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通络保肾复方对5/6肾切除大鼠模型Ⅰ型胶原蛋白和VEGF的影响
目的 研究通络保肾复方对5/6肾切除大鼠肾脏病理、肾组织Ⅰ型胶原蛋白和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 将60只雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组、代文组、保肾康组、中药组5组,每组12只.除正常组外其余4组行5,6肾切除术.模型组大鼠予生理盐水灌胃,保肾康组、代文组、中药组分别给予保肾康、代文、通络保肾复方灌胃,于4周、6周时分别收集各组大鼠的12 h尿液,检测12 h尿蛋白定量.然后各组均于喂养6周时处死.观察大鼠肾脏病理学改变.用免疫组化和原位杂交检测大鼠肾组织Ⅰ型胶原蛋白和VEGF.结果 肾脏病理示:中药组细胞增生明显轻于模型组,毛细血管开放较好,肾小管结构基本正常.代文、保肾康和中药组对降低12 h尿蛋白定量均有作用,但无差异.代文组及中药组的大鼠肾组织中Ⅰ型胶原蛋白表达比模型组明显下降(P<0.01).代文组及中药组的大鼠肾组织中VEGF表达比模型组明显增加(P<0.01).结论 通络保肾复方可减轻大鼠肾组织中炎性细胞浸润和肾组织周有细胞增生,抑制大鼠肾组织Ⅰ型胶原蛋白和增加VEGF的表达,从而延缓肾纤维化进程和肾功能的恶化速度.
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补钙理论创新——胶原多肽与钙结合物
钙缺乏是目前全球普遍存在的并且严重影响人们生活质量的营养素缺乏病之一,我国作为发展中国家,尤其应该加强全民科学补钙的意识.补钙的关键在于减少钙质的流失而不是过于强调钙的吸收,人体内骨骼中的钙是以羟基磷酸钙方式沉积、以骨胶原为黏合剂固定下来的.
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杜仲多糖对肝纤维化模型大鼠Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1,TIMP-1及TGF-β1mRNA表达的影响
目的:探讨杜仲多糖治疗肝纤维化(HF)作用,并探讨其相关的作用机制.方法:将60只健康SD大鼠随机分成2组,正常组(10只)和肝纤维化造模组(50只).造模组采用40％四氯化碳(CCl4)腹腔注射制备HF动物模型,造模成功后将其随机分为5个组,分别为模型组,杜仲多糖高、中、低剂量组及秋水仙碱组每组10只.秋水仙碱组(1.0×10-4g·kg-1),杜仲多糖高、中、低剂量组(0.14,0.07,0.035 g·kg-1)分别连续灌胃给药8周后收集样本,测定法大鼠体质量及计算肝脏系数;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素-6(IL-6),高迁移率族蛋白B1 (high-mobility group box 1,HMGB1),脂多糖(LPS),肝组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)水平;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分析各组大鼠肝组织Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,MMP-1,TIMP-1及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达情况.结果:与正常组比较,CCl4能显著降低实验大鼠体质量(P＜0.01),提高肝脏系数(P＜0.01);杜仲多糖能显著增加HF模型的体质量(P＜0.01),显著降低HF模型肝脏系数(P＜0.01);ELISA检测表明,杜仲多糖能显著降低肝纤维化大鼠血清IL-6,HMGB1及LPS含量(P＜0.01);RT-PCR检测结果显示,杜仲多糖及秋水仙碱能显著降低HF肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,TIMP-1及TGF-β1mRNA含量(P＜0.05),明显提高MMP-1含量(P ＜0.05,P＜0.01),且呈量效关系.结论:杜仲多糖具有显著的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与抑制降低HF肝脏中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白,TIMP-1及TGF-β1 mRNA表达有关.
