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2013-2015年深圳市福田区人星状病毒感染流行病学及分子特征分析
目的 研究深圳市福田区腹泻患者人星状病毒(human astrovirus,HAstV)感染的流行病学及分子特征.方法 收集2013年1月至2015年12月深圳市福田区1 625例疑似腹泻患者粪便标本,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测粪便中的HAstV核酸,RT-qPCR阳性样品使用Mon269/Mon270引物对,用荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增HAstV的开放阅读框ORF2区域,将RT-PCR扩增产物纯化、测序后进行序列分析,并分析病例的流行病学资料.结果 2013-2015年福田区HAstV的检出率为2.03％(33/1 625),其中2013年的检出率为1.84％(12/653),2014年的检出率为1.31％(7/535),2015年的检出率为3.20％(14/437);男性检出率为2.27％(21/925),女性检出率为1.71％(12/700),男女患者检出率的差异无统计学意义(x2=0.62,P=0.431).HAstV在各年龄组人群均有检出,但在1岁以下年龄组患者的检出率低,为1.69％(11/650).HAstV在1月份的检出率高(5.59％,8/143),7月份的检出率低(未检出).将33份RT-qPCR检测为HAstV阳性的样品用开放阅读框ORF2区进行分型,结果有27份可进一步分型,其中HAstV-1检出15株,是福田区HAstV的主要流行株,此外分别检出7株HAstV-4、4株HAstV-5和1株HAstV-2.结论 HAstV是导致福田区病毒性腹泻的病原体,HAstV-1是福田区HAstV的主要流行株,同时也存在其他型别的感染.
关键词： 星状病毒 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 序列分析 流行病学研究 -
ERCC1在结直肠癌组织中的表达与化疗疗效及临床病理的关系
目的 探讨ERCC1基因在结直肠癌组织中的mRNA表达水平与患者对铂类药物化疗反应的关系.方法 提取80例结直肠癌组织中总mRNA,逆转录为cDNA,Taq-man实时荧光定量PCR技术检测ERCC1基因总mRNA表达水平,并分析其与患者化疗反应的关系.结果 ERCC1基因总mRNA相对表达量在化疗敏感组的值低于化疗耐药组,差异有统计学意义.(P=0.013)结论 结直肠癌组织中ERCC1基因mRNA表达与铂类药物化疗耐药相关.
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维医异常胆液质载体UC病证大鼠模型的建立以及结肠组织中炎症相关因子iNOS、eNOS的变化
目的 建立异常胆液质载体溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)病证大鼠模型,检测大鼠结肠组织中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)两种炎症相关因子,探讨他们在UC发生过程中的作用.方法 将动物分为正常组和异常胆液质载体UC病证模型组,根据维医体液论,采用2,4,6-三硝基苯磺酸/乙醇法构建异常胆液质载体UC病证大鼠模型,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)方法检测两组大鼠结肠组织中iNOS、eNOS的hnRNA与mRNA表达水平.结果 (1)异常胆液质载体UC病证模型组大鼠体征、症状、结肠黏膜损伤等均符合异常胆液质载体UC病证模型的判定标准;(2)qRT-PCR结果显示,与正常组比较,异常胆液质载体UC病证模型组大鼠结肠组织中iNOS的hnRNA表达水平上调,差异有统计学意义(P＜0.05),而eNOS的hnRNA表达水平无统计学意义(P＞0.05);异常胆液质载体UC病证模型组大鼠结肠组织中iNOS、eNOS的mRNA表达水平均上调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 (1)炎症相关因子iNOS、eNOS都参与了UC的发病过程;(2)异常胆液质载体UC病证大鼠结肠组织中炎症相关因子表达水平的调控存在mRNA的稳定性相关的转录后调控机制.
