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骨金散对去卵巢大鼠Ⅰ型胶原交联N-端肽、Ⅰ型胶原mRNA表达的影响
目的:复制去卵巢大鼠骨质疏松动物模型,探讨中药骨金散对去卵巢雌性大鼠血清Ⅰ型胶原交联N-端肽(NTX)和骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.方法:6月龄雌性SD大鼠40只,随机分为去势组和假手术组.去势组切除双侧卵巢,假手术组切除部分脂肪.大鼠去势后1个月,将去势组随机分为3组:模型组、雌激素组和骨金散组,雌激素组每日灌服己烯雌酚0.05mg/kg,骨金散组按1.8g/kg剂量灌服骨金散,其余各组灌服等量生理盐水.2个月后,酶联免疫吸附法测量血清碱性磷酸酶(ALP)、NTX水平,RT-PCR方法检测右侧股骨骨组织Ⅰ型胶原mRNA表达水平.结果:与假手 术组比较,模型组血清ALP、NTX含量明显升高(P＜0.01),Ⅰ型胶原mRNA水平显著下降(P＜0.01).雌激素组和骨金散组大鼠体内的ALP、NTX水平显著低于模型组(P＜0.01),骨金散组大鼠体内的ALP水平高于雌激素组(P＜0.05).雌激素组和骨金散组实验大鼠骨组织中Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达含量明显高于模型组(P＜0.01).结论:骨金散可减轻去卵巢大鼠ALP、NTX水平的提高,上调骨组织Ⅰ型胶原mRNA的表达水平,这可能与其治疗骨质疏松的机制有关.
关键词： Ⅰ型胶原交联N-端肽 Ⅰ型胶原蛋白 骨金散 骨质疏松 去卵巢 -
电针对膝骨关节炎MIA模型大鼠软骨组织中Ⅰ型胶原蛋白基因表达的影响
目的：观察抑制Ⅰ型胶原蛋白基因表达是否为电针改善膝骨关节炎的作用机制之一。方法将40只成年SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、药物组和电针组，每组10只。采用注射单体碘乙酸钠(MIA)并驱赶大鼠运动来建立膝骨关节炎MIA模型，药物组造模后采用塞来昔布溶入到10%DMSO中进行灌胃，电针组采用电针足三里、阳陵泉治疗。比较各组大鼠治疗前后痛阈及软骨组织内Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达水平的变化情况。结果模型组、药物组及电针组大鼠造模后痛阈与正常组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。药物组和电针组大鼠处死前痛阈与模型组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。药物组大鼠处死前痛阈与电针组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。模型组、药物组及电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与正常组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。药物组和电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达与模型组比较，差异均具有统计学意义(P＜0.01)。电针组大鼠Ⅰ型胶原蛋白 mRNA 表达与药物组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。结论电针与药物对治疗膝骨关节炎的作用机制可能与抑制Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达有关。
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杜仲总提物对大鼠成骨细胞增殖、分化及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的 观察杜仲总提取物(DZCE)对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖、分化及分泌Ⅰ型胶原能力的影响.方法 体外分离培养大鼠成骨细胞,分为对照组、地塞米松(DEX) 10-8 mol/L组、杜仲总提取物不同剂量组(10 μg/L、1μg/L、0.1μg/L)共5个组,CCK-8(cell counting Kit-8)检测细胞增殖情况.由Piece BCA蛋白分析试剂盒进行蛋白定量,然后由碱性磷酸酶(ALP)活性测定试剂盒检测成骨细胞的分化情况.用In cell western方法测定成骨细胞中Ⅰ型胶原蛋白(Col1 αⅠ)分泌随时间的变化情况.各组干预24h后,实时荧光定量法检测成骨细胞Col1αⅠ mRNA的表达情况.结果 ①杜仲总提取物各剂量均能刺激成骨细胞的细胞增殖(P＜0.01),同时也都能使成骨细胞的分化能力增强(P＜0.05).②药物干预后,Ⅰ型胶原蛋白的分泌随时间的变化情况是第1天的高中剂量,第3天的中低剂量能使成骨细胞的Ⅰ型胶原蛋白表达提高(P＜0.05),第5天、第7天、第9天,各组Ⅰ型胶原蛋白的分泌量均增加,但杜仲总提取物各剂量组与空白组差异无统计学意义(P＞0.05).③PCR检测发现,杜仲总提取物各剂量组的Ⅰ型胶原基因的表达增加,而且这种促进Ⅰ型胶原分泌的能力有量效趋势.结论 杜仲总提取物能显著提高成骨细胞增殖、分化和Col1αⅠ的表达.
