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联合应用神经保护剂对大鼠局灶性脑缺血后bcl-2表达的影响
目的探讨不同类型神经保护剂联合应用是否较单一神经保护剂对局灶性脑缺血有更好的保护作用.方法采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型(MCAO),并分为1,6-二磷酸果糖(FDP)组、MK-801组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、联合治疗组和对照组,应用western印记技术观察缺血后6和24 h抗凋亡蛋白bcl-2表达的变化.结果缺血后6 h和24 h,联合治疗组bcl-2表达明显增加,与单一用药各组相比有显著性差异.结论神经保护剂联合应用对大鼠脑组织缺血的保护作用较单一用药各组明显增强.
关键词： 脑缺血 神经保护药 原癌基因蛋白质c-bcl-2 -
caspase-3、bcl-2蛋白在非霍奇金淋巴瘤组织的表达及其与细胞凋亡和增殖的关系
目的探讨caspase-3、bcl-2蛋白在非霍奇金淋巴瘤(NHL)发生、发展中的可能作用及相互关系.方法应用TdT介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术和免疫组织化学链霉素抗生物素-过氧化酶(SP)法,检测5例反应性增生淋巴组织和119例NHL组织中的细胞凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)、caspase-3、bcl-2蛋白的表达水平.结果 caspase-3和bcl-2在119例NHL中表达的阳性率分别为86.6%(103例)和53.8%(64例).二者在良、恶性淋巴组织中的表达方式相反:在反应性增生淋巴滤泡中心caspase-3高表达而bcl-2阴性表达,滤泡套区caspase-3阴性表达而bcl-2高表达;在肿瘤性滤泡中心bcl-2常高表达而caspase-3常表达减弱或不表达;在NHL中二者的表达与肿瘤恶性度呈相反关系,高度恶性组中caspase-3的表达(44.4%)高于低度恶性组(23.7%,P<0.01),而B细胞性淋巴瘤中bcl-2的表达(42.6%)低于低度恶性组(75.5%,P<0.01);caspase-3的表达与凋亡指数呈正相关(r=0.512, P <0.01)),bcl-2的表达与凋亡指数呈负相关(r=-0.436, P<0.01).此外,NHL的凋亡指数与增殖指数呈显著正相关(r=0.710, P<0.01).结论 caspase-3可能参与了NHL的凋亡调节机制.caspase-3和bcl-2蛋白在良、恶性淋巴组织中常呈现相反的表达方式,提示二者在淋巴细胞增殖动力学调节中可能存在着密切联系.
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细胞周期蛋白D1、Ki-67和bcl-2的表达与CD117阳性的胃肠道间质瘤生物学行为的关系
目的检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Ki-67和bcl-2在胃肠道间质瘤(GIST)中的表达,探讨它们在GIST发生、发展中的作用及临床病理意义.方法 59例手术切除GIST标本进行CD117、CD34、平滑肌肌动蛋白(SMA)、结蛋白、S-100、cyclin D1、bcl-2和Ki-67免疫组织化学染色,同时进行病理形态学观察包括形态学类型、肿瘤大小、坏死和核分裂象.所有病例随访2～9年.所有数据进行单因素、多因素和相关分析.结果随访40例患者一直健在,15例患者死于GIST,4例患者死于其他原因.统计学分析显示肿瘤直径>5 cm、有坏死、核分裂象在每50个高倍视野>5个、Ki-67增殖指数(LI)>5%、cyclin D1和bcl-2免疫组织化学染色强阳性都可以作GIST患者手术后的预测指标,且具有统计学意义;核分裂象和Ki-67增殖指数是独立的预测指标;Ki-67 LI≥5%和核分裂象≥5/50 HPF呈正相关(r=0.532,P<0.01 );cyclin D1与bcl-2强阳性表达呈正相关(r=0.273,P<0.05).结论肿瘤大小、坏死、核分裂象、cyclin D1、Ki-67增殖指数和bcl-2可作为GIST患者临床预测指标;核分裂象和Ki-67增殖指数可作为独立的预测指标;cyclin D1 与bcl-2呈明显相关性, Ki-67免疫组织化学染色可以代替核分裂象作为一项很有用的预测指标.
