APP、Fis1、KLRF1和PDCD7基因在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的 探讨淀粉样前体蛋白(APP)、裂殖1同源物(Fis1)、杀伤细胞凝集素样受体亚家族F成员1(KLRF1)和细胞程序性死亡7(PDCD7)mRNA在急性髓系白血病(AML)细胞中的表达及其预后意义.方法 抽取34例AML及10例非恶性血液病患者骨髓.提取总RNA并逆转录成cDNA,SYBR Green I实时定量PCR法检测各基因mRNA表达水 平,采用2-~(△Cr)公式计算基因mRNA相对表达量.结果 AML患者组PDCD7mRNA表达水平均显著高于对照组(Z=-2.213,P=0.027).除M1(1例)、M2a(2例)外的AML各亚型基因表达同对照组比较,APPmRNA在伴有t(8,21)染色体异常的M2表达显著高于对照组(Z=-2.197,P=0.028),而在M4b和M5b中的表达则显著低于对照组(Z=-2.368,P=0.018).APP mRNA在AML亚型间表达有差异,M2显著高于M4和M5(Z=-2.430,P=0.015;Z=-3.175,P=0.001).结论 AML患者高表达PDCD7基因,单核细胞白血病患者低表达APP基因.

丝裂原活化蛋白激酶家族在Swedish 突变的淀粉样前体蛋白转基因鼠脑缺血中的作用

[目的] 探讨丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPK)在Swedish 突变的淀粉样前体蛋白(APP/SWE)转基因鼠脑缺血中的作用.[方法] APP/SWE 转基因鼠与非转基因鼠各12 只应用光化学法诱导脑梗塞形成,缺血7 d后其中6只以尼氏染色对缺血半暗带区存活神经元进行定量分析,6只以Western blot方法检测p38MAPK和JNK的活性. [结果] 缺血7 d后,非转基因鼠组缺血半球海马区缺血半暗带存活神经元数目与非缺血半球镜像部位神经元数目的比值(78.3 ± 1.3)%与APP/SWE转基因鼠组(70.5 ± 1.4)%有统计学差异(P ＜ 0.05);APP/SWE转基因鼠组缺血半球p38MAPK和JNK活性与非缺血半球有统计学差异(P ＜ 0.05),而非转基因鼠组缺血半球p38MAPK和JNK活性与非缺血半球差异无统计学意义(P ＞ 0.05).[结论] APP/SWE转基因鼠组缺血后脑损伤显著重于非转基因鼠组,可能的机制与丝裂原活化蛋白激酶过度激活促进脑缺血后细胞凋亡过程有关.

淀粉样前体蛋白基因在急性髓系白血病中的表达及其意义

目的:探讨淀粉样前体蛋白(APP)基因在急性髓系白血病(AML)中的表达及其临床意义.方法:应用定量PCR方法(2-ΔCT)检测85例AML和20例非恶性血液病患者骨髓细胞APP mRNA表达,并研究其表达水平对AML临床特征、治疗反应的影响.结果:APP mRNA表达在AML亚型间差异有显著性(P=0.019),M2b(伴8和21号染色体异位的M2)表达高,M5b表达低.AML亚型间两两比较分析显示,M2b的APP mRNA表达显著高于M5b(P=0.000),余各两组间均无统计学差异.APP mRNA表达水平对AML亚型以外的临床特征及治疗反应无显著影响.结论:伴t (8;21)的M2型白血病高表达APP mRNA,单核细胞白血病低表达APP mRNA.