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活化型肝星状细胞中miRNA-193下调α-平滑肌肌动蛋白的表达
目的:研究活化型肝星状细胞(HSC)中miRNA-193 (miR-193)下调肝纤维化相关基因的表达.方法:将大鼠miR-193的前体序列(pre-miR-193)克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切和DNA测序鉴定,获得质粒pcDNA3.1-miR-193;通过脂质体转染法将质粒转染到大鼠的活化型肝星状细胞(HSC-T6)中,采用荧光素酶报告基因分析法和免疫印迹检测肝纤维相关基因的表达.结果:构建的真核表达载体pcDNA3.1-miR-193经酶切鉴定及DNA测序显示,目的片段的大小与预期结果一致;荧光素酶报告基因分析法和免疫印迹检测显示,重组质粒转染到活化型HSC-T6中后,肝纤维化相关基因的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达呈明显下降趋势,而胶原蛋白Ⅰ α1和Ⅰ α2的下调作用不明显.结论:miR-193能抑制活化型肝星状细胞中肝纤维化相关基因α-SMA的表达.
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血管紧张素Ⅱ在缺氧诱导的人肺成纤维细胞表型转化及胶原合成中的作用
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)在缺氧诱导的人肺成纤维细胞(human lung fibroblast,HLF)表型转化及胶原合成中的作用. 方法:在缺氧条件下培养HLF-1细胞株,将细胞分为AngⅡ组、AngⅡ+替米沙坦(TST)组和对照组.采用免疫荧光法检测HLF-1细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscleactin,α-SMA)的表达水平;采用Western blot法检测HLF-1细胞Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,Col-Ⅰ)蛋白的表达水平. 结果:AngⅡ组HLF-1细胞α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较对照组明显上调,AngⅡ+TST组α-SMA和Col-Ⅰ蛋白的表达水平较AngⅡ组明显下降. 结论:AngⅡa血管紧张素Ⅱ1型受体信号通路可诱导缺氧性HLF表型转化以及胶原合成.
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干扰素α-2b对人眼Tenon囊成纤维细胞纤维化作用的影响
目的 观察干扰素α-26(IFNα-2b)对人眼Tenon囊成纤维细胞纤维化作用的影响.方法 取青光眼患者滤过术中剪下的Tenon囊组织,在体外进行成纤维细胞原代及传代培养.采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR),研究0、125、250、500和1000 IU/mL浓度的IFNα-26对体外培养的成纤维细胞转化生长因子β(TGF-β1、TGF-β)、I型胶原蛋白、纤维连接蛋白表达的影响,以及IFNα-2b对TGF-β2促纤维化作用的影响.以人甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参照,计算产物/GAPDH像素值.结果 与对照组(TGF-β1:0.50±0.03;TGF-β2;0.53±0.10)相比,250～1000 IU/mL浓度IFNα-2b组均能明显抑制人Tenon囊成纤维细胞TGF-β1(0.45±0.18、0.45±0.13、0.37±0.11,P<0.05、0.05、0.01)和TGF-β2(0.47±0.12、0.48±0.21、0.42±0.14,P<0.01、0.05、0.01)表达.与对照组(I型胶原蛋白:0.68±0.08;纤维连接蛋白:0.72±0.09)相比,125～1000 IU/mL浓度IFNα-2b组均能明显抑制I型胶原蛋白(0.53±0.17、0.54±0.20、0.54±0.18、0.44±0.06,P<0.01)和纤维连接蛋白(0.68±0.14、0.67±0.19、0.64±0.07、0.58±0.ll,P<0.01)表达.在10 μg/L TGF-β2刺激下,与对照组(I型胶原蛋白:1.00±0.06;纤维连接蛋白:0.85±0.16)相比,1 000 IU/mL组IFNα-26能够显著抑制I型胶原蛋白(0.78±0.09,P<0.01)表达;125～1000 IU/mL组IFNα-2b均能显著抑制纤维连接蛋白(0.74±0.22、0.68±0.18、0.68±0.15、0.63±0.10,P<0.01)表达.结论 IFNα-2b能够通过减少TGF-β1、TGF-β2的表达,减少I型胶原蛋白及纤维连接蛋白的表达;还能够拮抗外源性TGF-β2引起的I型胶原蛋白及纤维连接蛋白表达升高.