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芪参健脾方对SHR大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2,MMP-9和Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白表达的影响
目的:观察芪参健脾方对自发性高血压大鼠(SHR)心肌组织内基质金属蛋白酶1,2,9(MMP-1,MMP-2,MMP-9)和Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白(collagen Ⅰ,collagenⅢ)表达的影响,探讨其改善高血压心肌纤维化的可能机制.方法:采用随机对照法将60只24周龄的SHR分为模型组、培哚普利组、培哚普利联合芪参健脾方组、芪参健脾方高、中、低剂量组,以同龄同种系的京都种大鼠(WKY) 10只作为正常组.正常组和模型组给予蒸馏水；培哚普利组用药量为0.4 mg·kg-1,中药治疗组采用标准水煎工艺,浓缩生药量4 g·mL-1,高、中、低剂量组ig给药剂量分别为40,20,10 g·kg-1；培哚普利联合中药组用药为培哚普利0.4 mg·kg-1+芪参健脾方20 g·kg-1.每日ig 1次,连续治疗6周后处死大鼠.免疫组化法检测各组大鼠心肌组织中Ⅰ,Ⅲ型胶原蛋白的表达；采用逆转录-多聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2,MMP-9的mRNA表达,采用Western免疫印迹(Western blot)法测定各组大鼠心肌组织中MMP-1,MMP-2和MMP-9的蛋白表达.结果:与正常组比较,SHR组心肌呈典型心肌纤维化改变；与SHR模型组比较,培哚普利联合中药组、培哚普利组和芪参健脾方高剂量组中collagen Ⅰ和collagenⅢ的表达显著下降(P＜0.01,P＜0.05),中剂量组中collagenⅢ的表达也明显减少(P＜0.05)；与模型组比较,培哚普利组、培哚普利联合中药组和芪参健脾方高剂量组中MMP-1,MMP-2和MMP-9的mRNA和蛋白的表达量都显著增加(P ＜0.01,P＜0.05),芪参健脾方中剂量组MMP-1蛋白的表达量也明显增加(P＜0.05).结论:芪参健脾方可通过调节MMP-1,MMP-2,MMP-9和collagen Ⅰ,collagenⅢ的水平,从而改善SHR大鼠心肌功能,这可能是其抑制SHR大鼠的心肌纤维化的机制之一.
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真武汤对转基因扩张型心肌病小鼠心肌Atp2a2、Col1a1基因及蛋白表达的影响
目的:本研究通过观察真武汤对转基因扩张型心肌病(DCM)小鼠心肌组织Atp2a2、Col1a1基因及蛋白表达变化,探究真武汤防治DCM的分子生物学机制.方法:将cTnTR141W转基因DCM小鼠60只随机分为模型对照组,西药组,真武汤高、中剂量组,C57BL/6J小鼠15只作为空白对照组,疗程4周.采用qRT-PCR法检测各组心肌组织Atp2a2、Col1a1基因表达;Western Blot法检测各组心肌组织Atp2a2、Col1a1蛋白表达.结果:与空白对照组比较,模型对照组Atp2a2 mRNA及蛋白表达显著下降(P＜0.01),Col1a1 mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.01),与模型对照组比较,真武汤各剂量组Atp2a2 mRNA表达均不同程度上调(P＜0.05,P＜0.01),Col1a1 mRNA及蛋白表达不同程度下调(P＜0.05,P＜0.01),真武汤高剂量组上调Atp2a2,下调Col1a1 mRNA及蛋白表达作用佳.结论:真武汤通过上调心肌组织中Atp2a2 mRNA及蛋白表达,下调Col1a1 mRNA及蛋白表达,从而抑制心肌细胞肥大及纤维化过程,起到防治DCM的作用.
关键词： 扩张型心肌病 cTnTR141W 真武汤 心肌钙离子转运ATP酶 Ⅰ型胶原蛋白 -
阿司匹林抑制血小板聚集行为的三维形态学分析
目的:发展一种通过三维形态学参数评价阿司匹林抑制血小板聚集行为的新方法.方法:将采集的12名健康志愿者枸橼酸钠抗凝外周血均分为二份,一份加入200μmol/L乙酰水杨酸(ASA)处理作为实验组,另一份为对照组,分别对两组血小板进行洗涤纯化.将纯化血小板加入Ⅰ型胶原蛋白修饰的反应池中在静态条件下诱导血小板活化聚集,通过形状测量激光显微系统观察分析形成的血小板聚集体三维形态.同时,通过光透射浊度法(LTA)分析血小板功能.结果:本技术可在无标记情况下获取血小板聚集体的形貌、高度及三维形态图像数据,并可量化血小板聚集体的体积参数;ASA处理能明显改变血小板聚集体的三维形态学特征;与对照组相比,实验组血小板聚集体体积显著降低(t=8.97,P＜0.01),而横截面积改变不显著(t=1.94,P＞0.05).受试者工作特征曲线(ROC)分析结果显示,血小板聚集体体积截断值为1 395 μm3时鉴别ASA抑制功效的灵敏度和特异度分别为91.7％和75％,其准确度和灵敏度均优于LTA方法测试的聚集度参数.结论:本研究建立的ASA抑制血小板聚集行为的三维形态学分析方法将为后续研究和临床评价ASA抗血小板聚集效应提供新的分析策略.