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大鼠实验性心肌缺血后Fas、bcl-2的表达与心肌细胞凋亡的关系
目的探索心肌缺血后Fas、bcl-2的表达与心肌细胞凋亡的关系.方法结扎大鼠左侧冠状动脉造成心肌缺血,10 min～7 d后取心脏标本做末端脱氧核酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)原位细胞凋亡染色、Fas、bcl-2蛋白的免疫组织化学抗生物素蛋白-生物素复合物法(ABC法)染色.结果在时间上,心肌细胞凋亡从缺血后3 h开始,36 h仍较显著,7 d时TUNEL法检测不到凋亡细胞;而bcl-2、Fas分别于缺血后10 min和3 h开始检出,持续到缺血后7 d;在组织学关系上,凋亡的心肌细胞和Fas、bcl-2阳性细胞不在心肌同一区域,凋亡的心肌细胞在心肌缺血区,Fas、bcl-2表达在无明显缺血的心肌区域.结论Fas、bcl-2的表达可能并不直接参与缺血心肌细胞凋亡的调控.
关键词： 心肌缺血 细胞凋亡 抗原 CD95 原癌基因蛋白质c-bcl-2 -
消化道肿瘤凋亡抑制蛋白表达与体外化疗药物敏感性的关系
目的 探讨消化道肿瘤中p53、survivin、bcl-2蛋白表达与肿瘤细胞体外化疗药物敏感性的关系.方法 对84例胃癌和大肠癌进行MTT法体外化疗药物敏感实验和p53、survivin、bcl-2蛋白免疫组化染色,分析3种凋亡抑制蛋白与9种化疗药物对肿瘤细胞抑制的关系. 结果 本组肿瘤中p53、survivin、bcl-2蛋白表达率分别为64%、89%、61%,survivin与Bcl-2蛋白表达具有正相关性(r=0.3027,P＜0.05).p53强表达与紫杉醇、顺铂对肿瘤细胞抑制率明显降低有关(t=2.1282,P=0.0363;t=3.8850,P=0.0002);survivin蛋白强表达时,长春新碱、顺铂对肿瘤细胞的抑制率明显降低(t=2.1693,P=0.0329;t=2.0247,P=0.0046),但奥沙利铂对肿瘤细胞的抑制率明显增加(t=-2.9070,P=0.0047);bcl-2强表达时,氟尿嘧啶、长春新碱、表阿霉素、奥沙利铂对肿瘤细胞的抑制率明显低于弱表达组(t=2.1483～3.2330,P=0.0347～0.0018).结论 消化道肿瘤凋亡抑制蛋白的表达程度与部分化疗药物耐药性有关,评价某种耐药因子与肿瘤化疗药物敏感性的关系时必须考虑其他因素的影响.
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重组人内皮抑素联合应用5氟脲嘧啶对胃癌裸鼠移植瘤的影响
目的探讨重组人内皮抑素(recombinant human endostatin,rhES)与5氟脲嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)联合应用对胃癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法建立胃癌异位移植BALB/C裸鼠模型,分为4组,每组6只.分别注射生理盐水,腹腔内注射5-FU(10 mg/kg),rhES组瘤周注射rhES(2 mg/kg)同时给予5-FU与rhES,每天1次,连用10 d.计算肿瘤体积、抑瘤率及肿瘤缩小率,检测肿瘤组织血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)、Ⅷ因子相关抗原(FⅧAg)、增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2表达及肿瘤细胞凋亡指数(AI).结果rhES+5-FU组肿瘤体积为(43±2)mm3,5-FU组为(169±45)mm3,rhES组为(95±28)mm3,对照组为(1057±114)mm3(P＜0.01).抑瘤率为99.6%,肿瘤缩小率为98.2%.用药前rhES+5-FU组肿瘤体积为(207±50)mm3,比5-FU组与rhES组下降更迅速(P＜0.01).rhES+5-FU组与5-FU组VEGF、bFGF及VEGF-C表达强度均为0～+;rhES+5-FU组PCNA及bcl-2表达弱;rhES+5-FU组AI为11.7±1.1,5-FU组为6.2±0.6,rhES组为5.8±0.8,对照组为2.4±0.6(P＜0.01).微血管密度在rhES+5-FU组为8.9±2.5,rhES组为10.0±1.5,均低于5-FU组(27.3±1.7)与对照组(29.9±2.3)(P＜0.01).结论联合应用5-FU及rhES能显著抑制胃癌血管生成,增加肿瘤细胞凋亡,使胃癌裸鼠移植瘤的肿瘤体积明显缩小.
