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枸杞多糖提取技术研究进展
枸杞多糖作为枸杞的主要生物活性成分,具有抗氧化、调节机体免疫力、抗肿瘤、降血脂、降血糖等功效,因此如何提高其得率至关重要.文中对枸杞多糖的提取方法进行了总结,主要包括传统水提法,超声波、微波、生物酶、发酵法辅助提取技术,旨在为枸杞多糖研究与应用提供参考.
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枸杞多糖对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响
目的 研究枸杞多糖(LBP)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响.方法 体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸(LBP)处理后,采用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪分析LBP对PC-3细胞周期和凋亡的影响,TUNEL法观察PC-3细胞凋亡的变化,用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 LBP可明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的生长,并能诱导PC-3细胞凋亡,凋亡率分别为8.5%、17.5%、29.5%、37.5%和41.5%,与对照组比较,差异有非常显著性(P＜0.01);同时PC-3细胞Bcl-2/Bax蛋白比值显著下降,呈明显的剂量-效应关系.结论 LBP对人前列腺癌PC-3细胞DNA具有损伤作用,能诱导PC-3细胞的凋亡,凋节其相关基因的表达.
关键词： 枸杞多糖 人前列腺癌PC-3细胞 细胞凋亡 -
枸杞多糖对染铅小鼠海马nNOS蛋白表达的影响
NO是神经系统的信号分子,近年来研究发现,NO对中枢神经系统既有毒性作用又有保护作用.正常情况下,NO对神经元起保护作用,但如果其生成量不足或过量,就会引起神经毒作用[1].铅可抑制NOS活性及其表达从而扰乱NO代谢[2].本实验就枸杞多糖对染铅小鼠海马区神经元型一氧化氮合酶(nNOS)蛋白表达的影响进行研究,现将结果报道如下:
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枸杞多糖抑制人白血病细胞生长的研究
用体外培养法研究枸杞多糖(LBP-X)对人白血病HL-60细胞生长的抑制作用并探讨其作用机制.结果表明:LBP-X(20、100、500和1000mg/L)与HL-60细胞共培养48h后,LBP-X抑制HL-60细胞增殖呈剂量依赖性关系,且可降低HL-60细胞的膜流动性,HL-60细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳可见明显的“DNA ladder“,TUNEL方法检测呈阳性.这提示诱导HL-60细胞凋亡是LBP-X抗肿瘤的重要机制.
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枸杞多糖对小鼠睾丸细胞DNA损伤的保护作用
目的:研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H2O2)引起的睾丸细胞DNA氧化损伤的保护作用.方法:睾丸细胞先用不同浓度LBP作用1h,再加入100μmol/LH2O2共同培养25min,然后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)测定DNA链断裂情况,分析LBP的抗氧化损伤作用.结果:H2O2作用一定时间后,可引起DNA链断裂.50、100、200、400μg/mL的LBP预处理可使H2O2染毒细胞的拖尾百分率和尾长显著降低.结论:LBP本身没有致氧化损伤作用,它能够清除自由基,对氧化应激所致的睾丸细胞DNA损伤具有抑制作用.
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枸杞多糖-4的组成成分及对断乳幼鼠生长的影响
为初步研究枸杞多糖对幼鼠生长发育以及对金属离子吸收的影响,测定了枸杞多糖-4(LBP-4)的组成成分;将120只3周龄断乳雌性昆明种幼鼠分为4组:对照组及3个实验组[LBP-4摄入量分别为5、10、20mg/(kgd)];每天记录幼鼠进食量,称量体重.21天后测定了小鼠臀部肌肉和后腿骨骼中钙、镁、锌、铁元素的含量.结果表明枸杞多糖-4是一种由6种单糖组成的酸性杂多糖,它可以提高食物转化率和体内锌、铁离子的含量,降低体重.