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IL-1、IL-10mRNA在异常胆液质载体溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中的表达
目的 探讨异常胆液质载体溃疡性结肠炎大鼠结肠组织中炎症相关因子白介素(interleukin,IL)-1α、IL-1β、IL-10在异常胆液质载体溃疡性结肠炎病证发生、发展中的作用.方法 根据维吾尔医学体液理论建立异常胆液质载体证候模型的基础上,采用2,4,6-三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)/乙醇法构建异常胆液质载体溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)病证大鼠模型,并进行鉴定,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(quantitative reverse transcriptionpolymerase chain reaction,qRT-PCR)方法,检测正常组与异常胆液质载体UC病证模型组(模型组)大鼠结肠组织中IL-1α、IL-1β、IL-10 mRNA表达水平,并分析其表达差异.结果 模型鉴定与HE染色结果显示,模型组大鼠体征、症状、结肠黏膜损伤等均符合异常胆液质载体UC病证模型的判定标准;qRT-PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠结肠组织中IL-1α、IL-1β、IL-10的mRNA表达水平均上调,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 异常胆液质载体UC病证模型组大鼠结肠组织中存在炎症相关因子平衡紊乱.
关键词： 异常胆液质 溃疡性结肠炎 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 -
实时荧光定量RT-PCR对胃癌组织中hPMS2 mRNA 的检测及其临床意义
目的:探讨DNA错配修复基因hPMS2在胃癌组织中的表达水平及其临床意义.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对41例胃癌患者的癌组织、37例癌旁萎缩性胃炎组织、25例慢性萎缩性胃炎组织及20例慢性浅表性胃炎组织中hPMS2 mRNA进行定量检测,以三磷酸甘油醛脱氢酶基因(hGAPDH)为内参照.结果:胃癌组织、癌旁萎缩性胃炎组织、慢性萎缩性胃炎组织及慢性浅表性胃炎组织中hPMS2 mRNA的含量分别是28.33±14.05,16.88±10.67,7.25±8.72和1.78±1.34,四组相比差异有显著性(F=31.82,P=0.00).胃癌组织中hPMS2 mRNA含量明显高于其他三组;癌旁萎缩性胃炎组织中含量明显高于非胃癌患者的胃炎组织,差异均有显著性(P＜0.01);而非胃癌患者的慢性萎缩性胃炎组织中hPMS2 mRNA的含量与慢性浅表性胃炎组织相比差别无显著性.hPMS2 mRNA含量与肿鬃瘤的大小、浸润深度、有无淋巴结转移关系不明显,差异均无显著性.结论:hPMS2基因的异常转录可能与胃癌的发生有关,而与胃癌的发展关系不大.
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印迹基因SLC22A18在乳腺癌中的表达及其意义
目的 研究印迹基因SLC22A18在乳腺浸润性导管癌中mRNA和蛋白水平的表达.并分析SLC22A18表达与乳腺癌临床病理特征之间的相关性,从而探讨SLC22A18基因在乳腺癌发生发展中的作用.方法 应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测46例乳腺浸润性导管癌和对应癌旁乳腺组织,以及20例乳腺良性病变组织中SLC22A18 mRNA的表达,应用免疫组织化学方法检测46例乳腺浸润性导管癌组织、20例乳腺良性病变中SLC22A18蛋白表达,分析SLC22A18 mRNA和蛋白表达与乳腺癌临床病理特征间的关系.结果 SLC22A18在46例乳腺浸润性导管癌中mBNA表达量低于癌旁组织(Z=-4.900,P＜0.01);46例乳腺浸润性导管癌中SLC22A18 mRNA表达量低于乳腺良性病变(Z=-3.182,P＜0.01).40例乳腺浸润性导管癌中SLC22A18 mRNA表达量低于6例导管内癌灶性浸润(Z=-2.022,P＜0.05).SLC22A18蛋白在20例乳腺良性病变、46例乳腺浸润性导管癌中表达阳性率分别为95%、69.6%,两组阳性表达率差异有统计学意义(x2=5.135,P＜0.05).SLC22A18 mRNA和蛋白表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期及淋巴结转移均无相关性(P＞0.05).结论 SLC22A18在乳腺浸润性导管癌中表达下调,SLC22A18可能参与了乳腺癌的发生,并有可能成为乳腺癌早期诊断的新分子标志物.
关键词： 乳腺肿瘤 基因组印迹 SLC22A18 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 -
富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白对瘢痕疙瘩成纤维细胞β1转化生长因子和Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响
目的 探讨实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)法检测富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(secreted protein,acidic and rich in cysteine,SPARC)对瘢痕疙瘩成纤维细胞β1转化生长因子(TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响.方法 用不同浓度重组人SPARC作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞,并以空白组为对照,实时荧光定量RT-PCR法检测TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白mRNA的表达.结果 与空白对照组相比,实验组TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达明显增高(P＜0.05).结论 SPARC能显著促进搬痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原蛋白基因的表达.