关键词： 胃肿瘤 内皮生长因子 增殖细胞核抗原 原癌基因蛋白质c-bcl-2 -
特发性胎儿生长受限与胎盘细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系
目的 探讨特发性胎儿生长受限(FGR)与胎盘细胞凋亡及bcl-2基因表达的关系.方法 应用透射电镜、脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记法(TUNEL)、流式细胞技术(FCM)检测特发性FGR孕妇(FGR组)及正常妊娠妇女(对照组)各15例的胎盘细胞凋亡情况,并采用RT-PCR技术观察两组胎盘细胞中bcl-2基因相对表达量.结果 电镜下观察到FGR组胎盘合体滋养细胞核膜皱缩,核仁消失,染色质致密、凝聚;TUNEL 检测 FGR 组胎盘细胞凋亡率为13.68%,高于对照组的4.05%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);FCM检测胎盘S期细胞比率FGR组为3.4%,对照组为2.2%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),FCM检测的胎盘细胞凋亡率变化趋势与TUNEL检测结果一致;FGR组胎盘细胞bcl-2基因相对表达量为0.19±0.13,对照组为0.55±0.17,两组比较,差异也有统计学意义(P<0.05).结论 特发性FGR的发生与胎盘细胞凋亡增加有关,胎盘细胞凋亡增加与胎盘细胞中bcl-2基因表达下调有一定关系.
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胎盘组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1和凋亡相关基因的表达与子痫前期发病的关系
目的 探讨胎盘组织中血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)和凋亡相关基因easpase-3、Bax及bcl-2的表达及其与子痫前期发病的关系.方法 选择2005年6月-2006年12月在中国医科大学附属盛京医院产科住院的子痫前期患者30例(子痫前期组),以同期正常孕妇40例为对照组.采用免疫组化、RT.PCR技术和蛋白印迹(western-blot)法检测两组孕妇不同孕周胎盘组织中LOX-1和caspase-3、Bax及bel-2的表达.结果 (1)子痫前期组20周+1～24周、24周+1～28周、28周+1-32周、32周+1～36周、36周+1～40周孕妇胎盘组织中LOX-1蛋白表达水平分别为20.1±1.8、25.6±1.3、32.8±1.6、34.3±1.5、39.9±1.2,对照组分别为11.2±0.6、18.5±1.6、26.1±1.8、28.3±1.6、32.3±1.6,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);子痫前期组孕妇胎盘组织中easpase-3蛋白表达水平分别为12.3±0.9、16.3 4-0.9、24.4±0.8、28.3±0.5、36.3±1.1,对照组分别为8.5±1.0、12.3±1.1、17.4±1.2、20.4±0.5、24.2±1.3,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)子痫前期组不同孕周孕妇胎盘组织中LOX-1、easpase-3及Bax mRNA和蛋白的表达水平明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);bel-2 mRNA和蛋白的表达趋势与Bax表达结果相反.结论 LOX-1和caspase-3、Bax在子痫前期患者胎盘组织中表达上调,bcl-2表达下调,-与子痫前期发病有关.
关键词： 先兆子痫 胎盘 清道夫受体 E类 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 原癌基因蛋白质c-bcl-2 细胞凋亡 -
子宫颈癌组织中水通道蛋白8和bcl-2蛋白的表达及其相关性
目的 探讨水通道蛋白(AQP)8、bcl-2蛋白在宫颈癌组织中的表达及其相关性.方法 采用免疫组化Envision二步法检测AQP8和bcl-2蛋白在74例宫颈癌(其中鳞癌46例、腺癌28例)、34例宫颈上皮内瘤变(CIN)和15例正常宫颈组织中的表达情况,并分析两者的相关性.结果 AQP8和bcl-2蛋白主要在CIN异型细胞和宫颈癌细胞的细胞质内表达,AQP8蛋白在宫颈鳞癌、腺癌、CIN和正常宫颈组织中的阳性表达率分别为98%、61%、71%和53%,鳞癌高于腺癌、CIN和正常宫颈组织,差异有统计学意义(P＜0.01);腺癌与CIN、正常宫颈组织比较,CIN与正常宫颈组织比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).bcl-2蛋白在宫颈鳞癌、腺癌、CIN和正常宫颈组织中的阳性表达率分别为74%、71%、53%和20%,鳞癌与腺癌组织比较,差异无统计学意义(P＞0.05);鳞癌、腺癌高于CIN、正常宫颈组织,CIN也高于正常宫颈组织,差异均有统计学意义(P＜0.01).AQP8和bcl-2蛋白在宫颈癌组织中的表达呈明显正相关(rs=0.463,P=0.000).结论 AQP8和bcl-2蛋白在宫颈癌组织中的表达呈明显正相关,AQP8蛋白表达上调可能与宫颈癌的发生、发展有一定的关系.