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壳聚糖及其复合物对小鼠成骨细胞增殖及分化的影响
目的:用含壳聚糖(chitosan,CS)、Ⅰ型胶原蛋白和重组人骨形态发生蛋白2(recombinant human bonemorphogenetic protein-2,rhBMP-2)的培养液体外培养成骨细胞MC3T3-E1,评价3种因素对成骨细胞增殖及分化的影响.方法:实验分为4组,实验组A:CSα-MEM培养基;实验组B:CS+Ⅰ型胶原蛋白溶液的α-MEM培养基;实验组C:CS+Ⅰ型胶原蛋白溶液+rhBMP-2溶液的α-MEM培养基.对照组为含1％FBS的α-MEM培养基.采用MTT法检测加入处理因素后1、3、5、7 d的吸光度(0D)值,并绘制细胞生长曲线,观察成骨细胞的增殖情况.采用碱性磷酸酶活性测定、碱性磷酸酶染色和茜素红钙结节染色观察成骨细胞的分化作用:检测加入处理因素后1、3、5、7d的碱性磷酸酶活性,并在细胞培养的第7天进行碱性磷酸酶染色,第14天进行茜素红钙结节染色.采用SPSS13.0软件包对所得数据进行单因素方差分析,2组之间比较采用Post Hoc检验.结果:MTT检测结果显示,实验组C的OD值高于其他组,实验组C与其他组间的两两比较具有显著差异(P＜0.05).碱性磷酸酶活性测定结果显示,实验组C的活性高于其他组,实验组C与实验组A、对照组间两两比较具有显著差异(P＜0.05),与实验组B两两比较无显著差异(P＞0.05).茜素红染色和碱性磷酸酶染色结果显示,实验组C可见更多的钙盐沉积,且蓝染颗粒多于其他组.结论:壳聚糖、Ⅰ型胶原蛋白和rhBMP-2共同作用,更能促进成骨细胞的增殖与分化.
关键词： 成骨细胞 壳聚糖 Ⅰ型胶原蛋白 重组人骨形态发生蛋白2 -
柚皮苷对人牙周膜细胞功能调节的作用
目的:通过研究中药有效成分柚皮苷对人牙周膜细胞(hPDLCs)增殖、矿化成骨及骨保护素(OPG)表达的影响,探讨柚皮苷对人牙周膜细胞增殖及成骨功能的调节作用.方法:采用酶消化结合组织块法,体外原代培养hPDLCs,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、酶联免疫吸附法和半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,测定不同质量浓度(100、10、1.0、0.1、0.01mg/L)柚皮苷作用后,hPDLCs增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、Ⅰ型胶原蛋白、OPG表达的变化,采用SPSS16.0统计包对数据进行统计学处理.结果:原代培养的hPDLCs形态良好,1.0mg/L浓度组的柚皮苷对hPDLCs增殖、ALP活性和Ⅰ型胶原蛋白表达的促进作用强,此浓度柚皮苷对细胞OPG mRNA的调节作用在测定时段内呈时间依赖性.结论:柚皮苷有促进hPDLCs增殖及向成骨方向转化的作用.