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枸杞多糖对糖皮质激素性骨质疏松大鼠钙吸收及生化指标的影响
目的 探讨枸杞多糖(LBP)对糖皮质激素致骨质疏松模型大鼠钙吸收及生化指标的影响.方法 8周龄Wistar大鼠50只,按体质量随机分为空白对照组、模型组、构杞多糖高剂量组、枸杞多糖低剂量组、仙灵骨葆胶囊组,每组10只.地塞米松(2.5 mg/kg)肌内注射10周建立糖皮质激素性骨质疏松动物模型.第2周起空白对照组、模型组给予蒸馏水10 ml/kg,枸杞多糖高、低剂量组分别给予2.6、1.3 g/kg枸杞多糖,仙灵骨葆胶囊组给予仙灵骨葆胶囊0.4 g/kg,每天一次,共给药12周,每周测一次体质量.全自动生化分析仪及相应试剂盒检测各组大鼠血清及尿钙、磷,尿肌酐,血碱性磷酸酶(ALP),粪钙含量；双能X射线骨密度仪检测股骨密度.结果 与空白对照组比较,模型组大鼠体重、股骨骨密度、血清Ca含量及ALP活性、Ca吸收率均显著降低(P＜0.01),尿Ca/Cr、尿P/Cr比值、粪Ca排泄量均显著升高(P＜0.01)；与模型组比较,LBP 2.6 g/kg大鼠股骨骨密度、血清Ca含量,LBP 2.6、1.3 g/kg组大鼠血清ALP活性、Ca吸收率均显著升高(P＜0.05);LBP 2.6、1.3 g/kg大鼠尿Ca/Cr、尿P/Cr比值、粪Ca排泄量均显著降低(P＜0.05).结论 枸杞多糖可增加糖皮质激素致骨质疏松模型大鼠骨密度、血清Ca含量、ALP活性及钙吸收率,减少钙排泄,防治糖皮质激素性骨质疏松.
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枸杞多糖对糖尿病大鼠早期肾组织保护作用及机制初探
目的 观察枸杞多糖对糖尿病大鼠早期肾组织保护作用,并对其机制进行初步探索.方法 通过一侧肾脏切除并利用腹腔注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病肾病大鼠模型,以枸杞多糖干预6周.取动物血清测定血清尿素氮、肌酐、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量,处死动物计算肾脏指数,制备肾匀浆以比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性及丙二醛(MDA)含量.结果 枸杞多糖能降低糖尿病大鼠早期肾脏系数和血清尿素氮、肌酐水平,升高血清及肾组织SOD、CAT、GSH-PX活性和降低MDA水平.结论枸杞多糖具有减轻糖尿病大鼠早期肾组织损伤,降低其氧化应激的作用,此作用有助于糖尿病肾病的防治.
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枸杞多糖对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠血脂代谢的影响
目的：观察枸杞多糖对非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）大鼠血脂代谢的影响。方法40只SD大鼠按随机数字表法分为空白组7只，NAFLD模型组33只。空白组喂饲普通饲料，NAFLD模型组喂饲高脂饲料，建立NAFLD模型。造模后8周，将30只造模成功大鼠按随机数字表法分为模型组、治疗组、辛伐他汀组各10只。治疗组灌胃枸杞多糖60 mg/(kg?d)，辛伐他汀组灌胃辛伐他汀溶液5 mg/(kg?d)，空白组与模型组灌胃等体积生理盐水，1 d/次，连续给药8周后取材。检测各组大鼠血清脂联素（ADP）、瘦素（LP）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平；检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、γ-谷氨酰半胱氨酸甘氨酸（GSH）、丙二醛（MDA）水平；观察大鼠肝组织病理学改变。结果给药后，与模型组比较，治疗组大鼠血清 TG[(0.94±0.09)mmol/L 比(1.19±0.13)mmol/L]、TC[(2.15±0.20)mmol/L 比(3.52±0.29)mmol/L]、ALT[(41.75±4.14)U/L 比(55.34±5.38)U/L]、AST[(129.61±12.07)U/L 比(164.96±15.49)U/L]、LP[(235.69±23.52) pg/ml比(284.01±29.43)pg/ml]水平降低，ADP[(35.47±3.09)μg/L比(26.31±2.58)μg/L]水平升高（ P＜0.05或 P＜0.01）；肝组织 SOD[(92.40±8.89)U/mg 比(61.60±5.89)U/mg]、GSH[(22.25±2.21)mg/g 比(15.50±1.36)mg/g]水平升高、MDA[(0.84±0.08)nmol/mg 比(1.07±0.09)nmol/mg]水平下降（P＜0.05或 P＜0.01）；HE 染色结果显示，枸杞多糖可明显改善肝组织细胞损伤。结论枸杞多糖通过调节血脂代谢，抑制脂质过氧化，发挥肝保护作用。