关键词： 宫颈肿瘤 水孔蛋白类 原癌基因蛋白质c-bcl-2 免疫组织化学 -
子宫内膜异位症患者腹腔液及血清中前列腺素E2与bcl-2蛋白的含量变化及意义
目的探讨子宫内膜异位症(内异症)患者腹腔液及血清中,前列腺素E2(PGE2)和bcl-2蛋白的含量变化及其与内异症发病的关系.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测36例内异症患者(内异症组,其中Ⅰ、Ⅱ期患者16例,Ⅲ、Ⅳ期患者20例)和30例因卵巢囊肿或浆膜下子宫肌瘤手术患者(对照组)腹腔液及血清PGE2与bcl-2含量.结果内异症组患者腹腔液中PGE2、bcl-2蛋白的含量分别为(1987±532)ng/L、(177±53)U/L,对照组为(386±215) ng/L、(86±21)U/L,两组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).Ⅲ、Ⅳ期内异症患者腹腔液中PGE2的含量[(2221±1352)ng/L]较Ⅰ、Ⅱ期患者[(1694±381)ng/L]明显升高,差异也有统计学意义(P<0.01); Ⅲ、Ⅳ期内异症患者腹腔液中bcl-2的含量[(190±63) U/L]较Ⅰ、Ⅱ期患者[(162±49) U/L]升高,差异有统计学意义(P＜0.05).内异症组血清中的PGE2与bcl-2含量[(3787±514)ng/L、(96±44)U/L]均高于对照组[(129±97)ng/L、(53±40)U/L],差异均有统计学意义(P<0.01).Ⅲ、Ⅳ期内异症患者血清中的PGE2含量[(964±290)ng/L]也高于Ⅰ、Ⅱ期患者[(590±362)ng/L],差异也有统计学意义(P<0.01);内异症患者腹腔液中PGE2及bcl-2的含量均高于血清.结论内异症患者腹腔中高含量的PGE2与bcl-2,可能对内异症发病有影响;内异症患者腹腔液与血清中PGE2和bcl-2含量与病变的范围有一定关系.
关键词： 子宫内膜异位症 腹腔液 地诺前列醇 原癌基因蛋白质c-bcl-2 -
bcl-2反义寡核苷酸逆转人卵巢上皮性癌细胞耐药的体外研究
目的探讨体外bcl-2反义寡核苷酸(AODN)对人卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞顺铂(DDP)耐药的逆转作用.方法以卵巢癌DDP耐药细胞株A2780/DDP为模型,实验组以脂质体为载体,分别将bcl-2 AODN、bcl-2正义寡核苷酸(SODN)、bcl-2随机寡核苷酸(RODN)分别转染到A2780/DDP细胞内;阴性对照组细胞以同体积的培养基转染;空白对照组细胞不转染.采用计数法检测细胞增殖变化;RT-PCR技术检测bcl-2 mRNA表达水平;免疫荧光技术检测bcl-2蛋白表达.将DDP作用于细胞,观察实验组、阴性对照组、空白对照组对DDP敏感性的差异.采用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DDP对细胞的抑制率. 结果实验组转染AODN的A2780/DDP细胞增殖被抑制,细胞倍增时间延迟了24 h;A2780/DDP细胞的bcl-2 mRNA及蛋白的表达量下降,16 μg/ml的AODN转染72 h后,bcl-2 mRNA的表达量为0.76±0.01,bcl-2蛋白表达量为171.30±3.09,分别与空白对照组bcl-2 mRNA(1.56±0.03)、bcl-2蛋白(105.34±1.72)的表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.01);与相同浓度SODN、RODN转染的A2780/DDP细胞以及阴性对照组A2780/DDP细胞分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).实验组转染AODN的卵巢癌细胞对DDP的敏感性提高,细胞抑制率为(97.49±1.00)%,与阴性对照组的(3.33±0.17)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 AODN可通过下调bcl-2 mRNA及bcl-2蛋白表达水平,抑制细胞的生长,增加细胞对DDP的敏感性,在一定程度上逆转了卵巢癌细胞的耐药性.