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人唾液腺腺样囊性癌细胞合成Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的研究
目的细胞外基质成分与腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)特殊病理学结构的形成和侵袭等生物学表型关系密切.本研究观察来源于人腺样囊性癌的细胞株ACC2合成细胞外基质成分Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的过程,并探讨其与ACC囊腔形成的关系.方法应用间接免疫荧光组织化学方法观察蛋白质的动态合成过程,并以RT-PCR法检测相应mRNA的表达.结果ACC2有Ⅰ型胶原mRNA表达,免疫荧光观察到Ⅰ型胶原合成和分泌的动态过程.同时在基因和蛋白水平ACC2都无Ⅱ型胶原的合成.结论Ⅰ型胶原是ACC基质的重要成分,与其囊腔形成关系密切.Ⅱ型胶原不参与囊腔的形成.
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极低频电磁场对人胚胎眼巩膜成纤维细胞中ROCK1及COL1A1表达的调控作用
目的 观察极低频电磁场(ELF-EMFs)对人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)中Rho相关的卷曲蛋白激酶1(ROCK1)及Ⅰ型胶原蛋白α1链(COL1A1)表达的影响.方法 HFSFs体外培养和传代后以0.2 mT、50 Hz电磁场辐射24 h(暴露组),设立未行电磁场辐射的HFSFs作为对照组.Real-Time PCR检测ROCK1和COL1A1 mRNA的表达,Western blotting检测ROCK1和COL1A1蛋白的表达.结果 Real-Time PCR检测结果显示:与对照组相比,暴露组HFSFs中ROCK1 mRNA的表达显著上调(t=3.006,P=0.039 7),而COL1A1mRNA的表达显著下调(t=4.225,P=0.013 4).Western blotting检测发现,暴露组HFSFs中ROCK1蛋白的表达升高,COL1A1蛋白的表达降低.结论 ELF-EMFs对HFSFs中ROCK1和COL1A1的表达具有调控作用,并因此使巩膜重塑,进而导致近视的发生和发展.
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高糖对大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响
目的 研究不同浓度的葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞生长及胶原蛋白合成的影响.方法 体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞中加入含不同浓度葡萄糖培养液(30、35、40 mmol/L)培养48 h(高糖1～3组),用MTT法测定细胞生长情况;试剂盒法测定细胞培养液中羟脯氨酸质量-体积浓度;RT-PCR技术检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶(TIMP-2) mRNA的表达.以加入含25 mmol/L葡萄糖培养液的细胞作为正常对照组.结果 随着培养液中葡萄糖浓度的升高,皮肤成纤维细胞的生长明显受抑;培养液中羟脯氨酸的质量-体积浓度明显降低(P<0.01).RT-PCR结果显示,高糖组细胞内Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白及TIMP-2 mRNA表达明显下调,MMP-2 mRNA表达明显上调,与正常对照组比较差异显著(均P<0.05).结论 高浓度葡萄糖对体外培养的大鼠皮肤成纤维细胞的生长有一定的抑制作用,并可能通过抑制Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白、TIMP-2和上调MMP-2的mRNA表达导致皮肤成纤维细胞胶原蛋白的合成减少.
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重组缓释白介素4的克隆表达与鉴定
目的 重组表达可以缓释的抗炎因子白介素4(Interleukin 4,IL-4).方法 根据小鼠IL-4的氨基酸序列,并基于大肠杆菌密码子偏爱性合成IL-4的基因,通过聚合酶链式反应(PCR)方法将胶原蛋白结合域(collagen binding domain,CBD)的编码序列和组氨酸标签序列连接到IL-4基因上,运用无缝克隆技术将上述重组基因插入pET-30a(+)载体.重组蛋白通过组氨酸标签进行纯化,纯化的蛋白被用于诱导M0巨噬细胞分化成M2巨噬细胞,同时检测M2巨噬细胞相关基因表达以及对白介素10(Interleukin 10,IL10)的分泌.与Ⅰ型胶原蛋白的联用验证胶原蛋白对重组因子的吸附和缓释功能.结果 带有CBD序列和组氨酸纯化标签的IL-4通过镍柱纯化,具有与商业化IL-4相似的生物活性.功能实验证实其能够被胶原蛋白吸附,并能脱离胶原蛋白缓释.结论 通过大肠杆菌表达纯化获得了能够缓释的抗炎因子IL-4.
