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脓肿分枝杆菌细胞壁通透性的研究
目的了解脓肿分枝杆菌的细胞壁的通透性.方法在含RFP的液体培养基中加入Tween 80以增加细菌细胞壁的通透性,观察对RFP具不同MIC的脓肿分枝杆菌的生长在450 nm的光吸收值(OD450)的变化,同时用电镜对脓肿分枝杆菌标准株、临床耐药株和敏感株的细胞壁进行超微结构的观察.结果临床耐药菌株在同时含1/5MIC浓度的RFP和0.05%Tween 80的液体培养基中生长的OD450值与单含RFP的OD450值比较有显著性差异(P＜0.05);临床敏感株和结核杆菌耐药株在两种培养基中的OD450值比较无显著性差异;在电镜下观察,脓肿分枝杆菌耐药株的细胞壁可见有薄层深染线,而敏感株的细胞壁结构均匀.结论脓肿分枝杆菌确实存在细胞壁的低通透性,且脓肿分枝杆菌耐药株和敏感株的细胞壁在结构上有一定差异,因此膜通透性低下可能是其耐RFP的重要原因.
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Xpert Mtb/RIF检测技术诊断肺结核和肺外结核的价值
目的 探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert Mtb/RIF)在结核病诊断中的临床应用价值.方法 对200例初治结核病患者标本,包括痰液、肺泡灌洗液、胸腹腔积液和脑脊液各50例,分别进行抗酸染色法、固体培养法、药物敏感性试验(简称“药敏试验”)及Xpert Mtb/RIF检测,分别以固体培养结果和药敏试验结果为金标准,分析Xpert Mtb/RIF检测标本中结核分枝杆菌及其利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值.Xpert Mtb/RIF检测和金标准检测进行一致性检验(Kappa检验),K＞0.8认为两者一致性极好.结果 以固体培养法检测结果为准,Xpert Mtb/RIF检测技术,以及抗酸染色法总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别为94.52％ (69/73)、90.55％(115/127)、85.19％(69/81)、96.64％(115/119)和0.83,以及65.75％(48/73)、96.06％(122/127)、90.57％(48/53)、82.99％(122/147)和0.66;以比例法药敏试验结果为准,Xpert Mtb/RIF检测技术检测利福平耐药性的总体敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为93.75％(15/16)、100.00％(53/53)、100.00％(15/15)、98.15％(53/54)和o.96.结论 XpertMtb/RIF法可快速检测肺内、外结核分枝杆菌及其耐药性,具有良好的应用前景.
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单耐利福平结核分枝杆菌耐药分子机制研究
目的 探讨单耐利福平结核分枝杆菌中耐药相关基因突变以及药物外排泵两种不同耐药机制的功能.方法 从国家结核病参比实验室2007-2008年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐利福平的菌株23株.采用直接测序法检测利福平耐药相关基因rpoB突变情况.提取rpoB无突变菌株的RNA后反转录并采用real-time PCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量,对比菌株低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)实验结果,筛选可能与利福平药物外排相关的基因,并选用大肠埃希菌为模式生物,构建表达载体,检测过表达目的外排泵的大肠埃希菌对利福平的耐药程度以验证.结果 在23株单耐利福平的菌株中,有16株(69.6％)检测到rpoB突变,其中包括531位点突变9株,526位点突变6株及533位点突变1株.Ser531Leu、His526Asp表现为高浓度耐药,其MIC分别为192 μg/ml和256 μg/ml；而突变类型His526Gly、His526Leu、His526Arg和Leu533Pro表现为低浓度耐药,其MIC分别为0.75 μg/ml,4 μg/ml、2 μg/ml和0.5μg/ml.在rpoB未突变菌株中,通过real-time PCR发现Rv2936、Rv0783和Rv0933的转录水平与MIC呈正相关.在对照组和转入pEASY-E1- Rv0933的大肠埃希菌中MIC均为8μg/ml,而转入pEASY- E1- Rv2936和pEASY-E1- Rv0783的大肠埃希菌的MIC均有不同程度的提高,分别为32 μg/ml和16μg/ml.结论 不同耐药突变类型导致的耐药程度不同,Rv2936和Rv0783可能是与利福平耐药相关的的药物外排泵基因.
