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黄芪注射液对兔脂肪来源的间充质干细胞体外增殖和细胞周期的影响
目的:观察黄芪注射液对兔脂肪来源的间充质干细胞(ASCs)体外增殖的作用.方法:提取家兔脂肪间充质干细胞,培养后,设实验组和对照组,实验组加入不同质量浓度黄芪注射液,对照组加常规培养液,用流式细胞仪观察细胞周期,用四唑盐(MTT)法测定细胞的增殖率,比较两组的细胞周期和细胞增殖率.结果:培养24 h后,对照组增殖期的细胞占(65.3±4.8)％,黄芪注射液组占(72.6±5.7)％,差异有统计学意义(P＜0.05)；培养48 h后,黄芪注射液0.390 6～200 g·L-1,细胞增殖(吸光度A)为(2.273±0.100)～(1.983 ±0.125),对照组为(1.341 ±0.424),表明实验范围内各浓度黄芪注射液对ASCs均有明显促进增殖的作用,两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:黄芪注射液有明显的促进兔ASCs体外增殖的作用.
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脂肪组织中血管基质部分的促血管化作用及应用进展
20世纪90年代中期以来,脂肪组织已被认为是一个完整的内部器官,在能量调控、炎性反应和免疫应答方面具有特殊的作用.脂肪组织中主要存在两大细胞群,成熟脂肪细胞及血管基质部分( stromal vascular fraction,SVF)[1].SVF被认为是一组混杂的细胞群,其中含有一定数量的脂肪来源间充质干细胞(adipose derived stem cells,ASCs),ASCs具有促血管化、多种分化潜能及免疫调节功能.脂肪组织因其易于获得、储量丰富的特性正逐步成为间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的重要选择和来源.
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脂肪颗粒和基质血管组分的比例对兔移植存活率的影响
目的：比较家兔不同比例的基质血管组分（SVF）和脂肪颗粒的移植存活率。方法：使用15只体重相近的同一品种实验兔。实验中的移植物为脂肪颗粒与SVF按不同比例（1/3、1/4、1/5和1/6）组成的混合物，形成4个实验组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ），而仅有脂肪颗粒的组作为对照组，质量均为0.8g。实验组与对照组被随机植入到家兔两侧背中线皮下，手术后3个月处死动物并收获移植物进行称重，比较各组之间的存活率。结果：实验组Ⅱ（脂肪颗粒与SVF比例为3：1）移植物在所有实验组中质量大，存活率高（87.94±1.30％，P＜0.01或P＜0.05）。结论：移植物的佳脂肪颗粒与SVF比例为3∶1，具有较低的再吸收率。
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脂肪组织和它的前体细胞:以干细胞辅助的脂肪移植方式行软组织填充术
在脂肪组织中存在着组织特有的前体细胞,并能分化演变成各种各样的细胞,这些前体细胞称为"脂肪来源十细胞"(adipose-derived stem cells,ASCs).它在细胞基础疗法中的应用是有广泛价值的.ASCs作为脂肪细胞和血管内皮细胞的前体细胞,存在于脂肪细胞之间或细胞外基质中,特别是血管周嗣,并且有助于脂肪组织的转化过程,该转化过程在人类脂肪组织中是非常缓慢的(2～10年).我们发现,抽出脂肪中的ASCs与切除整块同体积脂肪组织中ASCs相比,仅约有一半的数量.那么,如果在抽出脂肪组织中,组织特有的前体细胞相对缺乏,就可能会导致脂肪组织移植的低成活率和远期萎缩.