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联合免疫磁化分选技术和实时荧光定量RT-PCR检测结直肠癌外周血肿瘤细胞及其临床意义
目的 建立联合应用免疫磁化分选技术和实时荧光定量RT-PCR检测循环肿瘤细胞的方法,并探讨定量检测结直肠癌患者外周血肿瘤细胞的临床意义.方法 体外培养结肠癌HCT- 116细胞,与5ml健康人外周静脉血混合,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.分离后的标本分为免疫磁珠富集组(A组)和非富集组(B组),比较实时荧光定量RT-PCR方法检测其中人端粒酶逆转录酶( hTERT) mRNA的表达水平.抽取22例初治的结直肠癌患者和22例健康人外周静脉血,标本分为免疫磁珠富集组(C组)和非富集组(D组),健康者标本设为E组,比较三组hTERT-mRNA的表达水平,并探究与临床病理参数的关系.结果 A组hTERT -mRNA表达水平显著高于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).22例结直肠癌患者中,C组hTERT-mRNA表达水平显著高于D组(P＜0.05).结直肠癌患者C组hTERT-mRNA表达水平显著高于健康对照E组(P＜0.05).结直肠癌患者hTERT-mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位和肿瘤浸润深度无显著相关(P＞0.05),与患者淋巴结有无转移和TNM分期呈显著相关(P＜0.05).结论 联合应用免疫磁化分选技术和RT-PCR的检测方法,通过测定hTERT-mRNA表达水平可定量检测外周血肿瘤细胞,检测灵敏度优于单纯RT-PCR检测方法.结直肠癌患者外周血hTERT-mRNA的表达水平与淋巴结转移和TNM分期显著相关.
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脑红蛋白在蛛网膜下腔出血大鼠脑组织中的表达
目的 研究脑红蛋白(Ngb)在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型脑组织中的表达.方法 将成年雄性Sprague-Dawley大鼠84只,随机分为对照组(12只)和SAH组(72只),SAH组再分为模型建立后3、6、12、24、48及72 h共6个亚组(每组12只).通过改良后视交叉池注血法建立大鼠SAH模型.应用Western Blot、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化法,检测SAH后不同时间点脑组织中Ngb蛋白及其mRNA的表达水平水平变化和分布.结果 ①Western Blot结果显示,大鼠正常脑组织中Ngb含量较少(0.56±0.14).SAH后3h脑组织中Ngb表达蛋白水平开始升高(0.77 ±0.16),24 h达到高峰(1.27 ±0.18),与对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05;其后逐渐下降.②实时荧光定量RT-PCR结果显示,大鼠脑组织Ngb mRNA从SAH后3h开始增加,6h达高峰,随后逐渐下降,至72 h基本下降到对照组水平.其中6h及12h组与对照组相比,差异有统计学意义,均P＜0.01.③免疫组化染色结果显示,对照组大鼠脑组织中有少量Ngb表达阳性细胞,但多呈弱阳性表达,且在颞叶皮质表达较多,海马区也有少量表达；SAH后Ngb阳性细胞明显增多,并且多数呈强阳性表达,在颞叶皮质增高明显.结论 大鼠SAH后脑组织内Ngb蛋白及mRNA水平表达均上调,提示Ngb可能参与对SAH后早期脑损伤的保护作用.