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微小RNA-16调控卵巢上皮性癌细胞增殖、侵袭及凋亡的体外研究
目的 探讨微小RNA-16(miR-16)调控卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞增殖、侵袭及凋亡的作用及机制.方法 脂质体介导miR-16成熟体模拟物及相应的阴性对照片段转染人卵巢癌细胞SKOV-3,分别作为转染组、阴性对照组.实时荧光定量PCR技术检测各组细胞中miR-16的表达,蛋白印迹法检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、凋亡抑制蛋白bcl-2的表达,采用四甲基偶氮唑蓝法、5-乙炔基-2’脱氧尿苷(EdU)标记法测定细胞的增殖能力,transwell穿膜小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测血清饥饿及低氧条件下细胞的凋亡情况.结果(1)转染组、阴性对照组SKOV-3细胞中miR-16的表达量分别为125.93±15.30、0.78±0.16,转染组明显高于阴性对照组,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)转染组、阴性对照组SKOV-3细胞中VEGF蛋白的相对表达量为0.58±0.05、1.22±0.03,MMP-2蛋白的相对表达量为0.63±0.03、1.16±0.03,bcl-2蛋白的相对表达量为0.52±0.03、1.19±0.05,转染组各蛋白的相对表达量均明显低于阴性对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(3)转染后第4天,转染组、阴性对照组细胞的增殖抑制率分别为(37.2±6.2)％、(3.6±3.2)％,两组比较,差异有统计学意义(P=0.001).(4)转染组、阴性对照组细胞的增殖率分别为(12.3±0.8)％、(23.4±1.8)％,转染组明显低于阴性对照组,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).(5)转染组穿过聚碳酸酯膜的细胞数为(6±3)个,明显少于阴性对照组的(40±9)个,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(6)血清饥饿及低氧条件培养24 h后,转染组细胞的早期凋亡率[(16.9±2.1)％]、晚期凋亡率[(13.4±3.3)％]均明显高于阴性对照组[分别为(10.3±1.7)％、(3.2±1.8)％],分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);培养48 h后,转染组细胞总凋亡率明显高于阴性对照组(P＜0.01).结论 miR-16可能通过下调卵巢癌细胞中VEGF、MMP-2及bcl-2蛋白的表达,抑制细胞的增殖、侵袭能力,增强其对凋亡刺激的敏感性.
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产前不同疗程激素治疗对仔鼠脑神经元细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达的影响
目的通过产前应用不同疗程地塞米松治疗,了解不同给药疗程产前激素治疗是否会影响后代脑发育及可能的机制.方法 SPF级SD孕大鼠34只,随机分为4组,产前1剂组8只,于孕17 d肌注地塞米松0.8 mg/(kg·d);产前3剂组8只,于孕17、18、19 d各肌注地塞米松0.8 mg/(kg·d);产前4剂组10只,于孕17、18、19、20 d各肌注地塞米松0.8 mg/(kg·d);对照组8只肌注等量生理盐水.对各组孕鼠所生仔鼠,分别于生后第1、7、14天每组每个时间点随机取仔鼠16只测量全脑重量、称重后再将脑组织进行凋亡细胞的原位标记检测(每个时间点各8只)脑神经元细胞凋亡及改良的酶联免疫杂交分光光度法检测(每个时间点各8只)脑bcl-2蛋白表达,并与对照组比较.结果产前糖皮质激素治疗(antenatal corticosteroids treatment,ACT)1日龄仔鼠1剂组、3剂组、4剂组脑重分别为(0.301±0.030)g、(0.302±0.026)g、(0.296±0.025)g,均低于对照组(0.363±0.041 g),P均＜0.01;7日龄仔鼠3剂组、4剂组脑重分别为(0.798±0.092)g、(0.785±0.050)g,均低于对照组(0.862±0.049)g,P＜0.05或P＜0.01;14日龄仔鼠,仅产前4剂组脑重(1.190±0.080)g低于对照组(1.295±0.019)g,P＜0.01.1日龄仔鼠产前3剂,4剂组神经元细胞凋亡率分别为(9.82±1.51)%、(10.28±1.50)%,较对照组(6.78±1.35)%增加(P均＜0.01);7日龄仔鼠产前4剂组神经元细胞凋亡率(22.85±3.18)%较对照组(18.61±3.34)%显著增加(P＜0.01).1日龄仔鼠产前3剂,4剂组bcl-2蛋白含量分别为(9.50±0.46)U/ml、(9.06±0.46)U/ml,均低于对照组(12.60±1.04)U/ml,P均＜0.01;7日龄仔鼠产前4剂组bcl-2蛋白含量(6.87±0.27)U/ml低于对照组(8.40±0.52)U/ml,P＜0.01.产前1剂组与对照组相比无明显差异(P＞0.05).结论 ACT会影响仔鼠脑发育,可引起脑重量的下降,重复ACT下调脑bcl-2蛋白的表达,通过调节bcl-2基因表达引起脑神经元凋亡增加,使仔鼠脑发育障碍.