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晚期糖基化终末产物对SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及机制
目的 观察晚期糖基化终末产物(AGEs)对SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,探讨AGEs影响BMSCs成骨分化的机制.方法 (1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,采用贴壁法培养,传至第三代,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定.(2)按处理方法将细胞分为实验组(AGEs组)和对照组(BSA组),分别给予0.2 mg/ml AGEs或牛血清白蛋白(BSA)成骨诱导液干预18 d,然后用茜素红染色,观察比较成骨矿化结节形成情况.(3)将第三代AGEs按处理方法分为正常组、对照组(BSA组)和实验组(AGEs组),正常组细胞不作特殊处理,对照组与实验组分别给予0.2 mg/ml的BSA和0.2 mg/ml的AGEs干预7d,用RNA提取试剂盒提取总RNA,然后用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定成骨细胞分泌的Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)以及Wnt通路相关分子低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP5) mRNA的表达量.结果 (1)细胞从原代传至第三代的过程中,细胞外形由长梭形逐渐变至短棒状,并伸出多个突起,表型鉴定结果:第三代BMSCs特异性表面标志物CD44、CD90的阳性表达率分别为96.07％、99.34％,CD34的阴性表达率为0.19％.(2)与BSA组相比,AGEs组明显减少了矿化结节的形成.(3) Col-Ⅰ mRNA、LRP5 mRNA表达量在AGEs组和BSA组组间比较差异均有统计学意义(F=70.10,P=0.00;F =47.99,P=0.00).结论 AGEs抑制BMSCs的增殖,并阻碍BMSCs向成骨细胞分化,此过程可能是通过干扰Wnt/LRP5/β-catenin通路来进行.
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姜黄素微乳凝胶抗皮肤纤维化作用的实验研究
目的:研究姜黄素微乳凝胶抗皮肤纤维化的作用及机制.方法:小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组、姜黄素凝胶组和姜黄素微乳凝胶低、中、高剂量组,除正常组外其余各组采用博来霉素建立小鼠皮肤纤维化模型.造模成功次日开始,各组分别皮肤给药,正常组、模型组予空白凝胶,阳性药物组予积雪苷软膏,每日给药2次,连续3周.考察对比各组小鼠血清中羟脯氨酸含量、真皮厚度、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和转化生长因子β(TGF-β)的表达差异.结果:模型组小鼠血清羟脯氨酸含量明显高于正常组(P＜0.01),真皮厚度大于正常组(P＜0.01).姜黄素微乳凝胶和姜黄素凝胶均可明显降低博来霉素致皮肤纤维化小鼠血液中羟脯氨酸含量(P＜0.01),减小真皮厚度(P＜0.05,P＜0.01),且微乳凝胶高剂量组改善优于凝胶组,并呈现一定的剂量依赖性.姜黄素微乳凝胶高剂量能明显减轻模型小鼠真皮纤维化程度,减少炎症细胞的浸润,优于姜黄素凝胶组.模型组COLⅠ、MMP-9和TGF-β表达明显高于正常组(P＜0.01),姜黄素微乳凝胶和姜黄素凝胶均能不同程度降低上述指标(P＜0.05,P＜0.01),姜黄素微乳凝胶改善效果优于姜黄素凝胶(P＜0.05,P＜0.01),且呈剂量依赖性.结论:通过改善药物的释药特性,姜黄素微乳凝胶抗皮肤纤维化作用明显优于姜黄素凝胶,为姜黄素进一步的开发及临床应用奠定了基础.
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硬组织矿化中Ⅰ型胶原蛋白作用的研究进展
人体硬组织矿化过程中无机矿物在生物大分子蛋白,多糖等的诱导作用下沉积在胶原纤维中,形成矿化胶原.胶原在生物矿化的不同阶段有十分重要的作用.矿化的类型和程度影响骨和牙本质的质和量进而影响其在生物体内相应的功能.因此,重建矿化胶原的等级机构和深入理解Ⅰ型胶原蛋白在生物矿化中作用可以为揭示生物矿化机理,制备新型骨牙修复材料以及骨组织工程和牙再生研究提供有益的启示.本文就Ⅰ型胶原蛋白在硬组织矿化中作用研究进展作一综述.