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母体缺氧上调胎兔颈动脉生长因子及细胞外基质表达
目的 研究母体缺氧对新西兰胎兔颈动脉生长因子、细胞外基质表达及血管形态学的影响.方法 同期怀孕的新西兰母兔[足月(30±1)d]随机分为对照组(21％O2,n=5)、缺氧组(12％O2,n=5),缺氧组于妊娠第10天开始采用缺氧箱进行缺氧暴露,每天2次,上、下午各4h,至妊娠第29天结束.妊娠第29天,母兔麻醉,剖宫取出胎兔,分离胎兔颈动脉,液氮中速冻后转移至-70℃保存备检,另保存胎兔颈动脉用于免疫组织化学检查和Masson染色.用免疫印迹检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3和结缔组织生长因子(CTGF)蛋白表达;实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测HIF-1α、TGF-β1和CTGF mRNA表达水平;免疫组织化学技术检测颈动脉TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原蛋白(Coll Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollⅢ)表达;Masson染色检测颈动脉胶原纤维含量及内中膜厚度.结果 与对照组比较,母体缺氧组胎兔颈动脉HIF-1α(0.26±0.05比0.07±0.04)、TGF-β1 (0.68±0.08比0.51±0.11)、Smad3(0.47±0.04比0.26±0.02)和CTGF(0.81±0.09比0.53±0.12)蛋白表达增多,HIF-1α(1.62±0.37比1.00±0.18)、TGF-β1(1.90±0.35比1.00±0.12)和CTGF(1.82±0.42比1.00±0.21)mRNA水平升高,及Coll Ⅰ (0.35±0.02比0.27±0.02)、CollⅢ(0.26±0.02比0.22±0.03)表达增多(P＜0.05或P＜0.01);而Masson染色结果提示:胶原纤维含量、内膜和中膜厚度在两组之间的差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 母体缺氧上调胎兔颈动脉TGF-β1、CTGF、Coll Ⅰ、CollⅢ的表达.
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创面负压治疗对糖尿病足创面肉芽组织胶原蛋白沉积的影响
目的 探讨创面负压治疗(NPWT)对糖尿病足(DF)肉芽组织胶原蛋白沉积的影响. 方法 选取2014年1月至2016年6月在解放军白求恩国际和平医院内分泌科住院的DF患者40例,随机分为NPWT 组和对照组(Con),每组各20例.NPWT 组给予NPWT 治疗,Con组给予常规换药治疗.两组分别于治疗前及治疗第14天取创面肉芽组织,行免疫组织化学染色,Western blot和RT-PCR分析Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达情况. 结果 免疫组织化学分析显示,两组治疗后Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白平均面密度值较治疗前升高,NPWT组升高的程度高于Con组[(0.12 ± 0.03)vs(0.34 ± 0.04),(0.06 ± 0.03)vs (0.19 ± 0.03),P＜0.01].Western blot分析显示,两组治疗后Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白相对蛋白表达值较治疗前均升高,但NPWT 组升高的程度高于 Con组[(0.10 ±.042)vs(0.25 ± 0.08),(0.11 ± 0.03)vs (0.19 ± 0.07),P＜0.01].RT-PCR分析显示,两组治疗后Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白mRNA相对表达值较治疗前均升高,但NPWT组升高程度高于Con组[(0.94 ± 0.29)vs(3.24 ± 0.54),(1.13 ± 0.45)vs(3.13 ± 1.20),P＜0.01]. 结论 NPWT可促明显进创面肉芽组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达上调,从而促进创面的愈合.