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GeneXpert MTB/RIF技术对菌阴肺结核患者辅助诊断的价值
目的 探讨GeneXpert MTB/RIF技术对菌阴肺结核患者的辅助诊断价值及其在利福平耐药检测中的应用价值.方法 收集山东省滨州市结核病防治院在2014年6月至2016年2月期间住院并临床确诊的菌阴肺结核患者126例(初治79例、复治47例)和非结核病患者51例(肺癌患者25例、肺炎患者17例、支气管扩张患者9例)的晨痰标本,采用GeneXpert MTB/RIF法检测结核分枝杆菌的阳性率;再采用纤维支气管镜刷检涂片法、肺泡灌洗液结核分枝杆菌培养法和GeneXpert MTB/RIF法检测126例菌阴肺结核患者的结核分枝杆菌阳性率,对三者阳性率进行比较;采用比例法对肺泡灌洗液培养阳性菌株作利福平耐药性检测,将检测结果与GeneXpertMTB/RIF法检测结果作对比.结果 126例住院菌阴肺结核患者的晨痰采用GeneXpert MTB/RIF法进行检测,其中检出阳性49例,占38.9％(49/126).79例初治菌阴肺结核患者通过刷检涂片法检测抗酸杆菌阳性14例,阳性率为17.7％(14/79),肺泡灌洗液培养阳性18例,阳性率为22.8％(18/79),GeneXpert MTB/RIF法检测阳性40例,阳性率为50.6％(40/79).GeneXpert MTB/RIF法检测阳性率均明显高于刷检涂片法和培养法,差异均有统计学意义(x2=19.02,P=0.005;x2=13.18,P=0.005);刷检涂片法与培养法比较,差异无统计学意义(x2=0.63,P=0.500).47例复治菌阴肺结核患者采用刷检涂片法检测抗酸杆菌阳性11例,阳性率为23.4％(11/47);肺泡灌洗液培养阳性14例,阳性率为29.8％ (14/47);GeneXpert MTB/RIF法检测阳性27例,阳性率为57.4％(27/47).GeneXpert MTB/RIF法检测阳性率均明显高于刷检涂片法和培养法,差异均有统计学意义(x2=11.31,P=0.005;x2=7.31,P=0.005);涂片法与培养法比较,差异无统计学意义(x2=0.49,P=0.500).对肺泡灌洗液培养阳性的32例患者进行利福平耐药性检测,检测结果与GeneXpert MTB/RIF法检测结果一致,耐利福平的患者均为4例,占12.5％(4/32),且两种方法检测的4例患者相同.结论 GeneXpert MTB/RIF技术检测阳性率较高,对菌阴肺结核的早期诊断及判定对利福平是否耐药具有较高的临床应用价值.
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应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药性
目的 应用基因芯片方法检测结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)对利福平和异烟肼的耐受性,评价其临床应用价值.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增一基因芯片杂交的方法检测经常规药敏实验证实的30株Mtb利福平和异烟肼敏感株和5.株耐利福平和异烟肼分离株的堆rB基因及katG和inhA基因突变,同时以PCR-直接测序法为对照.结果 应用PCR-基因芯片与基因测序方法检测30株Mtb利福平敏感株咖B基因和异烟肼敏感株katG基因和inhA基因均为野生型.50株Mtb利福平耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析3株rpoB基因均为野生型,41株均为突变型;6株PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.50株Mtb异烟肼耐药株中,PCR-基因芯片与基因测序分析16株katG基因和30株inhA基因均为野生型,31株katG基因均为315位密码子突变,7株inhA基因均为-15位突变型,其中2株为katG和inhA双重突变,3株katG和13株inhA PCR-基因芯片与基因测序结果不一致.结论 应用PCR-基因芯片方法可快速、有效地检出大多数Mtb耐多药分离株,指导临床用药.