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黄芪甲苷对兔脂肪来源的间充质干细胞体外增殖和细胞周期的影响
目的 观察黄芪甲苷对兔脂肪来源的间充质干细胞( ASCs)体外增殖的作用.方法 提取实验家兔ASCs,培养之后,设实验组和对照组,实验组加入不同浓度黄芪甲苷溶液,对照组加常规培养液,用流式细胞仪观察细胞周期,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞的增殖率,比较细胞周期和细胞增殖率.结果 实验组和对照组培养24 h后,实验组增殖期细胞为72.9％,明显高于的对照组的61.2％(P＜0.01);48 h后观察,黄芪甲苷浓度在0.019 5 mg/L时,对ASCs无明显的促进增殖作用(P＞0.05)；而黄芪甲苷浓度在0.039 1～10 mg/L范围时,对ASCs均有明显的促进增殖的作用(P＜0.01).结论 黄芪甲苷对ASCs体外增殖有明显的促进作用.
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脂肪来源的间充质干细胞对颗粒状脂肪组织移植效果的影响
目的 探讨在颗粒脂肪中加入脂肪来源的间充质干细胞(ASCs)后,能取得更好移植效果的可能性.方法 以兔为模型,在一侧腹股沟处取出脂肪组织并剪成颗粒状,分成二等份,每份0.4g;取出另一侧脂肪组织,0.25%胶原蛋白酶消化,过筛离心,收集离心后沉淀物中的组织0.2g,加入其中的一份颗粒脂肪中为实验组,另一份为对照组,两份组织分别植入兔背中线的两侧,3个月后取出称重计算成活率,进行两组之间的比较.结果 颗粒脂肪加入ASCs后,与对照组比较,移植后成活率增多,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ASCs加入颗粒脂肪组织中进行游离移植,可取得更好的移植效果,将成为临床脂肪移植提供一个新方法.
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兔脂肪干细胞的分离培养鉴定及诱导分化研究
目的:分离培养家兔脂肪干细胞(Adipose-derived stem cells,ASCs),观察体外培养生长特性,并在特定条件下诱导分化,探讨其成脂成骨分化能力.方法:无菌条件下切取家兔腹股沟处脂肪组织,0.25％I型胶原酶消化,分离培养原代细胞,取第3代ASCs做实验,用HE染色观察细胞形态,MTT比色法测定细胞生长曲线；用流式细胞仪检测其细胞表面标志物;用油红O染色和茜素红染色鉴定成脂和成骨诱导分化.结果:从家兔脂肪组织中分离获得的ASCs形态为长梭形,成纤维细胞样,生长活力旺盛,具有较强的增殖能力；流式细胞仪分析CD29呈阳性表达,CD31呈阴性表达;成脂诱导的细胞油红O染色阳性,成骨诱导的细胞茜素红染色阳性.结论:本实验分离培养的细胞为ASCs,具有成脂和成骨分化潜能.
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尼古丁对成体干细胞凋亡及增殖的影响
吸烟有害健康已成为全球关注的公共卫生问题.尼古丁是烟草中主要毒性成分之一,其吸入并沉积体内,便会导致多组织、器官的慢性损伤,引发多种疾病.成体干细胞(Adult stem cells,ASCs)是已分化组织中的一种未分化细胞,具有自我更新、免疫调节、多项分化潜能等多种优势,在造血重建、移植免疫、基因治疗、组织器官损伤修复中发挥重要作用.但是对于主动吸烟或被动吸烟患者而言,体内沉积的尼古丁将影响ASCs的活性,局限其临床应用.探讨尼古丁对ASCs的增殖、凋亡、分化、黏附等影响及其作用机制,为ASCs治疗吸烟所致相关性疾病提供理论依据.本文就尼古丁对ASCs增殖、凋亡等影响及相关机制作一综述.
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干细胞移植临床应用研究进展
干细胞(stem cells,SCs)通常是指具有通过复制和向特异细胞系分化而具有自我更新能力的细胞.干细胞按分化能力可分为几群.一类细胞由受精卵子代细胞进化为8分化桑葚胚而来,能分化为各种器官组织细胞,被称为"全能"干细胞;如胚胎干细胞(ESCs)可生成所有胚层的细胞,包括内胚层、中胚层和外胚层的细胞;后天诱导产生的成体干细胞(adult stem cells,ASCs)就只能生成有限亚群的细胞.另一种分类方法是基于来源细胞所处的进化阶段分类,源于胚胎的胚胎干细胞和后天诱导产生的ASCs.