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肉桂醛对高糖心肌成纤维细胞增殖及胶原蛋白的影响和机制
目的 研究肉桂醛对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白分泌的影响及细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)信号通路的作用.方法 体外培养新生大鼠心肌成纤维细胞,MTT检测肉桂醛对高糖环境下细胞增殖的影响;ELISA检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达;RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA的表达;Western blot检测ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表达.结果 与对照组比较,高糖组成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白表达增加(P＜0.05).与高糖组比较,肉桂醛组心肌成纤维细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达降低[(3.14土0.12)vs(2.01±0.08),P＜0.05)].结论 肉桂醛能抑制高糖诱导的心肌成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的增加,其作用可能与下调ERK1/2活性有关.
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球形脂联素对2型糖尿病大鼠动脉粥样硬化的影响及其机制探讨
目的 观察球形脂联素(gAd)对2型糖尿病(T2DM)大鼠动脉粥样硬化的影响并探讨其作用机制.方法 90只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(N组,n=24)和T2DM造模组(n=66),成模的53只再分为T2DM组(D组,n=26)、干预组(A组,n=27).A组予gAd 10μg·kg-1·d-1腹腔推注,余两组予等量生理盐水.各组分别于4、8、12周(w)末随机取8只大鼠麻醉后采血,备测生化指标,留取胸主动脉,行HE染色后光镜观察其形态学改变,并用免疫组化法测Ⅰ型胶原蛋白(Col-1)的表达,应用Western blotting、实时荧光定量聚合酶链反应法测转化生子因子β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7蛋白及其mRNA的表达.统计学采用单因素方差分析和LSD-t检验.结果 (1)在各时间段中,与N组相比,D组胸主动脉出现动脉粥样硬化改变,且随时间延长,病变逐渐加重,TGF-β1、Smad3蛋白及Col-1表达明显增多(12 w:1.28±0.01比0.99±0.02、1.08±0.01比0.84±0.01、183.3±0.6比200.7±2.1,t=25.108、20.779、15.011,均P<0.05),而Smad7蛋白减少(12 w:0.72±0.02比1.10±0.02,t=30.018,P<0.05).(2)与同期D组比较,A组胸主动脉粥样硬化病变减轻,12 w时TGF-β1、Smad3及Col-1蛋白表达分别为1.05±0.01、0.81±0.02、196.3±1.2,明显低于D组(t=19.913、23.377、11.258,均P<0.05),而Smad7蛋白增多(12 w为0.99±0.01,t=21.404,P<0.05).且随gAd干预时间延长,病变逐渐减轻,TGF-β1、Smad3及Col-1逐渐减少,Smad7逐渐增多(均P<0.05).结论 gAd可通过上调Smad7或下调TGF-β1、Smad3进而抑制TGF-β1/Smads传导通路,发挥抗血管壁纤维化作用,从而缓解T2DM大鼠动脉粥样硬化进程.
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负压伤口疗法对糖尿病足不同程度缺血创面肉芽组织Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的 探讨负压伤口疗法(NPWT)对糖尿病足不同程度缺血创面肉芽组织Ⅰ型胶原蛋白表达的影响.方法 选取2014年1月至2016年1月在解放军白求恩国际和平医院住院期间符合入组标准的糖尿病足患者30例,依据踝肱指数(ABI)把入组患者分为轻度下肢缺血组(0.7≤ABI≤0.9)和中度下肢缺血组(0.5≤ABI ＜0.7),每组各15例.两组患者均给予NPWT治疗,疗程14 d.分别于治疗前及治疗第14天取患者创面肉芽组织,将标本分成2份,1份固定在4％多聚甲醛中用于Ⅰ型胶原蛋白免疫组织化学染色,观察Ⅰ型胶原蛋白沉积情况;另1份于-80℃保存,用Western blotting法和Real-time PCR法定量测定Ⅰ型胶原蛋白及其mRNA表达情况.数据比较采用独立样本t检验.结果 免疫组织化学染色分析显示,治疗第14天,两组Ⅰ型胶原蛋白平均面密度值较治疗前均明显升高,差异均有统计学意义(P值均小于0.05);但与中度下肢缺血组(0.25±0.06)相比,轻度下肢缺血组胶原蛋白平均面密度值(0.35±0.07)升高更为明显,差异有统计学意义(=4.71,P＜0.05).Western blotting法分析显示,治疗第14天,两组Ⅰ型胶原蛋白相对表达水平较治疗前均明显升高,差异均有统计学意义(P值均小于0.05);但与中度下肢缺血组(0.16 ±0.09)相比,轻度下肢缺血组Ⅰ型胶原蛋白相对表达水平(0.28±0.08)升高更为明显,差异有统计学意义(t=3.51,P＜0.05).Real-time PCR法分析显示,治疗第14天,两组Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达水平较治疗前均明显升高,差异均有统计学意义(P值均小于0.05);与中度下肢缺血组(2.63 ±0.62)相比,轻度下肢缺血组Ⅰ型胶原蛋白mRNA相对表达水平(3.83±0.60)升高更为明显,差异有统计学意义(t=5.33,P＜0.05).结论 NWWT对糖尿病足患者不同程度缺血创面Ⅰ型胶原蛋白表达的影响不同,对于轻度缺血创面肉芽组织的Ⅰ型胶原蛋白的表达增加效果较好,随着缺血程度的加重,NPWT对创面肉芽组织的Ⅰ型胶原蛋白的表达促进效果可能会下降.