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909例结核病患者一线抗结核药物血药浓度监测结果分析
目的 分析结核病患者一线抗结核药物血药浓度监测情况.方法 选取2010年1月至2016年11月于首都医科大学附属北京胸科医院住院并进行一线抗结核药物血药浓度测定者作为研究对象,共909例;其中,服用INH者909例,服用EMB者783例,服用PZA者587例,服用RFP者503例.患者服药剂量:INH 300 mg/d、RFP 450 mg/d或600 mg/d、PZA 1500 mg/d、EMB 750 mg/d.收集研究对象性别、年龄、并发糖尿病情况,以及血药浓度监测结果,并进行分析.结果 服用INH、EMB、PZA和RFP(450 mg/d和600mg/d)2 h后,患者血药浓度低于目标浓度范围者分别占57.3％(521/909)、82.2％(644/783)、29.8％(175/587)、51.6％(190/368)和36.3％(49/135).其中,男性患者中INH、EMB、PZA、RFP (450 mg/d)出现低血药浓度者分别占67.2％(396/589)、85.9％(451/525)、39.9％(153/383)、60.0％(135/225),均高于女性患者[39.1％(125/320)、74.8％(193/258)、10.8％(22/204)、38.5％(55/143)],差异均有统计学意义(x2值分别为67.26、14.59、54.10、16.24,P值均＜0.01).体质量≥50 kg的患者,INH、EMB、PZA、RFP(450 mg/d)出现低血药浓度者分别占61.7％(428/694)、83.3％(513/616)、35.3％(159/451)、55.6％(154/277),均高于体质量＜50 kg者[30.3％(40/132)、72.4％(76/105)、4.7％(4/86)、37.1％(23/62)],差异均有统计学意义(x2值分别为44.44、7.12、32.00、6.95,P值均＜0.05).结核病并发糖尿病患者,INH和PZA出现低血药浓度者分别占72.6％(143/197)和53.8％(71/132),高于未并发糖尿病者[53.1％(378/712)和22.9％(104/455)],差异均有统计学意义(x2值分别为23.98和46.78,P值均＜0.01).结论 结核病患者服用一线抗结核药物后出现低血药浓度情况较为普遍,患者性别、体质量、并发症等因素均会影响其血药浓度水平;提示开展一线抗结核药物血药浓度监测工作,并根据患者个体情况调整治疗方案对结核病治疗是必要的.
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荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌复合群对利福平和异烟肼耐药性的价值
目的 评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称“探针熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌复合群对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的价值.方法 从2015年1月至2018年7月山东省菏泽市传染病医院收治的883例肺结核和耐多药结核病(MDR-TB)患者中,选择萋-尼染色结果为阳性的结核病患者的痰标本共215份(例)进行分离培养,对鉴定为结核分枝杆菌复合群(MTBC)的200株(例)菌株同时使用比例法药物敏感性试验(DST)和探针熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性.以DST检测结果为金标准,分析探针熔解曲线法检测RFP和INH的敏感度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验).结果 200株(例)MTBC分离株中,以DST检测结果 为标准,探针熔解曲线法检测RFP耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为96.4％ (106/110;95％CI:90.7％～98.9％)、80.0％(72/90;95％CI:70.5％～87.1％)和89.0％(178/200);对INH耐药性检测的敏感度、特异度和符合率分别为85.4％(123/144;95％CI:78.6％～90.7％)、96.4％(54/56;95％CI:87.7％～99.6％)和88.5％(177/200).探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP耐药性的Kappa值为0.78,对INH耐药性的Kappa值为0.74.结论 探针熔解曲线法检测MTBC对RFP和INH的耐药性均有较高的敏感度和特异度,且探针熔解曲线法与DST检测MTBC对RFP和INH耐药性的一致性较高,有助于对耐药结核病患者的及早发现和治疗.