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miRNA-29b对与A549细胞共培养的人肺成纤维细胞的抗纤维化作用
目的 探讨miRNA-29b对与A549细胞共培养的人胚肺成纤维细胞(MRC-5)合成Ⅰ型胶原蛋白(Col Ⅰ)的影响.方法 MRC-5与A549细胞跨室共培养,分为空白对照(A)组、TGF-β1刺激(B)组、miRNA-29b阴性对照转染+TGF-β1刺激(C)组、miRNA-29b转染+TGF-β1刺激(D)组和miRNA-29b转染(E)组.采用实时定量PCR法检测各组细胞中Col Ⅰ与miRNA-29b mRNA表达水平;Western blot检测细胞中Col Ⅰ蛋白表达水平.结果 与B组和C组相比,D组中Col Ⅰ表达降低(P＜0.05).结论 miRNA-29b可减少TGF-β1刺激的与A549细胞共培养的MRC-5的ColⅠ表达,对肺纤维化可能有潜在的治疗作用.
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RhBMP-7对兔腱鞘成纤维细胞增殖及α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响
目的:探讨不同浓度重组人骨形态发生蛋白-7(RhBMP-7)对兔腱鞘成纤维细胞增殖及细胞外表型α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白分泌的影响.方法:从新西兰大白兔前肢趾屈肌腱中分离腱鞘成纤维细胞并进行传代培养,取第3代腱鞘成纤维细胞,加入不同浓度(分别为0、10、20、40 ng·ml-1)的RhBMP-7进行实验,在作用不同时间(24、48、72 h)后检测不同浓度RhBMP-7作用下兔腱鞘成纤维细胞增殖情况(CCK-8法)及α-SMA(Western Blot法)、Ⅰ型胶原蛋白(ELISA法)分泌情况.结果:RhBMP-7作用细胞24、48、72 h后,兔腱鞘成纤维细胞均出现增殖;当RhBMP-7浓度为40 ng·ml-1、作用24 h时,细胞增殖出现下降趋势,于48 h时,细胞增殖呈上升趋势.但在各时间段,随着RhBMP-7浓度增加,兔腱鞘成纤维细胞增殖速率降低,具有浓度依赖性.当RhBMP-7浓度为20 ng·ml-1、作用48 h时,兔腱鞘成纤维细胞α-SMA分泌明显减少,与对照组(即RhBMP-7浓度为0 ng·ml-1)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).当RhBMP-7浓度为40 ng·ml-1时,Ⅰ型胶原蛋白分泌明显减少,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:RhBMP-7可抑制兔腱鞘成纤维细胞的增殖及α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的分泌,对预防肌腱损伤后粘连具有重要作用.
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枸杞多糖对博来霉素致肺纤维化小鼠的干预作用及其机制
目的：肺纤维化（pulmonary fibrosis，PF）是一组由多种病因引起的肺间质性病变，其发病机制尚未完全阐明。文中探讨枸杞多糖（ LBP）对博来霉素致肺纤维化小鼠的干预作用及机制。方法将C57／BL6小鼠随机数字表法分为假手术组，模型组，地塞米松组，LBP高、中、低剂量组。假手术组用等渗盐水，其余各组用5 mg／kg博莱霉素注入小鼠气管，制作肺纤维化模型。2 d后开始给药，地塞米松组、LBP高剂量组、LBP中剂量组和LBP低剂量组分别给予地塞米松5 mg／kg、LBP 0．8 g／kg、LBP 0．4 g／kg、LBP 0．2 g／kg，假手术组和模型组给予等容积等渗盐水，1次／d，连续4周。观察各组肺组织病理学变化，计算肺系数，检测肺组织羟脯氨酸（hydroxyproline， HYP）含量，RT-PCR检测肺组织纤维化相关基因COL1A1和α-SMA的表达。结果给药4周后，LBP 高、中、低剂量组小鼠体重较模型组增加明显（P ＜0．01）。高、中剂量组肺系数[（0．847％±0．