淀粉样前体蛋白转基因鼠对β-淀粉样蛋白的免疫活性降低:与早老性痴呆致病机制和治疗的关系

APP代谢通路关键基因在非洲爪蛙早期胚胎中的时空表达

目的:Aβ的沉积是形成老年斑的主要原因,同时是阿尔茨海默病的主要病理标志物.Aβ形成来源于该病的主要致病基因淀粉样前体蛋白APP(Amyloid beta precursor protein;XB-GENE-479158;NCBI:XI.8671),APP在非洲爪蛙早期胚胎时空表达图式目前还不清楚,之前的报道只在某些手术分离的组织中用RT-PCR的方法进行了研究,为进一步在爪蛙中研究这类基因在发育过程中的时空表达及可能的功能,展开了本研究.方法:本研究收集了第2期到第4期非洲爪蛙胚胎包括(卵裂期、囊胚期、原肠胚期、神经轴胚、尾牙期和蝌蚪期),通过整体胚胎原位杂交和半定量RT-PCR检测基因APP在胚胎发育不同时期的时空表达,用双荧光素酶报告基因系统检测APP启动子活性.结果:APP有2种主要的转录产物,短的693～694个氨基酸,长的有750～751个氨基酸,主要差别来自外显子7的可变剪切.其中短的剪切体是主要转录的产物,而长的一个剪切体则表现为持续的低表达.整胚的原位表达结果显示:在神经板阶段,APP主表达在孵化和黏液腺中.神经管闭合后,APP转录水平升高,在体细胞中胚层,前肾和背侧神经管中呈现高表达.在尾芽末期,APP在晶状体、端脑、松果体、间脑和背侧耳泡中表达.在蝌蚪期,APP主要在包括胰腺、胃和十二指肠在内的消化系统中高表达.结论:APP是一个母源性表达的基因,其时空表达分布的特异性预示其在相关部位发育过程中可能发挥重要作用,从而为研究阿尔茨海默病的关键致病基因在胚胎早期的所发挥的作用提供了新的路径.

超表达SorLA对阿尔茨海默病β淀粉样蛋白的影响

目的:探讨超表达SorLA对引发阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的β淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)的影响,以揭示SorLA表达与Aβ之间的作用关系.方法:采用Western blot测定脑组织中SorLA蛋白的表达分布,SorLA cDNA转染人胚胎肾细胞(HEK-293),以梯度浓度G418筛选SorLA cDNA细胞,采用Western blot测定转染后淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)表达水平,采用ELISA测定Aβ表达水平.结果:(1)超表达SorLA转染组细胞提取物中的APP表达水平降低；(2)超表达SorLA转染组中Aβ表达水平降低(21.6±12.1)％(P＜0.01).结论:SorLA显著影响引发AD的Aβ表达水平,且两者呈负相关.

硫化氢与阿尔茨海默病的研究进展

硫化氢（Hydrogen sulfide ，H2 S）是继NO和CO之后发现的又一新型气体信号分子［1］。近20年的研究已揭示，H2 S在中枢神经系统中具有重要的生理功能，如保护神经细胞及组织免受β淀粉样蛋白（Aβ）、脂多糖、同型半胱氨酸等引起的炎症、细胞凋亡和氧化应激损伤等，H2 S起着重要的神经调质和神经保护作用。离体和在体实验显示，H2 S水平降低导致多种代谢通路功能紊乱和细胞损害等组织病理学改变，补充外源性 H2 S 后其病理学改变及临床表现均获得明显改善，说明H2 S可能参与了神经变性疾病的发病过程。临床试验中发现，在阿尔茨海默病（AD ）和一些神经系统变性疾病患者体内H2 S的水平明显下降，且其水平的改变与疾病的严重程度相关［2］。本文就H2 S与AD的研究进展做一综述。

神经细胞牵张损伤后CsA对CaN活性和APP表达的影响

目的 研究神经细胞牵张损伤后环孢霉素A (cyclosporin A, CsA)对钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN)活性和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)表达的影响.方法 在Bioflex培养皿原代培养大鼠大脑皮层神经元.细胞分为正常对照组、损伤组和CsA组.多功能小型生物撞击机25 kPa的压力牵张细胞.损伤后损伤组不予以处理,而CsA组则给以10 nM CsA. 各组伤后1、6、24h,3d标本的CaN活性和APP蛋白表达,分别采用酶底物显色和Western blot方法进行检测.结果 牵张损伤后1h神经元的CaN活性已较正常对照组显著增加(P＜0.05),伤后6h更为明显(P＜0.01),并持续到伤后3d(P＜0.01);而伤后10nM CsA干预能在各时相点非常显著地降低CaN的活性(P＜0.01).APP伤后1h有增加趋势,但在伤后6h差异才具有统计学意义(P＜0.05),伤后24h、3d这种增加则更加明显(P＜0.01).伤后10nM CsA干预能在6、24h,3d显著地降低APP的表达增加(P＜0.05),其APP的表达仍显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 CsA能降低神经细胞牵张损伤后CaN活性的增加并减少APP表达的增加,可能起到神经保护作用.

