelin synthase 2,SMS2)缺损对人结肠癌细胞(colon cancer cell,Caco-2)中药物转运体P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)的表达与功能的影响.方法 SMS2特异性siRNA转染至Caco 2细胞.采用RT-PCR和real-time PCR检测SMS2特异性siRNA的干扰效率;采用Western blot法检测siRNA转染后P-gp和MRP2蛋白表达的变化;采用胞内蓄积试验,通过HPLC检测P-gp及MRP2专一性底物罗丹明123及普伐他汀的蓄积含量,分析下调SMS2水平对Caco 2细胞中P-gp及MRP2功能的影响.结果 应用siRNA下调SMS2水平后,P-gp和MRP2的蛋白质水平均显著下调;胞内蓄积实验结果显示罗丹明123及普伐他汀的蓄积量明显增加,说明P-gp和MRP2的外排功能减弱.结论 SMS2基因表达下调对Caco 2细胞中P-gp和MRP2的表达以及功能均有显著影响.