关键词： 地塞米松 神经元 细胞凋亡 原癌基因蛋白质c-bcl-2 大鼠 -
脐血肾上腺髓质素水平和胎盘滋养细胞凋亡与胎儿生长受限的关系
目的 探讨脐血肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)水平及胎盘滋养细胞凋亡在胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)中的作用及其关系. 方法 选取2012年1月至12月间内蒙古医科大学第三附属医院产科分娩的小于胎龄儿30例作为FGR组,按1∶1比例选取同期入院时间接近的30例适于胎龄儿作为对照组.采用放射免疫法测定新生儿脐血ADM水平,免疫组织化学方法检测胎盘滋养细胞Bcl-2和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3蛋白的表达水平,采用原位末端标记法检测胎盘滋养细胞凋亡指数.采用两独立样本t检验、秩和检验、x2检验及Pearson相关分析进行统计学分析. 结果 FGR组脐血ADM水平高于对照组[66.28 pg/ml(31.93～204.64 pg/ml)与47.16 pg/ml(12.42～190.16 pg/ml),t=-2.65,P＜0.01],胎盘滋养细胞Bcl-2蛋白表达水平低于对照组(3.71±1.34与4.61±0.98,t=-2.43,P＜0.05),caspase-3蛋白表达水平高于对照组[17.74(3.70～38.05)与8.78(2.09～35.42),Z=-2.61,P＜0.05],凋亡指数高于对照组[35.63％(2.14％～67.31％)与7.73％(1.83％～61.32％),Z=2.98,P＜0.01].脐血ADM水平与胎盘滋养细胞caspase 3蛋白表达水平呈正相关(r=0.52,P＜0.05),与Bcl-2蛋白表达水平呈负相关(r=-0.40,P＜0.05);胎盘滋养细胞凋亡指数与caspase-3蛋白表达水平呈正相关(r=0.44,P＜0.05);Bcl-2与caspase-3蛋白表达水平呈负相关(r=-0.46,P＜0.05). 结论 脐血ADM及凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3可能共同参与了FGR的发生发展.
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胰岛素样生长因子1对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护机制的研究
目的建立单侧缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型,研究胰岛素样生长因子1(IGF 1)对HIBD的影响和可能机制. 方法选择健康7日龄Wistar大鼠120只,建立HIBD模型,随机分成假手术组、HIBD组、HIBD后0.2 mg/kg人基因重组IGF-1干预组(RH-IGF-1组)、0.066mg/kg人基因重组IGF-1干预组(SRH-IGF-1组)及盐水对照组(对照组).各组按观察时段进一步分为24、48、72 h组,每组8只.各组于规定时刻观测脑形态学改变、谷氨酸(Glu)含量、凋亡细胞计数、Bcl-2蛋白表达. 结果(1)HIBD 48 h组Glu(1162.2±108.1)mg/kg,较假手术组(750.9±53.4)mg/kg明显升高(P＜0.05);HIBD组凋亡细胞计数[24 h:(7.6±1.9)%,48 h(12.6±1.2)%,72 h:(1 3.8±0.9)%],较假手术组[24 h(2.0±0.2)%,48 h(2.0±0.3)%,72 h(2.0±0.2)%]明显增加(P均＜0.05).(2)与对照组相比,RH-IGF-1组脑组织病变减轻;干预48 h组Glu[SRH-IGF-1组(781.4±54.2)mg/kg,RH-IGF-1组(740.5±46.6)mg/kg],较对照组(1126.6±48.0)mg/kg明显降低(P均＜0.05);RH-IGF-1组凋亡细胞计数[24 h:(3.6±0.9)%,48 h(8.2±2.2)%,72 h(9.4±1.4)%],较对照组[24 h(7.6±1.9)%,48 h(12.6±1.6)%,72 h(13.9±0.4)%]明显降低(P均＜0.05),RH IGF-1 48 h、72 h组Bcl-2蛋白表达阳性率分别为71.4%,71.4%,较对照组14.2%,14.2%明显升高(P均＜0.05). 结论(1)IGF 1可明显降低损伤脑中Glu含量,阻断Glu的脑损伤途径.(2)IGF-1通过降低细胞凋亡、提高保护性Bcl-2蛋白表达以避免和改善HIBD,并呈剂量依赖效应.