红花黄色素对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用研究

目的:探讨红花黄色素对Aβ1-42诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及其机制.方法:采用Aβ1-42损伤SH-SY5Y细胞模拟体外AD,不同浓度(0.01、0.1、1g/l)红花黄色素进行干预.倒置显微镜下观察细胞形态;MTT法测定细胞存活率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞内Aβ1-42水平;Western Blot检测SH-SY5Y细胞内APP、BACE-1、SAPPα、NEP、IDE、ERK和P-ERK蛋白表达水平.结果:红花黄色素各剂量均能够减少Aβ1-42引起的SH-SY5Y细胞的损伤,使细胞的存活率显著提高,且具有剂量依赖性;ELISA结果显示,红花黄色素0.1、1g/L可降低SH-SY5Y细胞内的Aβ1-42水平;Western Blot结果显示红花黄色素各剂量均可以上调SAPPα、NEP、IDE和P-ERK蛋白的表达,下调APP和BACE-1蛋白的表达.结论:红花黄色素可以通过调节Aβ1-42相关代谢酶而减少Aβ1-42的含量,发挥抗AD作用,该作用可能与MAPK/ERK通路的激活有关.

早老性痴呆病-淀粉样蛋白Aβ研究进展

早老性痴呆病因世界人口的老龄化而逐渐成为人们研究的热点.β样淀粉蛋白(Aβ)在神经系统中的过量沉积是老年痴呆病人的显著特征,本文简单综述了Aβ的形成途径及影响因素,重点对目前世界范围内老年痴呆病的成因及治疗研究进展进行了介绍.

洛伐他汀对抗人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞β-淀粉样蛋白的非胆固醇依赖性保护作用

目的:观察洛伐他汀对过表达APP670/671的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞活性及β-淀粉样蛋白(Aβ)二聚体合成的影响.方法:转染并鉴定过表达APP670/671的SH-SY5Y细胞,筛选无细胞毒性、不影响细胞胆固醇水平浓度的洛伐他汀处理SH-SY5Y细胞24h,采用CCK-8试验检测细胞的存活率,蛋白印迹法检测Aβ二聚体的蛋白表达水平.结果:过表达APP670/671的SH-SY5Y细胞中APP的蛋白及mRNA表达水平均明显高于野生型细胞;用0.1 μmol/L的洛伐他汀处理SH-SY5Y细胞,未见明显细胞毒性作用,胆固醇水平亦未见明显改变;0.1 μmol/L洛伐他汀预处理SH-SY5Y细胞24h,能提高细胞存活率,减少Aβ二聚体的分泌.结论:洛伐他汀具有神经保护作用,可能与减少毒性Aβ3的合成有关.

淫羊藿苷对SAMP8小鼠皮层β淀粉样蛋白代谢途径相关蛋白的影响

目的 观察淫羊藿苷(ICA)对SAMP8小鼠皮层β淀粉样蛋白代谢途径中Aβ、APP及BACE1、PS1蛋白的影响.方法 8月龄雄性SAMP8小鼠随机分为模型、ICA低剂量组(20 mg/kg)、ICA中剂量组(40 mg/kg)、ICA高剂量组(80 mg/kg),同月龄雄性SAMR1小鼠作为空白对照组,每组12只,5月龄开始灌胃,1次/d,连续给药3个月,模型SAMP8组和正常对照SAMR1组给予同等体积的蒸馏水.HE和尼氏染色观察皮层神经元形态学变化,Western blot检测各组小鼠皮层Aβ1 42、APP、PS1、BACE1蛋白水平.结果 与同月龄的SAMR1小鼠相比,8月龄的SAMP8小鼠皮层正常神经元数量减少;Western blot检测到Aβ1-42、PS1蛋白在8月龄的SAMP8小鼠皮层中表达升高(P＜0.05),APP、BACE1蛋白表达上升无明显差异,给予ICA后4种蛋白水平均降低.结论 淫羊藿苷能够减轻神经元损伤,降低皮层Aβ1-42、APP、PS1、BACE1蛋白表达.

淫羊藿苷对Tg2576小鼠学习记忆功能及海马神经细胞再生的影响

目的 观察淫羊藿苷对Tg2576小鼠学习记忆功能及海马齿状回神经细胞再生的作用.方法 Tg2576转基因小鼠及野生型小鼠分为4个组:野生型对照组、野生型+淫羊藿苷组、Tg2576对照组和Tg2576+淫羊藿苷组.给药组灌胃淫羊藿苷60 mg/kg/d,对照组灌胃同体积蒸馏水,每天1次,连续3个月.Morris水迷宫检测动物行为学改变;硫黄素S染色检测海马组织内老年斑;免疫组织化学法检测海马齿状回BrdU+细胞;Western blot检测海马组织淀粉样前体蛋白(APP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白表达.结果 淫羊藿苷明显缩短Tg2576小鼠水迷宫逃避潜伏期和搜索距离;明显减少海马组织内的老年斑;增多海马齿状回BrdU+细胞数量;降低海马组织APP高表达和改善BDNF低表达状态.而野生型小鼠给予淫羊藿苷3个月后,上述指标没有显著变化.结论 淫羊藿苷改善Tg2576小鼠空间学习记忆功能,并促进海马齿状回神经细胞再生.

