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因肝酶升高就诊的杜氏肌营养不良2例报告并文献复习
杜氏肌营养不良是儿童常见的肌病,但当其不以运动发育落后为首要表现时易被忽略.遇到肝酶升高的病例,需注意询问运动发育情况、进行较细致的神经系统检查,并检测其肌酶水平,确诊需行基因检测,必要时行肌电图检查和肌活检.
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7例杜氏肌营养不良检测分析
目的:探索多重链接探针扩增技术(MLPA)检测在杜氏肌营养不良检测方面的应用价值.方法:对郑州儿童医院2018年3月～2018年8月收治的7例杜氏肌营养病例进行多重链接探针扩增技术(MLPA)+Sanger测序检测.结果:随机挑选7例DMD疑似病例及母亲,通过多重链接探针扩增技术(MLPA)+Sanger测序检测,7例为均阳性或携带者,4例患儿发病年龄为8月～8岁,其中3例患儿为运动障碍来医院就诊.结论:多重链接探针扩增技术(MLPA)检测在杜氏肌营养不良检测方面有重要应用价值,能检测出大部分的患者,但是需要以Sanger测序方法作为补充.
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应用毛细管无胶筛分电泳诊断缺失型杜氏肌营养不良基因
毛细管电泳是一项新兴的分离、分析技术,它以高效、快速、重复性好、自动化及微量等优点,在核酸分离分析的各方面均较以往的方法更具优势.本工作应用毛细管无胶筛分电泳与多重PCR技术相结合对缺失型杜氏肌营养不良的病人进行了直接基因诊断.与传统方法相比,本技术在分离速度、分辨率及灵敏度方面均有较大改善.毛细管电泳技术将广泛用于遗传病基因诊断.
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135例Duchenne型肌营养不良症DMD基因缺失分析
目的 杜氏肌营养不良(DMD)患者基因缺失检测.方法 应用12对引物、PCR多重反应体系和聚丙烯酰胺凝胶电泳对135个患者进行基因分析研究,设正常和空白对照,检测结果再以二重PCR进行验证.结果54例患者有不同区域的缺失,基因缺失检出率为40%.结论 其缺失区域集中在45～53号外显子,高峰在48号外显子.
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成体脂肪来源的Flk-1+间充质干细胞用于杜氏肌营养不良症治疗的可行性研究
为了探讨成体脂肪来源的间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cell,AD-MSC)移植治疗杜氏肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)的可行性,从成年GFP小鼠脂肪组织中分离得到间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC),用流式细胞术分析其细胞表型和细胞周期;在体外分别以成肌和成内皮诱导体系诱导AD-MSC的定向分化,通过免疫荧光染色和RT-PCR进行鉴定;经尾静脉移植AD-MSC到CTX肌肉损伤模型小鼠和mdx小鼠(DMD动物模型)体内,通过RT-PCR和免疫荧光染色检测供体细胞的分布和分化情况,并进行统计分析.结果表明:从GFP小鼠脂肪组织中分离得到的Flk-1+MSC可以在体外分化为肌肉细胞和血管内皮细胞;细胞移植后,可在损伤肌肉部位检测到GFP阳性的肌纤维、血管内皮细胞和肌肉干细胞;mdx小鼠移植后肌膜上抗肌萎缩蛋白(dystrophin)的表达部分恢复,骨骼肌中心核肌纤维比例也大大降低.结论:AD-MSC是一种较为理想的供移植治疗DMD的干细胞,它不仅可以定向归巢到损伤的肌肉组织中,参与肌纤维重建,而且能改善组织供血,缓解DMD病征,同时部分供体细胞以干细胞形式存在,可以代替原来肌肉干细胞的功能,不断修复损伤的肌肉组织.