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脂肪来源干细胞的基础研究进展
2001年,ZuK等[1]研究发现并证实,抽脂术获得的脂肪组织中存在一群具有多向分化潜能的细胞,被称为脂肪来源干细胞(Adipose-Derived Stromal/Stem Cells,ASCs).从此以后,ASCs开始逐渐被人们认识.ASCs取材容易、来源丰富,与骨髓间充质干细胞(Bone marrow derived stromal/stem cells,BMSCs)一样具有自我更新能力、活力持久及多向分化潜能等干细胞特征,并且具有稳定生长和增殖、促进组织修复的能力.
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脂肪来源干细胞在小鼠放射性损伤涎腺组织中归巢的实验研究
目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)在C57小鼠放射性损伤涎腺组织中的归巢现象.方法:体外培养C57小鼠ASCs；建立C57小鼠涎腺放射损伤模型；荧光染料DiI标记的普通C57小鼠ASCs及GFP转基因C57小鼠ASCs、分别以每次2×105/ml从尾静脉注射至涎腺放射损伤模型小鼠体内,注射3次,间隔6h,末次注射24 h后处死小鼠,将下颌下腺制作成冷冻切片,荧光显微镜观察.结果:建立了C57小鼠ASCs细胞系及小鼠放射性涎腺损伤动物模型.尾静脉注射ASCs后在小鼠放射性损伤涎腺组织中观察到标记细胞.结论:ASCs能够归巢到小鼠放射性损伤涎腺组织中.
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大鼠脂肪干细胞体外培养及成骨诱导分化研究
目的:观察SD大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)体外培养的基本生物学特性、鉴定其诱导成骨分化潜能.方法:无菌条件下取6周龄SD大鼠腹股沟处脂肪组织,0.1％Ⅰ型胶原酶消化,分离培养.显微镜下观察细胞形态；采用MTT比色法绘制细胞生长曲线；用流式细胞仪检测细胞表面标志物；取第3代细胞行成骨和成脂诱导培养,分别用碱性磷酸酶(ALP)、茜素红染色和油红O染色鉴定成骨诱导效果.结果:从SD大鼠脂肪组织中分离获得的ASCs呈长梭形或多角形,呈集落生长；细胞生长曲线呈“S”型,具有较强的增殖能力；流式细胞仪分析示:CD29、CD90高表达,CD34、CD45低表达；成骨诱导后ALP染色及茜素红染色阳性,成脂诱导后油红O染色阳性.结论:分离培养的细胞为ASCs,具有成骨潜能.
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2型糖尿病大鼠脂肪干细胞体外成骨能力的研究
目的：比较2型糖尿病（T2MD）大鼠和正常SD大鼠脂肪来源干细胞（ASCs）的增殖及多向分化能力。方法：取16只SPF级8周龄SD大鼠，随机分为两组（n＝8）：糖尿病组，采用高脂高糖饲料构建T2DM大鼠模型；对照组常规饲料喂养，比较两组大鼠的血糖水平。建模成功8周后，分别培养两组大鼠腹股沟处的ASCs，显微镜下观察细胞形态；CCk－8法检测细胞增殖；流式细胞仪检测细胞表面标志物；取第3代细胞行成骨和成脂诱导实验，实时定量PCR检测成骨诱导7 d时成骨相关基因的表达。结果：两组大鼠脂肪组织均可分离获得ASCs，且细胞形态和增殖能力无显著差异（P＞0．05）；两组细胞均高表达CD44和CD90，低表达CD34和CD45；T2DM大鼠P3代ASCs成脂诱导后油红O染色较正常组强，而成骨诱导后碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色较正常组弱；ALP蛋白活性检测较正常组低；ALP、OCN、OPG和RUNX2等成骨相关基因的表达水平较正常组低。结论：T2DM大鼠ASCs体外成骨分化能力较弱。