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富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白对瘢痕疙瘩成纤维细胞β1转化生长因子和Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响
目的 探讨实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)法检测富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(secreted protein,acidic and rich in cysteine,SPARC)对瘢痕疙瘩成纤维细胞β1转化生长因子(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响.方法 用不同浓度重组人SPARC作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,并以空白组为对照,实时荧光定量RT-PCR法检测TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达.结果 与空白对照组相比,实验组TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显增高(P＜0.05).结论 SPARC能显著促进搬痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白基因的表达.
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红芪多糖对db/db小鼠糖尿病心肌病的病理形态与胶原表达的影响
目的 研究红芪多糖(HPS)对db/db小鼠糖尿病心肌病的病理形态及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达的影响.方法 用随机数表法将6周龄雄性db/db小鼠分为5组:正常组、模型组、对照组和高、中、低3个剂量实验组.模型组和正常组ab/m小鼠均给予0.9％ NaCl 10 μL·g-1灌胃;对照组给予4mg· kg-1 ·d-1罗格列酮混悬液灌胃;实验组分别给予200,100,50 mg·kg-1 ·d-1HPS混悬液灌胃,每组12只,均连续灌胃8周.Masson染色观察心肌组织病理改变,实时荧光定量核酸扩增法与蛋白质印迹法分别检测心肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原α与mRNA与蛋白的表达.结果 模型组、高、中2个剂量实验组和对照组的Ⅰ型胶原的mRNA分别为5.04±1.35,1.57 ±0.21,2.73 ±0.57,2.06±0.47;这4组的Ⅲ型胶原的mRNA分别为3.12 ±0.25,1.59 ±0.09,1.95 ±0.12,1.67±0.21;这4组的Ⅰ型胶原蛋白表达分别为1.29 ±0.05,0.87±0.03,0.96±0.04,0.89±0.02;这4组的Ⅲ型胶原蛋白表达分别为0.89±0.03,0.69 ±0.01,0.76±0.01,069±0.01.3个给药组与模型组比较,上述指标均明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.01;除了中剂量实验组的Ⅰ型胶原的mRNA为P＜0.05以外).心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的蛋白表达与Masson染色胶原纤维阳性染色面积值呈正相关,相关系数分别为0.955,0.909(P ＜0.01).结论 HPS能抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达水平及Ⅰ/Ⅲ胶原蛋白的比值,其对糖尿病心肌病db/db小鼠的心肌保护作用可能是通过影响Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达而发挥作用.