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多重连接依赖探针扩增技术在假肥大型肌营养不良症基因诊断中的应用
杜氏肌营养不良（ Duchenne muscular dystrophy， DMD）为儿童期常见的重症肌营养不良疾病，多于5岁前发病，大多数患有DMD的男童12岁后基本丧失行走能力，少数存活至25岁。贝氏肌营养不良（ Becker muscular dystrophy， BMD）临床症状轻于DMD，多于16岁后丧失独立行走能力。DMD和 BMD 都是由定位于 Xp21．2的肌营养不良蛋白（ dystrophin）基因突变引起的X连锁隐性遗传疾病。目前此病尚无有效的治疗方法，故确诊先证者、检出携带者并实施有效的产前诊断，杜绝患儿出生是干预出生缺陷的关键手段。
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我国假肥大肌营养不良征防控的技术路径与优生策略选择
1 背景介绍
假肥大型肌营养不良征（Duchenne and Becker muscular dystrophy，DMD／BMD）是全球常见的X-连锁隐性致死性基因疾病之一，男婴发生率约为1／3500［1］。临床上根据发病年龄及病程差异，将患者分为杜氏肌营养不良（Duchenne muscular dys-trophy，DMD）和贝氏肌营养不良（Becker muscular dystrophy，BMD），两者都是由于编码抗肌萎缩蛋白（dystrophin）的 DMD 基因存在缺陷而致病的。该基因定位于性染色体 Xp21．2区域，是人类目前已知的大基因，长度约为2．4Mb，包含79个外显子。患者基因缺陷的主要类型包括外显子缺失、重复及基因微小突变。 -
TNF-α与骨骼肌损伤和修复
肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)是一种能使肿瘤发生坏死的物质,主要由内毒素激活单核/巨噬细胞产生,是启动抗菌炎症反应的关键细胞因子[1].长期以来,动物及人体实验均发现,慢性感染、肌萎缩、恶病质和杜氏肌营养不良等消耗性疾病以及正常的衰老进程中,血液TNF-α水平和/或骨骼肌TNF-α表达增多并伴随骨骼肌丢失[2-4],因此,传统观点认为TNF-α是一个负性调节因子,但近年来有研究发现,肿瘤坏死因子中的TNF-α能通过p38MAPK和NF-κB信号途径影响肌肉再生过程,对骨骼肌的损伤和修复可能起到重要的调节作用.
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新“太空药”将投入临床实验
近国际空间站上的医疗研究活动传来令人鼓舞的消息，一种治疗杜氏肌营养不良（D M D）的药物很快将投入临床实验，这种新药是在国际空间站研制开发的。
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杜氏肌营养不良与骨骼肌纤维化
骨骼肌纤维化是杜氏肌营养不良杜氏肌营养不良的主要病理变化之一,可影响肌纤维的再生、收缩功能,加重病情,在骨骼肌纤维化的发生发展过程中,炎症细胞、成纤维细胞、成肌纤维细胞及其分泌的细胞因子起重要作用.该文对杜氏肌营养不良的骨骼肌纤维化研究进展进行综述.
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杜氏肌营养不良患者心脏损害的研究进展
杜氏肌营养不良是儿童致死性肌萎缩性疾病。该疾病发病率低、进展迅速、医生认识有限以及呼吸衰竭的有效治疗等多种因素，使心力衰竭成为杜氏肌营养不良患者死亡的首要原因。早期发现、诊治杜氏肌营养不良患者的心脏损害，对于延长患者生存时间和改善生活质量具有重要意义。该文就近年来杜氏肌营养不良患者心脏损害的流行病学、发病机制、早期诊断技术、预防和治疗等方面的研究进展作一综述。
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多重连接依赖性探针扩增技术在杜氏肌营养不良分子诊断中的应用
目的 探讨多重连接依赖性探针扩增技术(MLPA)在杜氏肌营养不良(DMD)分子诊断中的应用.方法 对2008年12月至2013年1月南京军区福州总医院就诊的18个家系中临床怀疑DMD患者进行MLPA分析,并对其中2个家系中高风险孕妇进行产前分子诊断.结果 通过MLPA检测,在6例患者DMD基因中检测出外显子缺失(其中2例为新生突变),1例为外显子重复突变.产前分子诊断中在其中l例胎儿的DMD基因中检测到与先证者相同的缺失突变,而另1例未测到与先证者相同突变.结论 MLPA能够检测出DMD基因中外显子缺失和重复突变,在临床应用上具有广阔前景.
关键词： 多重连接依赖性探针扩增技术 杜氏肌营养不良 突变 -
杜氏肌营养不良患儿的相关基因研究
目的对确诊为杜氏肌营养不良(DMD)患儿血清进行基因和肌酸磷酸激酶(CPK)检测,以研究DMD的基因缺失情况以及与CPK的关系.方法①采用多重引物PCR的方法检测基因缺失;②应用多功能全自动生化仪检测CPK.结果①30例患儿中基因缺失者17例(56.7%),单一缺失者8例(47.1%),多重缺失9例(52.9%).其中外显子51缺失占64.7%(11人次),其次为48缺失占52.9%(9人次);45缺失占35.2%(6人次);44缺失占17.6%(3人次);12缺失占11.8%(2人次);外显子8、17、19缺失各1人次,各占5.9%.②外显子缺失者CPK(11962.78±6305.65)IU/L与无外显子缺失者CPK(9537.69±4303.85)IU/L相比,单一缺失者CPK(11704.65±6561.10)IU/L与多重缺失者CPK(12192.22±6096.80)IU/L比较;单纯外显子51缺失CPK(13542.10±5573.93)IU/L与外显子51缺失合并48缺失者CPK(12216.25±6833.75)IU/L相比,三组均P>0.05,无显著性差异.结论①应用PCR技术检测DMD基因缺失检出率较高,多重缺失占47.1%,其中以外显子51、48、45缺失多见;②外显子缺失与否或缺多少与CPK增高程度无相关性.