淀粉样前体蛋白在神经发生中的作用与阿尔茨海默病关系的研究进展

阿尔茨海默病,俗称老年痴呆,由德国外科医生Alzheimer首次发现,是一种进行性发展、致死性神经系统退行性疾病.该病是目前常见的一种失智症(俗称痴呆症,Dementia),但这种失智不同于正常老化.迄今为止AD具体的发病机制仍未明确、也没有精准的早期筛查和诊断手段及有效控制病情的治疗方法.近年来大量研究证实成年哺乳动物的中枢神经系统终身存在着神经发生.这为脑损伤和神经系统变性疾病的治疗带来了希望.文章将对成年中枢神经系统神经发生的过程及参与AD病程的关键分子APP在神经发生方面的新发现进行综述,以期为本领域或相关研究提供借鉴或参考.

视神经损伤后JNK3、APP蛋白的表达变化对视网膜神经节细胞存活的影响

目的 探讨视神经损伤后小鼠视网膜神经节细胞(RGCs)中JNK3、APP蛋白的表达变化及其对RGCs存活的影响.方法 取成年APP野生型小鼠,采用钳夹法建立视神经损伤模型,应用免疫组织化学、Western blot法检测造模后视网膜神经节细胞中JNK3、APP蛋白的定位和定量表达变化,比较损伤7 d后APP基因敲除组及其同窝野生型小鼠RGCs的存活数变化.结果 视神经损伤后,视网膜神经节细胞中JNK3定位于细胞浆,p-JNK则从细胞浆进入到细胞核中表达,APP定位于细胞膜、p-APP在轴突及细胞浆中均表达.同时, Western结果表明上述4种蛋白表达量在损伤1 d组比假手术组均升高(P＜0.01).与APP野生型小鼠视网膜神经节细胞存活数(127.7±7.0)相比,APP基因敲除组小鼠视网膜神经节细胞存活数(147±7.0)明显增多(P＜0.05).结论 视神经损伤后,JNK3、APP蛋白的表达增多在视网膜神经节细胞的存活中发挥了一定的作用.

孤独症谱系障碍儿童外周血淀粉酶样前体蛋白及脑源性生长因子的特异性研究

目的 研究外周血淀粉酶样前体蛋白(APP)家族、脑源性生长因子(BDNF)在儿童孤独症谱系障碍(ASD)外周血中表达的特异性,探索疾病早期筛查的生物学标记物.方法 采用酶联免疫吸附实验检测2013年1月-2016年12月间就诊的103例ASD儿童血浆总sAPP,sAPP-α,sAPP-β和BDNF水平,并与78例正常健康儿童、25例儿童注意缺陷多动障碍(ADHD)及25例智力障碍(ID)患儿的相关指标进行比较.结果 sAPP和sAPP-α在ASD、ID、ADHD及正常对照组间差异具有统计学意义(Z=86.17、39.01,P均＜0.001);sAPP-β和BDNF的表达差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 外周血APP表达水平在ASD儿童中具有特异性,可以作为疾病筛查的实验室指标.

淀粉样前体蛋白β位点单链抗体抑制β淀粉样肽的分泌

目的 观察淀粉样前体蛋白(APP) β位点单链抗体(scFv)对APP的α和β代谢的影响,为其作为APPβ分泌酶特异抑制剂奠定基础.方法 以APP β位点scFv 2H10基因序列为模板,通过PCR引入Igκ轻链信号序列和myc标签,与真核表达载体pcDNA3.1hyg(+)相连,转染过表达人瑞典突变型淀粉样前体蛋白695(APP695)的CHO细胞株(APP695 sw/CHO),经潮霉素B筛选出稳定转染细胞株,用夹心ELISA检测稳定转染细胞株培养上清中Aβ40和分泌型APPα(sAPPα)的含量,并分别比较两者的变化.结果 经PCR、酶切和测序鉴定证明,获得引入Igκ分泌信号和myc标签的APP β位点scFv基因片段,且与真核表达载体正确相连.转染APP695 sw/CHO细胞后,经潮霉素B筛选得到稳定转染株;Western blot法可检测到目的蛋白表达,ELISA结果显示,与对照相比,稳定转染细胞培养上清Aβ40分泌量约下降30.4％、sAPPα水平上升23.1％.结论 APP β位点scFv在抑制Aβ分泌的同时还可能有利于APP的α代谢,可作为β分泌酶高特异性抑制剂.