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2015-2016年上海市浦东新区涉禽场所禽流感病毒监测结果
目的 了解2015-2016年上海市浦东新区禽流感病毒在涉禽场所中的阳性情况,为人禽流感防控工作提供依据.方法 采集2015-2016年上海市浦东新区规模禽类养殖场、家庭禽类养殖户和活禽交易市场活禽鸡的禽类样本(喉/泄殖腔拭子)及外环境样本(禽类粪便、物体表面擦拭样本、水体样本),运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测禽流感病毒.结果 2015-2016年共检测标本2 820份,检出甲型流感病毒阳性530份,阳性率为18.79％.H5、H7和H9亚型均有检出,以H9为主,阳性率为10.92％.3类涉禽场所中,以活禽交易市场的禽流感病毒检出阳性率高为37.69％,涉禽场所8种类型样本中,案板表面擦拭标本、笼具污水的阳性率高于禽喉试子、笼具表面擦拭标本、禽粪便、地表面擦拭物、禽饮用水及禽泄殖腔拭子.全年进行监测,其中1、6-7和10-12月检出阳性率高于2-5和8-9月.结论 2015-2016年浦东新区活禽交易市场、禽贩卖及屠宰环节和冬季禽流感病毒检出率较高,今后应加强监测监管,做好消毒、适时关闭活禽交易市场等防控措施,降低人禽流感发生风险.
关键词： 涉禽场所 禽流感病毒 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 -
S100A9在宫颈鳞状细胞癌中的表达
目的:探讨S100A9在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达.方法:采用实时定量RT-PCR的方法检测12例宫颈鳞状细胞癌组织及10例正常宫颈组织中S100A9 mRNA的表达水平.结果:S100A9 mRNA在宫颈鳞状细胞癌组织中的相对表达量为2.72±2.50,在正常宫颈组织中的相对表达量为8.34±2.94,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:S100A9在宫颈鳞状细胞癌组织中表达下调,可能是宫颈鳞状细胞癌变过程中具有抑癌作用的基因.
关键词： 宫颈鳞状细胞癌 S100A9 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 -
非小细胞肺癌患者骨髓CK19和LUNX mRNA的实时荧光定量检测和意义
目的:检测非小细胞肺癌患者CK19 mRNA和LUNX mRNA的表达情况,探讨其作为微转移检测分子标志物的可行性.方法:选择初治的非小细胞肺癌(NSCLC)患者62例,以肺部良性疾病10例作为对照组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和普通RT-PCR技术,检测肺癌、良性病变肺组织和骨髓的CK19 mRNA和LUNX mRNA的表达.结果:肺癌和良性病变肺组织RT-PCR检测结果显示CK19 mRNA和LUNX mRNA表达阳性率为100%;62例NSCLC患者骨髓标本FQ-RT-PCR检测结果显示,NSCLC患者中骨髓CK19 mRNA表达阳性率45.2%(28/62),明显高于肺良性病变组10%(1/10)(f=0.037),NSCLC组骨髓LUNX mRNA表达阳性率38.7%(24/62)明显高于肺良性病变组0%(0/10)(P=0.017);骨髓CK19 mRNA表达阳性率随病理分期升高,接近统计学意义(P=0.06),而与病理类型、肿瘤分化程度无关;骨髓LUNX mRNA表达阳性率随分期升高且有统计学意义(P=0.02),而与病理类型、肿瘤分化程度无关;骨髓CK19 mRNA和LUNX mRNA表达明显相关(P＜0.001).结论:CK19 mRNA和LUNX mRNA可作为检测非小细胞肺癌患者微转移特异、敏感的分子标志物,可能有助于早期诊断肺癌转移,从而指导临床分期和治疗.
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不同植骨材料在腰椎融合过程中的应用及转化生长因子β的表达
背景:骨形态发生蛋白单独应用于骨移植效果不佳.而转化生长因子β能明显增强其在体内的诱导成骨作用.目的:观察自体骨及重组人骨形态发生蛋白2复合骨用于兔腰椎融合过程中转化生长因子β的基因表达.方法:将新西兰大白兔60只随机分为自体骨组、复合骨组和异体骨组,别于双侧L5-6横突间植入自体骨、重组人骨形态发生蛋白2复合骨及异体骨.植入后7,4,1,8,5 d取3组节段骨痂,用实时荧光定量RT-PCR检测转化生长因子β的基因表达水平.结果与结论:植入后28 d,合骨组转化生长因子β达峰值,后有所下降,均高于自体骨组和异体骨组(P < 0.05).结果证实,组人骨形态发生蛋白2复合骨缓释重组人骨形态发生蛋白2,效地促进了转化生长因子β的表达,显增强了体内的诱导成骨效应.