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二次回归通用旋转组合设计法优化枸杞多糖的荧光标记
目的：利用二次通用旋转组合设计试验筛选枸杞多糖荧光标记的优标记条件。方法枸杞多糖与酪胺氨基共价偶联后与异硫氰酸荧光素反应，实现选择性荧光标记。利用二次通用旋转组合设计试验，研究缓冲液pH值、标记时间、温度、酪胺量与标记效率之间的关系，从中筛选出佳的标记条件。结果得回归方程为：Y＝0.08541－0.00282X1－0.01568X2＋0.00811X3＋0.00501X4＋0.00875 X1X2－0.00575X1X3－0.00175X1X4＋0.01063X2X3＋0.000125X2X4＋0.00025X3X4－0.02144X12－0.00889X22－0.001984X32＋0.00366X42，失拟性检验F＝1.76＜F0.05(5,3)＝9.01；显著性检验F＝8.42＞F0.01(11,8)＝5.74，表明二次回归模型有统计学意义。枸杞多糖荧光标记时温度在50℃，pH 值为8.5，反应时间设为4 d时结合效率高。结论在枸杞多糖荧光标记的过程中，在特定的反应温度和缓冲液pH值条件下，适当延长反应时间可提高反应效率。
关键词： 枸杞多糖 异硫氰酸荧光素 酪胺 二次通用旋转组合设计 -
枸杞多糖对新生鼠氯化甲基汞慢暴露染毒致成年期生育能力下降的干预作用
目的：探讨早期低剂量接触氯化甲基汞（ Methyl Mercury Chloride ， MMC）对大鼠生殖功能和生长发育的影响以及枸杞多糖（ Lycium Barbarum Polysaccharides ，LBP）的早期干预。方法：将60只健康7日龄大鼠随机分为对照组（ CON）、MMC组、MMC＋LBP组、LBP组，MMC组和MMC＋LBP组均颈部皮下注射MMC，CON组颈部注射相同剂量的生理盐水， MMC＋LBP组同时喂养LBP，雌雄合笼，自然观察各组体重发育以及生殖繁育能力以及子代仔鼠早期生长发育和存活状况。再将已孕母鼠哺乳期仔鼠染毒，观察母鼠产仔情况。结果：1）MMC组毛色萎缩，精神状态倦怠、动作不活泼、食欲不振。2）MMC组生长较缓慢且随染毒时间的延长而明显。3）MMC组染毒大鼠未产仔，MMC＋LBP组有产仔，但产死率高、出生后存活率低于CON；LBP组产死率较CON低。4）MMC＋LBP组有畸胎，且仔鼠出生体重与正常CON和LBP组仔鼠出生体重有统计学意义（P＜0.01）。5）染毒仔鼠影响其已孕母鼠再次生育。结论：MMC对大鼠有生殖发育毒性，LBP可抑制MMC引起的生殖毒性。
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枸杞多糖联合趋化因子对肝癌小鼠T辅助淋巴细胞分化的影响
目的:探讨枸杞多糖(LBP)及枸杞多糖联合趋化因子(CXCL10)对实验性肝癌荷瘤小鼠辅助性T细胞分化的影响.方法:建立H22肝癌小鼠皮下移植瘤模型,分为模型组、LBP高剂量组(ig 100 mg·kg-1)、LBP低剂量组(ig 50 mg· kg-1)、LBP+ CXCL10组(ig 100 mg·kg-1 +15 μg·kg-1)、CTX组(ip 20 mg· kg-1),另设正常对照组.连续给药2周后小鼠眼球取血,颈椎脱臼处死.分离小鼠肿瘤、脾脏、胸腺,计算肿瘤抑制率、胸腺指数、脾指数,流式细胞术检测小鼠外周血T辅助细胞1/T辅助细胞2(Th1/Th2)分化情况.结果:与模型组相比,LBP低、高剂量组、LBP+ CXCL10组对肿瘤抑制率分别为37.83％,12.50％,14.14％；Th1/Th2分别4.44 ±3.05,2.48±2.93,4.36±1.96,其中LBP低剂量组及LBP+ CXCL10组P＜0.05.结论:低剂量LBP及LBP+ XCL10能显著提高H22肝癌荷瘤小鼠Th1/Th2比率.