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孕期尼古丁暴露致成年雄性仔鼠心肌纤维化
目的 研究孕期尼古丁暴露对子代大鼠心射血功能和心肌纤维化的影响.方法 尼古丁暴露组孕鼠从妊娠第4～20天每天SC尼古丁6.0 mg·kg-1,连续17d,正常对照组Sc生理盐水.检测孕21 d胎鼠、出生后15和90 d雄性仔鼠的体质量和心脏质量.心电图记录90 d雄性仔鼠的心率;多普勒超声仪检测仔鼠心射血功能,包括每搏输出量(SV)、心输出量(CO)、左室长轴缩短分数(FS)、射血分数(EF)、左室后壁舒张期厚度(LVPWd)和室间隔舒张期厚度(IVSd);电镜检测心肌超微结构,Masson染色定性检测心肌胶原蛋白的沉积,放射免疫法定量检测心肌组织l型胶原蛋白水平.结果 与正常对照组仔鼠比较,孕期尼古丁暴露组21 d胎鼠和15d雄性仔鼠心脏质量和体质量下降(P＜O.05,P＜O.01),但90 d雄性仔鼠的心脏质量和体质量无明显差异.尼古丁暴露组90 d雄性仔鼠心率升高[366±10 vs (418±10)min-1](P＜0.05);超声心动图检测显示,CO,FS和EF明显降低(P＜0.01),IVSd和LVPWd明显增加(P＜0.05,P＜0.01);电镜观察显示,心肌纤维紊乱,细胞外基质增加;Masson染色显示,心肌胶原蛋白沉积;放射免疫法检测结果显示,心肌组织l型胶原蛋白水平升高[0.59±0.09 vs (0.40±0.05) μg·g-1组织](P＜O.01).结论 孕期尼古丁暴露可导致成年雄性仔鼠心肌组织Ⅰ型胶原蛋白水平升高,心肌纤维化,心射血功能下降.这些病理变化可能导致其心血管疾病易感性增加.
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Ⅰ型胶原蛋白和TGF-阻在食管鳞癌中的表达及临床意义
目的 研究Ⅰ型胶原蛋白和TGF-β1在食管鳞癌中的表达及意义.方法 选取2013年1月～2014年12月在笔者医院接受治疗的食管鳞癌患者82例作为研究对象,将其切除的食管鳞癌组织制成标本作为观察组进行研究,另随机选取20例患者取其癌组织旁正常的食管黏膜组织作为对照组,检测两组中Ⅰ型胶原蛋白和TGF-β1的表达情况.并采用单因素分析这两种指标表达的相关性.结果 在癌组织中,Ⅰ型胶原蛋白、TGF-β1均存在异常高表达,差异有统计学意义(P＜0.05);实施单因素分析,发现Ⅰ型胶原蛋白、TGF-β1的高表达与是否存在淋巴结的转移以及pTNM分期有明显的关系,且发现二者的表达存在明显的正相关性(r =0.744,P=0.000).结论 在食管鳞癌患者癌组织中,Ⅰ型胶原蛋白以及TGF-β1存在明显的高表达,且这两种指标的表达与肿瘤的浸润深度、pTNM分期以及淋巴结是否转移存在明显的相关性,可见其在食管鳞癌的发生以及发展过程中起到较为重要的作用.
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丹玄口康对ANE诱导的口腔黏膜下纤维化TGFβ1/Smad信号通路的影响
目的 探讨丹玄口康对ANE诱导的口腔黏膜下纤维化TGFβ1/Smad信号通路的影响.方法 体外培养大鼠口腔黏膜FB,以ANE为诱导剂,丹玄口康药物血清为干预物,以TGFβ1/Smad信号通路阻断剂LY2109761为阳性对照物,采用免疫细胞化学法检测细胞内Ⅰ型胶原蛋白、磷酸化Smad2/3蛋白的表达变化,用酶联免疫吸附剂测定法检测培养上清Ⅰ型胶原的含量,采用荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原mRNA的表达变化.结果 ANE刺激FB后,细胞和上清液中Ⅰ型胶原的表达、Smad2/3的磷酸化胞核的转位水平和Ⅰ型胶原mRNA的表达均高于正常组(P<0.05);ANE刺激FB的同时给予LY2109761干预后,细胞和上清液中Ⅰ型胶原的表达、磷酸化Smad2/3的胞核转位水平和Ⅰ型胶原mRNA的表达均有所降低(P<0.05);ANE刺激FB的同时给予丹玄口康含药血清干预后,细胞和上清液中I型胶原的表达、磷酸化Smad2/3的胞核转位水平和I型胶原mRNA的表达均有所降低(P<0.05).结论 丹玄口康可通过调控TGFβ1/Smads信号转导通路,抑制ANE刺激的FB胶原蛋白的合成,从而发挥抗纤维化作用.