橄榄油改善淀粉样前体蛋白/早老素双转基因B6C3-Tg鼠认知功能的作用及机制

目的:探讨橄榄油改善淀粉样前体蛋白/早老素双转基因B6C3-Tg鼠(APP/PS1鼠)认知功能的作用及机制.方法:将16只5月龄B6C3-Tg小鼠和4只同月龄野生型小鼠分为5组:正常对照组,阳性对照组,橄榄油组,脱脂橄榄油组和β谷固醇(BS)组.正常对照组和阳性对照组小鼠用生理盐水灌胃;橄榄油组、脱脂橄榄油组和BS组小鼠则分别用橄榄油、脱脂橄榄油和BS溶液灌胃.3周后用水迷宫检测小鼠认知功能;高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织细胞膜内BS含量;ELISA法检测脑内淀粉样前体蛋白(APP)代谢产物(sAPPα和Aβ)水平;免疫组化法检测脑内Aβ沉淀情况.结果:定位航行实验显示:与正常对照小鼠相比,阳性对照组和脱脂橄榄油组小鼠的逃避潜伏期显著延长(P＜0.01);而橄榄油组和BS组小鼠的逃避潜伏期与正常对照小鼠无明显差异.空间探索实验显示:阳性对照组和脱脂橄榄油组小鼠在目标象限的游泳距离占总的游泳距离的比例低于正常对照小鼠(P＜0.01);而橄榄油组和BS组小鼠在目标象限的游泳距离占总的游泳距离的比例与正常对照小鼠无明显差异.HPLC分析显示,仅在橄榄油组和BS组小鼠的脑组织细胞膜内可检测到BS.ELISA和免疫组化结果显示:与正常对照小鼠相比,阳性对照和脱脂橄榄油组小鼠脑内Aβ生成增加(P＜0.01),而sAPPα含量则无明显改变.橄榄油组和BS组小鼠脑内sAPPα含量与正常对照组小鼠相比有所增加(P＜0.01),但Aβ的表达较阳性对照小鼠明显减少了(P＜0.01).结论:橄榄油可改善APP/PS1鼠的认知功能,其机制可能与BS在脑内的聚集以及BS对脑组织APP代谢的调节作用有关.

STZ单次侧脑室注射诱导的大鼠AD空间认知能力损伤与早期病理改变

目的:探索链脲霉素(STZ)单次侧脑室注射诱导的大鼠AD样空间认知能力损伤与早期病理改变.方法:SD大鼠侧脑室单次注射STZ(3 mg/kg),恢复2周后利用Morris水迷宫测定其空间学习、记忆能力,用免疫组织化学研究其β淀粉样蛋白(Aβ)和tau蛋白的磷酸化水平;用Western Blot测定淀粉样前体蛋白(APP)的表达.结果:单次STZ侧脑室注射可诱导大鼠学习、记忆能力损伤,tau蛋白异常磷酸化;但未能诱导Aβ的异常聚集及其前体蛋白APP的异常表达.结论:结果提示,脑内胰岛素信号异常的状态可能诱导动物空间认知功能的损害和及脑内tau蛋白的异常磷酸化.

雌激素减少去卵巢兔高胆固醇诱导的淀粉样前体蛋白信使RNA过表达并抑制前额叶皮层Aβ表达

长期以来循环胆固醇增高被认为与冠心病相关,现在认为与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)也有关联.雌激素是一种神经保护剂,为了证明胆固醇促进APP mRNA表达和雌激素的抑制作用及其与AD的关系,我们测定了接受胆同醇和/或雌激素兔血清脂质,显示了其APP mRNA和AB表达.与先前撤道相似,胆固醇饮食增高血清TC,TG,LDD-C和HDL-C.雌激素可逆转胆固醇饮食诱导的血清TC,TG和LDL-C增高,但降HDL-C作用不明显.高肌固醇饮食去卵巢兔APPmRNA过度表达.高胆固醉饮食同时补充雌激素去卵巢兔与正常兔间无显著差异.高胆固醇玄卵巢兔Aβ刚果红染色阳性.我们的结果提示,补克雌激素降低胆固醇可能有效地预防AD.