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30例杜氏肌营养不良家系临床表型及基因型分析
目的 探讨杜氏肌营养不良(DMD)的临床特点及基因突变类型和分布.方法 回顾分析2015年8月至2017年4月收治的30例DMD患儿家系的临床及基因检测资料.结果 30例DMD先证者均为男性;起病时的中位年龄4岁(0.17～9.5岁),确诊中位年龄5.2岁(0.25～10岁);4例(13.3％)有家族史,7例(23.3％)曾被误诊.所有患儿均起病隐匿;肌酸激酶显著升高,为正常上限的18.6～230.0倍.9例行肌电图检查,均提示肌源性损害;1例行肌活检,病理符合DMD改变.30例患儿均行DMD基因检测,异常检出率100％;其中17例(56.7％)为基因缺失突变,9例(30.0％)点突变,4例(13.3％)重复突变;缺失突变以48、49、50号外显子常见;5例点突变未见文献报道;重复突变均为外显子大片段重复,重复区域包括7～19个外显子不等.30例DMD先证者家系中的49例家庭成员DMD基因检测结果显示,5例基因检测结果与先证者完全相同,也为DMD患者,包括有外公1例,哥哥1例,弟弟3例;21例家庭成员携带与先证者相同的突变基因,为携带者,包括母亲19例和姐姐2例.结论 对不明原因肌酶谱升高的男性患儿,应高度警惕DMD,及早行肌电图、肌活检、基因检测确诊.
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杜氏肌营养不良患儿睡眠呼吸参数特征和危险因素分析
目的 分析杜氏肌营养不良(DMD)患儿睡眠呼吸障碍(SBD)的睡眠呼吸参数特征和危险因素.方法 回顾收集首都医科大学附属北京儿童医院确诊的DMD患儿中行多导睡眠监测(PSG)同时完成《SBD相关症状调查表》的病例,根据睡眠分期和呼吸事件,分为SBD组和非SBD组.截取重要的睡眠参数、呼吸参数和经皮二氧化碳分压(TcpCO2)监测值,对DMD患儿发生SBD行单因素和多因素分析.结果 70例DMD行PSG检查患儿进入本文分析,均为男性;非SBD组45例;SBD组25例,其中1～3岁0/12例,～6岁8/23例,～9岁12/30例,＞10岁5/5例.行PSG检查平均年龄(6.3±2.5)岁;行PSG时睡眠时间313～ 593 (457±59) min,睡眠效率:54％～98％[(86.7±8.1)％].66例PSG同时行TcpCO2监测.诊断阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS) 14例,CO2潴留18例,同时存在OSAHS和CO2潴留7例.家长主诉存在夜间呼吸暂停现象、夜间气促或窒息、因鼻塞而张口、白天睡眠增多的比例SBD组较非SBD组多,差异有统计学意义.SBD组更容易觉醒、伴呼吸事件觉醒次数更多、整夜睡眠中浅睡眠比例较高、深睡眠比例较低和睡眠效率较低与非SBD组比较,差异均有统计学意义.除中枢性呼吸暂停次数外,余呼吸参数SBD组与非SBD组差异均有统计学意义.北极星移动评价量表(NSAA)＜ 13.5分(OR =3.4,95％ CI:1.060 ～ 10.949)和年龄≥6岁时行PSG(OR=7.3,95％CI:1.426～37.463)均增加SBD患病风险.结论 DMD患儿可在病程早期发生SBD,随年龄增长逐渐增高,NSAA评估对发现SBD有较好的提示意义.
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外显子组测序在抗肌萎缩蛋白基因检测到一个新的剪接供体位点突变
目的 应用外显子组捕获和第2代测序技术检测抗肌萎缩蛋白基因(dystrophin)中的微小突变.方法 通过外显子组捕获和第2代测序技术对1例具有典型杜氏肌营养不良症(DMD)临床表现但没有外显子缺失或重复的患者进行dystrophin基因突变检测,并用Sanger测序证实检测结果.以生物信息学预测基因突变所致该基因编码情况的改变.以患者母亲和100名体检正常者作为对照.结果 在患者dystrophin基因内含子50的第1个碱基检测到1个碱基改变:G＞C,其母亲在相同的位置发生了杂合改变.生物信息学预测此改变将使内含子50原有的5'剪接位点消失,导致其相应肽链C端氨基酸序列改变、终止密码提前出现.Sanger测序进一步证实了该突变的存在,且在正常对照未检测到该突变.这是在dystrophin基因上新发现的致病性剪接供体位点突变.结论 外显子组测序技术可有效检测dystrophin基因微小突变,其应用可进一步完善DMD分子诊断体系.