关键词： 丹玄口康 口腔黏膜下纤维化 Ⅰ型胶原蛋白 TGFβ1/Smad信号通路 -
羊膜细胞Ⅰ型胶原蛋白支架复合物用于修复胎膜破口的研究
目的 探讨羊膜细胞I型胶原蛋白支架复合物用于修复胎膜破口的可行性.方法 将人羊膜间质细胞接种在I型胶原蛋白三维基质中,人羊膜上皮细胞接种在基质的表面,构建羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白支架复合物以模拟人体羊膜组织结构.DAPI标记三维基质中的细胞核以计数羊膜细胞在三维培养第2,8天的细胞数量.动态测定羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白复合物体积.培养含有不同数量羊膜间质细胞的羊膜细胞/I型胶原蛋白支架复合物,15 d后检测抗张强度.结果 第2天和第8天的细胞数目分别是(121±5)/cm2和(124±4)/cm2(P>0.05).第5天时,I型胶蛋白的面积为原体积的45%,第10天时约为15%,第15天时约为原14%,羊膜间质细胞的存在对于Ⅰ型胶原蛋白基质具有重新塑形的作用(P<0.01),羊膜间质细胞可以导致I型胶原蛋白的收缩,抑肽酶和GM6001也不能抑制这种收缩.羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白复合物抗张强度随人羊膜间质细胞数量的增多而增强(P<0.01).结论 羊膜细胞/Ⅰ型胶原蛋白支架复合物有望成为修复胎膜破口的材料.
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脊柱侧凸研究进展
1特发性脊柱侧凸的病因学特发性脊柱侧凸的发病原因仍然不明,尽管近年来一些文章强调基因的相关性.不断报道的青春期特发性脊柱侧凸褪黑素的作用仍在争论之中,与以前在鸡的模型诱发脊柱侧凸不同,Cheung等报道在猿猴松果体切除后不会导致发育性脊柱侧凸.同时Moreau等报道青春期特发性脊柱侧凸患者成骨细胞褪黑素信号转导功能障碍,这一理论的基础是这些病人的骨骼肌组织原代细胞培养.Ogilvie等的一项尤他州100个家庭研究表明至少有一个基因与发育性青春期特发性脊柱侧凸有关.有趣的是两个候选基因聚合胶原和Ⅰ型胶原蛋白α-2分别被Merola等和Cheung等发现.Lowe等注意到患者血清血小板钙调蛋白持续升高预示着脊柱侧凸会有进行性发展.
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天山雪莲愈伤组织提取物对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响
目的 研究天山雪莲愈伤组织提取物(extract from callus of Saussurea involucrate,ESI)对人成骨肉瘤细胞MG-63增殖及分化的影响,探讨ESI抗骨质疏松的作用及机制.方法 以MG-63为研究对象,采用MTT法和乳酸脱氢酶(LDH)法检测ESI对成骨细胞增殖的影响,相关试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性和羟脯氨酸(Hyp)水平,茜素红染色法观察对矿化骨结节形成的影响;实时荧光定量PCR (RT-PCR)检测骨保护素(OPG)和核因子-κB活化因子受体配体(RANKL)基因表达水平;Western blotting法检测OPG/RANKL蛋白水平;检测p38特异性抑制剂SB203580对ESI作用于成骨细胞增殖、分化、矿化以及OPG/RANKL表达的影响.结果 ESI低于125 μg/mL对成骨细胞无细胞毒性,31.25、62.5 μg/mL对成骨细胞生长有促进作用;ESI显著提高ALP活性、Hyp水平以及矿化骨结节形成;显著上调MG-63细胞OPG mRNA水平,下调RANKL mRNA水平,上调OPG/RANKL蛋白水平;SB203580显著抑制ESI对成骨细胞增殖、ALP活性、矿化结节形成的促进作用以及对胶原蛋白积累量和OPG/RANKL值的提高作用.结论 ESI能够促进成骨细胞增殖、分化和矿化,其机制可能与调节OPG和RANKL基因表达有关,并且可能通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路进行信号转导.
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肝纤维化的分子成像进展
肝纤维化是各种慢性肝损伤的共同转归,肝纤维化分子成像基于病程中异常表达的靶分子,在真实完整的生理环境中通过图像直接观察细胞和分子通路.通过对病变的发生、发展过程进行成像,可做到对肝纤维化的早期诊断、早期干预及疗效评估.迄今为止,以活化的星状细胞或细胞外基质某类成分为靶分子的肝纤维化分子成像已取得一定进展.综述基于不同成像靶点的分子成像在肝纤维化中的应用进展.