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慢性疼痛对幼鼠学习记忆行为及海马Bcl-2 mRNA、脑源性生长因子mRNA的影响
目的观察弗氏完全佐剂(CFA)引起的慢性疼痛对幼鼠空间学习记忆行为及海马Bcl-2 mRNA、脑源性生长因子(BDNF)mRNA基因表达的影响,探讨慢性疼痛对幼鼠空间学习记忆能力的影响及作用机制.方法新生SD大鼠60只,随机分为疼痛组和对照组,每组30只.在幼鼠出生后2天,疼痛组左足底皮下注射CFA 20 μl,对照组注射0.9%生理盐水20 μl.分别在出生后10天和21天,每组各取10只处死取海马,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测海马Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA表达的变化.出生后21天,每组剩余的10只进行Morris水迷宫实验.结果Morris水迷宫实验中,疼痛组幼鼠寻找隐蔽平台的潜伏期较对照组延长(P<0.05);在空间探索实验中,疼痛组幼鼠在平台所在象限游泳的时间和路径比例,均小于对照组(P<0.05).两组可视平台实验的潜伏期差异无统计学意义(P>0.05).在出生后10天,疼痛组海马Bcl-2 mRNA和BDNF mRNA的表达均小于对照组(P<0.05);在出生后21天, 疼痛组与对照组比较差异均无统计学意义.结论CFA引起的慢性疼痛可使幼鼠空间学习记忆能力下降,海马Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA的改变可能参与了慢性疼痛影响幼鼠学习记忆的机制.
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丙戊酸诱导白血病细胞凋亡机理的实验研究
目的从分子水平探讨丙戊酸(VPA)诱导白血病细胞凋亡的机制,为临床治疗白血病提供理论依据.方法将U937、Jurkat clone E6-1(Jurkat)、BALL-1分别分为1 mmol/L VPA组、1 mmol/L VPA+1 μmol/L zVAD-fmk组(zVAD为N-苯甲基氧化炭酰-缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸)和空白对照组,作用72 h后在流式细胞仪上检测细胞凋亡;采用流式细胞仪检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Bcl-xl的平均荧光指数(MFI)以及胱冬肽酶(caspase)3、8和9的含量;Western-blotting检测各组作用前后P44/42有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)表达及磷酸化水平.结果 1 mmol/L VPA诱导U937和Jurkat的凋亡率分别为(75.8±4.2)%和(53.5±5.9)%,与对照组比较,P<0.01;多caspase抑制剂zVAD-fmk可全部抑制U937凋亡,凋亡率为(2.9±0.4)%;可部分抑制Jurkat凋亡,凋亡率下降至(15.4±1.4)%,与1 mmol/L VPA组比较,P<0.01.1 mmol/L VPA未能诱导BALL-1凋亡(P>0.05).VPA对3种细胞内Bcl-2、Bax和Bcl-xl无明显影响.VPA作用后U937中caspase-3水平由(14.09±1.19)%上升至(32.30±2.47)%,caspase-8水平由(4.58±1.41)%上升至(86.47±3.26)%,均P<0.01,caspase-9变化不显著.Jurkat中caspase-3由(12.01±1.63)%上升至(35.56±0.27)%,caspase-9由(13.89±1.71)%上升至(75.89±4.08)%,均P<0.01,caspase-8变化不显著.BALL-1中caspase-3 略有减少,P＜0.05.VPA作用后3种细胞均表现为P44/42MAPK蛋白总量及磷酸化水平下降,P<0.01.结论 VPA通过激活caspase-3和caspase-8诱导U937凋亡;诱导Jurkat凋亡时涉及caspase-3、9的活化;抑制P44/42MAPK通路是VPA诱导凋亡的另一机制.VPA并非通过改变细胞中Bcl-2等的含量造成上述细胞凋亡.高表达Bcl-2可对抗VPA的作用.