220％）、（0．859％±0．180％）]较模型组（0．887％±0．130％）明显降低（P＜0．05）。高剂量组肺泡炎等级评分（3．09±0．22）较模型组（3．40±0．23）降低（P＜0．05），PF等级评分（3．07±0．31）较模型组（3．57±0．27）降低（P＜0．01）。高剂量组肺组织HYP含量[（0．786±0．070）μg／mg湿重]较模型组[（0．831±0．050）μg／mg湿重]明显降低（P＜0．05）。与模型组比较，地塞米松组、LBP中剂量组、LBP高剂量组COL1A1表达减少（P＜0．05）；与模型组比较，地塞米松组、LBP中剂量组、LBP高剂量组α-SMA表达减少（P＜0．05）。结论 LBP可能通过抑制COL1A1和α-SMA等基因的表达，降低肺组织HYP的含量来抑制小鼠PF的发展。
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Ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌、食管癌中的表达
[目的]应用荧光差异显示技术筛选胃癌中特异表达的基因,并验证其在胃癌、食管癌中的表达,为进一步了解胃癌、食管癌发生、发展的分子机制提供帮助.[方法]应用荧光差异显示技术(DD-PCR)分析胃癌及其相对应的正常胃黏膜组织,获得差异表达的基因片段,这些片段经过二次PCR再扩增后进行克隆和测序.通过在GenBank中同源性检索,查找与差异片段相对应的同源基因.应用半定量PCR,荧光定量PCR等方法进一步验证该基因在胃癌及食管癌中的表达差异.[结果]通过DD-PCR得到的差异片段中的一个片段对应于人Ⅰ型胶原蛋白基因.该基因的读码框长4 395bp,编码1 464个氨基酸,编码蛋白分子量约139.01kD.该基因在胃癌及食管癌组织中的表达量高于其对应的癌旁组织,并且在食管癌组织中的表达差异较胃癌中更明显.[结论]人Ⅰ型胶原蛋白基因在胃癌及食管癌中均呈高表达,推测其可能在胃癌及食管癌的发生发展中起作用.
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葛根素对极低频电磁场下人胚胎眼巩膜成纤维细胞增殖活性及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响
目的 研究葛根素对极低频电磁场(ELF-EMFs)作用下人胚胎眼巩膜成纤维细胞(HFSFs)增殖活性及Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)表达的影响.方法 实验研究.体外培养HFSFs,根据是否暴露于0.2 mT电磁场分为暴露组和非暴露组,暴露组又分为不同终浓度葛根素组(0.0、0.1、1.0、10.0 μmol/L).MTT比色法检测不同暴露时间(0、12、24、48 h)暴露组和非暴露组HFSFs增殖活性,及各浓度葛根素组HFSFs暴露于0.2 mT电磁场24 h时增殖活性;用Real-time PCR和Western-Blot检测非暴露组和暴露于0.2 mT电磁场24 h时各浓度葛根素组HFSFsmRNA转录水平和COL1A1蛋白表达.2组间比较采用独立样本t检验,各组整体比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用LSD-t检验.结果 暴露组各时间点HFSFs增殖活性差异有统计学意义(F=4.560,P＜0.05),暴露于0.2 mT磁场24 h开始即出现HFSFs增殖受抑(t=5.000,P＜0.01)；与非暴露组相比,暴露组细胞内COL1A1蛋白表达下调(t=7.956,P＜0.01),同时mRNA转录也下调(t=17.364,P＜0.01),而1.0 μmol/L葛根素开始使HFSFs增殖活性增强(P,＜0.01),0.1 μmol/L葛根素即使暴露组HFSFs内COL1A1蛋白(P,＜0.05)和mRNA表达上调(P＜0.05),且浓度越高变化越明显.结论 葛根素可逆向改变ELF-EMFs引起的HFSFs增殖活性下降、细胞内COL1A1 mRNA和蛋白表达下调,可能对巩膜基质重塑具有预防作用.
关键词： 葛根素 极低频电磁场 人胚胎眼巩膜成纤维细胞 Ⅰ型胶原蛋白 巩膜基质重塑