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宫颈鳞癌脱落细胞人端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义
目的 探讨宫颈鳞癌脱落细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT) mRNA的表达及其在宫颈鳞癌早期诊断中的作用.方法 采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测人宫颈癌Hela细胞株（细胞组）以及2008年4-10月广东省妇幼保健院经临床和病理证实的31例宫颈鳞癌（病例组）、21例正常或宫颈炎症（对照组）宫颈脱落细胞中hTERT mRNA的表达,以细胞组hTERT mRNA的表达作为定性、定量参照；对病例组及对照组同时采用液基薄层细胞学(TCT)检查.结果 (1)在病例组和对照组宫颈脱落细胞中hTERT mRNA阳性表达率分别为80.6％和9.5％,其相对定量表达水平NhTERT分别为0.4646～13.7823和0.0093～0.0816,差异均有统计学意义(P＜0.05)；(2)采用宫颈脱落细胞hTERT mRNA表达进行宫颈鳞癌筛查的灵敏度和特异度分别为80.6％和90.5％.结论 宫颈鳞癌患者脱落细胞hTERT mRNA的阳性表达率及表达水平均异常增高,检测宫颈脱落细胞hTERT mRNA的表达,有助于宫颈鳞癌的早期诊断.
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2种检测VEGF-C和VEGFR-3基因表达的方法在诊断食管癌淋巴结转移中的价值
目的 评价实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和免疫组织化学法(IHC)测定食管癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)基因表达在诊断食管癌淋巴结转移中的意义.方法 分别采用实时FQ-RT-PCR和IHC检测食管癌组织中VEGF-C/VEGFR-3 mRNA和VEGF-C/VEGFR-3蛋白.结果 有淋巴结转移组食管癌组织VEGF-C/VEGFR-3 mRNA和蛋白的表达均显著高于无淋巴结转移组;实时FQ-RT-PCR检测VEGF-C mRNA诊断食管癌淋巴结转移的敏感性、特异性以及与病理学诊断的符合率与IHC检测VEGF-C蛋白差异无统计学意义;实时FQ-RT-PCR检测食管癌组织VEGFR-3 mRNA诊断食管癌淋巴结转移的敏感性、特异性以及与病理学诊断的符合率均明显高于IHC(P<0.05).结论实时FQ-RT-PCR检测VEGF-C/VEGFR-3 mRNA可较好地反映食管癌淋巴结转移状况.
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实时荧光定量PCR测定食管癌VEGF-C和VEGFR-3基因表达
目的 建立测定血管内皮生长因子-C(VEGF-C) mRNA和血管内皮生长因子受体-3 (VEGFR-3) mRNA的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR),探讨其在食管癌组织及其癌旁组织中的表达水平.方法 分别以自行构建和克隆的pMD18-VEGF-C和pMD18-VEGFR-3质粒作为定量模板,用循环阈值(Ct)定量起始的模板,在荧光TaqMan方法的基础上建立了测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR,并分别测定了40例食管癌组织及其癌旁组织中VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平.结果 VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA测定的线性范围均为103~108拷贝/μg总RNA;VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA高、低值的批内、批间变异系数(CV)在7.07%～12.49%之间.VEGF-C mRNA主要表达在癌组织中,而VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达无差异;VEGF-C mRNA与VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达存在相关性;24例淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA水平与16例无淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织存在显著差异,提示有淋巴结转移的食管癌组织及其癌旁组织VEGF-C和VEGFR-3基因表达水平上调.VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平与食管癌临床病理分期有密切关系.结论 我们建立的测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR灵敏、稳定、重现性好,可供VEGF-C、VEGFR-3基因表达的临床检测和研究.VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA基因表达水平可作为食管癌淋巴结转移的预测指标,亦可作为分子水平上判定食管癌临床分期的辅助指标之一.