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枸杞多糖对大鼠小肠缺血再灌注氧化应激的抑制作用
目的:探讨枸杞多糖对大鼠小肠缺血再灌注氧化损伤的影响.方法:将30只Wistar大鼠随机分为3组(假手术组、模型组、枸杞多糖组),每组10只.枸杞多糖组:枸杞多糖按6 g·kg-1 ig,假手术组和模型组予同体积生理盐水,连续5d后,检测各组大鼠小肠黏膜中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6水平(IL-6),以及小肠黏膜和血液中的抗氧化物酶活力和丙二醛(MDA)的含量.结果:模型组与假手术组比较,大鼠小肠黏膜中TN F-α,IL-6水平明显升高(P＜0.01),小肠黏膜和血液中抗氧化酶活力明显下降(P＜0.01),MDA水平明显升高(P＜0.01)；而枸杞多糖组与模型组比较,大鼠小肠黏膜中TNF-α,IL-6水平明显下降(P＜0.01),抗氧化酶活力明显升高(P＜0.01),MDA水平明显下降(P＜0.01).结论:枸杞多糖对大鼠小肠缺血再灌注氧化损伤有明显的保护作用.
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枸杞多糖抗溃疡活性部位筛选研究
目的:筛选枸杞多糖抗溃疡的活性部位.方法:采用DEAE-纤维素柱层析法将枸杞多糖分成了4个部分(LBP-1,LBP-2,LBP-3,LBP-4),将昆明种小鼠60只按体重性别均衡随机分为6组:模型组,阳性对照组,LBP-1组,LBP-2组,LBP-3组,LBP-4组,采用无水乙醇(10 mL·kg-1)或消炎痛(20 mg·kg-1)溃疡模型对枸杞多糖抗溃疡有效部位进行筛选,给药剂量为阳性对照组100 mg·kg-1,枸杞多糖组250 mg·kg -1,连续给药7d,每日2次.结果:LBP-2和LBP-4能够显著抑制无水乙醇造成的小鼠胃溃疡(P＜0.05),抑制率分别为77.7％,80.1％,LBP-2也能够显著抑制消炎痛造成的小鼠胃溃疡(P＜0.05),抑制率为64.7％.结论:LBP-2和LBP-4为枸杞多糖抗溃疡的活性部位,LBP-2的活性强.
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枸杞多糖对高脂血症大鼠血脂代谢及氧自由基的影响
目的:探讨枸杞多糖(LBP)对高脂血症大鼠血脂代谢及氧自由基的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠60只,按体重随机分为空白对照组、高脂血症模型组、LBP高、中、低剂量组和阳性对照组；除空白对照组,其余各组采用高脂饲料喂养法建立大鼠高脂血症模型；模型建立成功后,空白对照组和模型组ig给予蒸馏水,其余各组分别灌胃给予LBP(80,40,20 mg·kg-1)及辛伐他汀2 mg· kg-1.4周后,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平.结果:与高脂血症模型组比较,LBP各剂量组大鼠血清TC,TG,LDL-C均显著下降(P＜0.05或P＜0.01),而HDL-C则显著升高(P＜0.05)；SOD,GSH-Px活性显著升高(P ＜0.05或P＜0.01),而MDA水平显著下降(P＜0.05或P＜0.01).结论:LBP能调节高脂血症大鼠血脂代谢水平,清除氧自由基,防止脂质过氧化,延缓动脉粥样硬化形成.
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正交试验优选枸杞多糖的超声波降解工艺
目的:优选枸杞多糖的超声波降解工艺.方法:以相对分子质量＜3万的小分子多糖(LBP-s)得率为指标,在单因素试验基础上,通过L9(34)正交试验考察超声频率、超声时间、反应温度对超声波降解工艺的影响.结果:佳超声波降解工艺为超声频率40 kHz,反应温度40℃,超声时间1.5h,LBP-s得率达80.04％.结论:该降解工艺稳定可行,应用前景良好.