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乳腺癌组织DAPK和p53及Bc1-2表达及其相互关系的研究
目的:检测乳腺癌组织中死亡相关蛋白激酶(DAPK)、p53和Bcl-2表达,探讨DAPK、p53和Bcl-2在乳腺癌组织中的作用及其相互关系.方法:用免疫组化SP法检测42例乳腺增生组织和68例乳腺浸润性癌组织中DAPK、p53和Bcl-2的表达水平,分析它们与乳腺癌临床病理的关系.结果:p53蛋白在乳腺增生组织中的表达为阴性,在乳腺癌组织中阳性表达率为51.5%(35/68);p53的阳性率与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移呈正相关.乳腺癌组织中Bcl-2阳性表达率为69.1%(47/68),明显高于乳腺增生组织;Bcl-2的阳性率与乳腺癌的肿瘤大小、淋巴结转移呈负相关.DAPK在乳腺癌组织中的阳性表达率为42.6%(29/68),明显低于乳腺增生组织;DAPK的阳性率与乳腺癌的病理分型、组织学分级、淋巴结转移、p53及Bcl-2呈负相关.结论:DAPK、p53和Bcl-2蛋白可作为预测乳腺癌生物学行为的参考指标.DAPK可能抑制乳腺癌的侵袭转移,这个作用可能与p53、Bcl-2相关.
关键词： 乳腺肿瘤 蛋白激酶类 蛋白质p53 原癌基因蛋白质c-bcl-2 免疫组织化学 -
亚硒酸钠对胃癌形成的作用及对bcl-2和Bax表达的影响
目的:探讨在胃癌形成过程中亚硒酸钠的作用机制及其对bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法:用N甲基-N-硝基-N亚硝胍(MNNG)20 mg/kg给大鼠灌胃,以诱导大鼠胃腺癌形成.实验第43周,用HE染色、病理诊断和AB-PAS反应方法比较各组MNNG诱导Wistar大鼠腺胃癌形成过程中的变化;用免疫组织化学SP法观察在此过程中胃黏膜bcl-2和Bax蛋白表达,并对其结果进行定性、定位及图象分析.结果:饮水中加入2和4 mg/L的亚硒酸钠加重胃黏膜的糜烂、出血和肠化生,P＜0 05,在MNNG诱癌过程中发生了浆膜下平滑肌瘤,亚硒酸钠可增加平滑肌瘤的发生率.免疫组织化学结果显示,加硒组bcl-2阳性标本的平均光密度比正常对照组明显升高,P＜0.01;加硒组的Bax平均光密度明显高于对照组,P＜0.01.结论:亚硒酸钠可增强大鼠胃黏膜bcl-2和Bax蛋白的表达,并使之糜烂、出血、肠化生;同时,可促进浆膜下平滑肌瘤的形成.
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人脑梗死后星形胶质细胞活性与凋亡相关蛋白Bcl-2的相关性研究
目的探讨人脑梗死后星形胶质细胞活性与凋亡的关系.方法应用10例脑梗死后的尸检全脑标本,用HE和免疫组化方法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、凋亡相关蛋白(Bcl-2),进行定性和定量分析.结果人脑梗死后以梗死灶为中心,按照组织损伤程度由内到外分为4个区(0～3区),其中2区为半暗带区,40%以上的神经元和星形胶质细胞形态基本正常,随缺血时间延长,星形胶质细胞增生明显,形态正常神经元的数量减少;3区神经元形态及数量正常,星形胶质细胞反应性增生.GFAP在0区和1区表达很少, 2区随缺血时间延长阳性细胞数增多,3区早期即有星形胶质细胞的簇样增生.Bcl-2在0区无表达,1区表达较少,2区于缺血后8 h开始出现,23 h达高峰,之后开始下降.结论人脑梗死后在半暗带区23 h前GFAP和Bcl-2表达呈正相关;23 h后呈负相关.2区是临床需要积极抢救的区域,并可应用干预因素上调Bcl-2表达,缩小梗死面积.
关键词： 脑梗死 星形胶质细胞活性 原癌基因蛋白质c-bcl-2