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新生儿期及婴儿期杜氏肌营养不良5例临床分析
目的 提高对新生儿期及婴儿期杜氏肌营养不良的认识.方法 对郑州大学第一附属医院2014年4至11月收治的5例杜氏肌营养不良病历资料进行回顾性分析并相关文献复习.结果 5例患儿均为男性,发病日龄为1～106 d,其中4例为新生儿期发病.5例患儿均无典型肌萎缩或肌无力表现,3例以肌酸激酶和/或肝酶异常增高为首发症状入院,且以肌酸激酶异常升高为显著,5例患儿肌酸激酶均在8 000 U/L以上(8 687～59 301 U/L),基因检测明确诊断.结论 新生儿期及婴儿期杜氏肌营养不良发病隐匿,有肌酸激酶异常升高者在排除其他疾病后应考虑进行性肌营养不良的可能,肌肉活检及基因检测有助于明确诊断.
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河南省杜氏肌营养不良患者dystrophin基因突变的MLPA检测
目的:探讨多重连接依赖式探针扩增技术(MLPA)在杜氏肌营养不良(DMD)患者基因诊断中的应用价值,了解河南省DMD患者dystrophin基因突变热点.方法:采用MLPA检测48例河南省DMD患者及13例缺失型患者母亲dystrophin基因突变.结果:48例DMD患者中,有31例(64.6％)检测出dystrophin基因外显子缺失,4例(8.3％)检测出外显子重复.河南省DMD患者dystrophin基因缺失/重复热点区域为第46～53外显子和第8～18外显子.13例患者母亲有11人检测出杂合突变,突变类型与患者相同,余2人未检测出突变.河南省DMD患者基因外显子缺失、重复分布与北京相似(x2=0.256,P=0.880),但与香港和台湾地区有着较大差异(x2分别为11.470和11.303,P分别为0.003和0.004).结论:MLPA在DMD患者及携带者基因诊断中有很高的应用价值.河南省DMD患者dystrophin基因的突变热点与国内其他地区有差异.
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6例杜氏肌营养不良回顾性分析
目的 分析6例杜氏肌营养不良(DMD)患儿的临床特点,并结合文献复习,为早期诊断该病及采取有效治疗措施进行归纳总结.方法 收集2010年1月至2015年10月收治的6例DMD患儿的临床资料,进行回顾性分析.结果 6例均为男性,确诊年龄1.2~11.5岁,均无家族史.起病隐匿,均有谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶同步升高,以肌酸激酶升高显著、为正常的3.7~107.2倍.基因检测均提示DMD基因突变;其中2例患儿的母亲行基因检测,提示携带相同突变基因.1例行肌肉活检,病理结果符合DMD改变.1例患儿行脐血间充质干细胞移植,5 d后肌酸激酶下降77.0%.结论 对血清肌酶异常、运动功能异常的男童,应高度警惕DMD,尽早行CK及基因检测确诊,尽早干预,保护尚存的正常肌纤维,延缓疾病进展.
关键词： 杜氏肌营养不良 肌酸激酶 脐血间充质干细胞移植 早期诊断 儿童 -
运用单细胞三重PCR对杜氏肌营养不良进行植入前遗传学诊断
目的:采用三重PCR技术检测缺失型杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy, DMD)基因部分外显子和性别鉴定位点amelogenin基因,探讨该技术对DMD家系中致病基因携带者进行植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis, PGD)的可行性.方法:显微操作取正常男性、正常女性和DMD基因8号、47号外显子缺失型DMD患者单个淋巴细胞及无DMD家族史夫妻行体外授精-胚胎移植(in vitro fertilization pre-embryo transfer,IVF-ET)术后废弃的单个卵裂球细胞,采用三重PCR技术扩增DMD基因8号、47号外显子和amelogenin基因.结果:64枚正常人单个淋巴细胞的DMD基因8号、47号外显子和amelogenin基因扩增阳性率分别为93.8%,93.8%和95.3%,假阳性率为2.8%;48枚8号外显子缺失型患者单个淋巴细胞的DMD基因47号外显子和amelogenin基因扩增阳性率均为95.8%,假阳性率为3.3%;48枚47号外显子缺失型患者单个淋巴细胞的DMD基因8号外显子和amelogenin基因扩增阳性率均为95.8%,假阳性率为0;40枚单卵裂球细胞DMD基因8号、47号外显子和amelogenin基因扩增阳性率分别为82.5%,80.0%和77.5%,假阳性率为0.结论:本研究所建立的单细胞三重PCR技术具有较高的扩增阳性率和特异性,有望在缺失型DMD家系中进行PGD的临床应用.