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结直肠癌患者外周血人端粒酶逆转录酶mRNA和MUC1 mRNA的检测及其临床意义
传统影像学检查和血清肿瘤标记物检测对结直肠癌微转移的诊断价值有限.目的:检测结直肠癌患者外周血人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA和MUC1 mRNA表达.探讨两者对结直肠癌微转移的诊断价值.方法:收集53例结直肠癌患者和21名健康人的外周血标本,以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT mRNA和MUC1 mRNA表达,分析两者表达与肿瘤临床病理特征的关系.应用接受者操作特征曲线(ROC曲线)分析hTERT mRNA、MUC1 mRNA和两者联合检测对结直肠癌的诊断价值.结果:结直肠癌组外周血hTERT mRNA和MUC1 mRNA表达率和表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),两者表达与肿瘤淋巴结转移、血行转移和TNM分期相关(P<0.05).hTERT mRNA、MUC1 mRNA和两者联合检测诊断结直肠癌的ROC曲线下面积分别为0.806、0.778和0.861.诊断界值为Ct<32.结论:外周血hTERT mRNA和MUC1 mRNA可作为诊断结直肠癌微转移的标记物,以实时荧光定量RT-PCR联合检测两项指标优于单项检测.
关键词： 结直肠肿瘤 肿瘤转移 人端粒酶逆转录酶 黏蛋白类 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 -
褪黑素降低糖尿病大鼠肾皮质转化生长因子β1的表达
采用实时荧光定量RT-PCR、免疫组化和Western印迹法观察到糖尿病大鼠在褪黑素治疗后,大鼠肾皮质转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA及蛋白表达水平下降.提示褪黑素对糖尿病肾脏的保护作用来源于其抗氧化特性及对TGF-β1表达的抑制.
关键词： 糖尿病肾病 转化生长因子β1 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 褪黑素 -
Syndecan-1和HPA-1 mRNA在胃癌组织中的表达及其与胃癌侵袭转移的关系
背景与目的:Syndecan-1和HPA-1(乙酰肝素酶-1)可能参与多种恶性肿瘤的侵袭转移,但关于两者与胃癌的关系较少报道.本研究旨在探讨Syndecan-1 mRNA和HPA-1 mRNA在胃癌组织中的表达及两者与胃癌侵袭转移的关系.方法:采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测了58例胃癌及58例配对的癌旁组织(距癌2 cm)和58例配对远离胃癌的手术切缘正常组织(距癌5 cm以上)Syndecan-1和HPA-1的mRNA的表达水平,分析探讨两者与胃癌临床病理特征和胃癌侵袭转移的关系.结果:HPA-1 mRNA在胃癌中表达的阳性率(86.2%)显著高于癌旁组织(27.6%)和正常组织(5.2%)(P均<0.001),癌旁组织明显高于正常组织(P均<0.05).Syndecan-1 mRNA在正常组织中表达的阳性率(98.3%)显著高于癌旁组织(25.9%)和胃癌组(5.2%)(P均<0.001),癌旁组织中明显高于胃癌组织(P均<0.05).Syndecan-1的表达减弱和HPA-1的表达增强与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(P<0.05).Syndecan-1 mRNA的表达与HPA-1 mRNA的表达呈负相关.结论:Syndecan-1 mRNA在正常胃组织中呈高表达,HPA-1 mRNA在胃癌组织中呈高表达,且Syndecan-1的表达减弱与HPA-1的表达增强可促进胃癌的侵袭转移.联合检测Syndecan-1 mRNA及HPA-1 mRNA对于指导胃癌临床治疗及判断预后有重要价值.
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SYBR GreenⅠ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3mRNA表达水平
目的采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,建立检测前列腺癌抗原3(DD3)mRNA的标准,定量检测人体不同组织中该基因的表达水平.方法从LNCaP细胞中采用RT-PCR法扩增特异性DD3基因片段,将其与pMD 18-T载体连接,转化宿主菌JM109,对质粒标准进行聚合酶链反应(PCR)检测及测序.纯化后检测质粒拷贝浓度,制备梯度浓度标准品.应用LightCycler荧光定量PCR仪对标准品进行检测.取正常人乳腺组织、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢、正常前列腺组织、前列腺增生及前列腺癌组织,定量检测DD3 mRNA表达.结果建立稳定的检测DD3 mRNA的标准,正常人乳腺、膀胱、结肠、尿道、肺、睾丸、精囊、卵巢中无DD3 mRNA表达,在正常前列腺及前列腺增生组织中低表达,两者间差异无显著性(P＞0.05);在前列腺癌中高表达(P＜0.05).结论应用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR技术检测DD3 mRNA表达水平简便、可行、经济.DD3基因的表达具有良好的前列腺癌特异性.