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枸杞多糖的神经保护作用机制研究进展
枸杞多糖是从茄科枸杞属植物宁夏枸杞的果实中提取分离得到的多糖类化合物,是枸杞中的主要有效成分之一,具有增强免疫、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、保护视网膜、保护肝脏、保护神经系统、降血糖降血脂等多种药理作用.目前,枸杞多糖在临床上广泛用于多种疾病的治疗,包括肿瘤及免疫类疾病,高血压高血脂,急性肝损伤,脑缺血及脑中风等.尤其对于阿尔茨海默症,脑缺血等神经系统疾病的治疗具有显著的临床疗效,使枸杞多糖在中枢神经系统方面的应用受到越来越多的重视.近年来,有关枸杞多糖保护神经系统的研究成果不断涌现,为了推进枸杞多糖在防治中枢神经系统疾病方面的作用机制研究,本文结合国内外新报道,对近年来枸杞多糖发挥神经保护作用的途径进行系统总结和陈述,主要包括改善神经退行性病变、视神经保护、抑制氧化应激、抑制细胞凋亡、抑制炎症反应、降低谷氨酸毒性作用、抑制神经细胞非正常分化等几个方面.虽然枸杞多糖保护神经系统的作用机制主要涉及以上几种途径,但对于枸杞多糖神经保护作用机制的某些部分研究不够深入,枸杞多糖的神经保护作用机制仍然非常复杂,需从现代分子生物学和基因分析技术入手,为枸杞多糖对神经系统保护作用的深入研究提供依据和思路.
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枸杞多糖对肾血管性高血压大鼠肾功能不全的作用
目的:观察枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP) 对肾血管性高血压大鼠肾功能不全的作用.方法:23只SD大鼠,随机分为高血压组、LBP组和假手术组.用左侧肾动脉缩窄方法制备肾血管性高血压大鼠模型,7周后给造模成功、肾功能明显损害的高血压大鼠以10% LBP(25mg/kg·d)灌胃,连续18d,观察血压、肾脏形态、功能的改变.结果:高血压组大鼠血压明显较假手术组为高.左肾萎缩,右肾稍肥大,肾指数左肾低于右肾.病理学检查见左肾部分肾小球萎缩,肾小囊扩大,部分肾小球肿胀,肾间质水肿,炎性细胞浸润,肾小管上皮细胞明显肿胀.血清肌酐、尿素氮、24h尿蛋白均高于假手术组(P<0.05或P<0.01),尿沉渣中见大量管型、细胞.LBP组大鼠肾形态学改变以肾小球缩小,肾小囊扩大为主,组织水肿和肾小管上皮细胞肿胀不明显;血压、血清肌酐和尿素氮均低于高血压组;24 h尿蛋白和尿沉渣中管型、细胞数较给药前明显减少.结论:枸杞多糖对一侧肾动脉缩窄引起的高血压和肾功能损害有一定改善作用.
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枸杞多糖对培养心肌细胞自由基损伤的超微结构影响
目的：用X-XOD体系在体外诱发培养乳鼠心肌细胞自由基损伤，观察加入枸杞多糖(12.5μg/ml)后心肌细胞超微结构的改变。方法结果：X-XOD体系作用的心肌细胞超微结构明显破坏，加枸杞多糖后则接近正常。结论：枸杞多糖对培养心肌细胞自由基的损伤有保护作用。
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枸杞多糖通过抑制H2O2诱导的INS-1细胞凋亡促进胰岛素分泌
目的:探讨枸杞多糖对H2O2诱导胰岛INS-1细胞凋亡和胰岛素分泌功能的影响.方法:采用H2O2诱导INS-1细胞凋亡模型,用100 mg/L枸杞多糖处理1NS-1细胞,MTT法检测细胞活力,放射免疫法检测胰岛素含量,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA表达.结果100 mg/L枸杞多糖能明显提高H2O2处理INS-1细胞的活力(P＜0.01),促进细胞基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌(P ＜0.05,P＜0.01),减少细胞凋亡(P＜0.01),同时Bcl-2的表达明显升高(P＜0.01),Bax和Caspase-3的表达明显降低(P＜0.01,P＜0.01).结论:枸杞多糖可能通过促进Bcl-2的表达,抑制Bax和Caspase-3的表达,以降低H2O2诱导的INS-1凋亡,同时促进INS-1细胞的胰岛素分泌.