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结核分枝杆菌利福平依赖性的初步研究
目的 从耐利福平(RFP)结核分枝杆菌临床分离株中筛选RFP依赖的菌株,并在小鼠模型中验证RFP依赖现象,同时分析RFP依赖菌株的特征.方法 采用7H11培养基绝对浓度法对46例临床分离菌株进行RFP依赖菌株筛选.以筛选得到的体外具有典型的RFP依赖现象的05116菌株建立气溶胶感染的小鼠模型,小鼠按照给药的种类和给药单位剂量分成对照组0.5％羧甲基纤维素钠(carboxymethyl cellulose sodium,CMC)、10 mg/kg Rfb(Rfb10)组、10 mg/kg RFP(RFP10)组、20 mg/kgRFP(RFP20)组,每组各10只,观察给药4、8周的体质量、肺荷菌量及组织病理学改变在各组之间差异,以验证小鼠体内是否存在RFP依赖现象.比较RFP耐药株和依赖株的rpoB基因突变位点,以鉴定RFP依赖株的特征.数据以(-x±s)表示,采用SPSS 11.0软件,组间比较采用单因素方差分析,以P＜0.01为差异有统计学意义.结果 从46例RFP耐药的结核分枝杆菌临床分离株中筛选到18例RFP耐药伴依赖的菌株和28例RFP耐药非依赖的菌株.感染小鼠模型给药8周,各组小鼠的活菌计数从高到低依次为:RFP20组(lgCFU为6.60±0.82)、RFP10组(lgCFU为6.44±0.36)、Rfb10组(lgCFU为6.32±0.55)、对照组(lgCFU为6.20±0.28),接近于初感染的菌量(lgCFU为5.93±0.14),但与对照组相比差异无统计学意义(F值分别为0.68、2.21、2.45,各组P值均大于0.05).RFP耐药株8例和依赖株11例,分别有3/8和4/11的菌株在rpoB基因526位发生突变,2/8和6/11的菌株在rpoB基因531位发生突变.结论 RFP临床耐药株中RFP依赖菌的检出率高,其RFP依赖现象在小鼠体内得到初步验证.RFP耐药株和依赖株的rpoB基因突变位点基本相同,因此RFP依赖的原因是表型变异还是其他因素尚有待进一步的实验证实.
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利福平致急性肾功能衰竭8例分析并文献复习
目的 探讨肺结核患者应用利福平所致急性肾功能衰竭(ARF)的原因、特点并提高重视.方法 对天津市海河医院近5年来收治的利福平所致的急性肾功能衰竭8例,在年龄、用药特点、治疗及预后等进行分析.结果 病例以老年人为主(6/8例),其中6例既往有应用利福平史,8例患者均在住院后规则应用包括利福平在内的抗结核方案治疗,用药1个月以内出现急性肾功能衰竭.结论 在应用利福平抗结核治疗时应提高警惕,密切观察,注意急性肾衰的发生,特别是老年患者和既往曾经应用过利福平的病人.
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含利福布丁方案治疗复治肺结核患者的疗效观察
目的 观察含利福布丁方案治疗复治肺结核患者的疗效.方法 采用前瞻性队列研究设计,将河南省商丘市结核病防治所2009年9月15日至2010年6月30日期间诊断为复治肺结核的120例患者以数字表法随机将患者分别纳入利福布丁组(60例)和利福平组(60例)进行治疗,比较两组各治疗阶段的痰菌转阴率、病灶吸收情况及空洞闭合率.利福布丁组的化疗方案为:2HBZES/6HBE(B:利福布丁),利福平组为:2HRZES/6HRE.采用SPSS 13.0软件进行整理分析.组间比较用x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 2个月末,两组的痰菌转阴率:利福布丁组为48.33％(29/60),利福平组为30.0％(18/60),差异有统计学意义(x2=4.23,P＜0.05).X线胸片显示:利福布丁组与利福平组的显效率分别为21.67％(13/60)和8.33％(5/60),差异有统计学意义(x2 =4.18,P＜0.05)；有效率分别为36.67％(22/60)和18.33％％(11/60),差异有统计学意义(x2=5.06,P＜0.05).疗程结束时,利福布丁组与利福平组的痰菌转阴率为81.67％(49/60)和61.67％(37/60),差异有统计学意义(x2=5.91,P＜0.05).影像学检查结果:利福布丁组和利福平组空洞的闭合率分别为47.92％％(23/48)和27.45％(14/51),差异有统计学意义(x2=4.43,P＜0.05).病灶吸收情况,利福布丁组和利福平组的显效率53.33％(32/60)和35.00％(21/60),差异有统计学意义(x2=4.09,P＜0.05)；有效率分别为68.33％(41/60)和48.33％(29/60),差异有统计学意义(x2=4.94,P＜0.05).结论 在联合相同化疗药物时,含利福布丁方案组对于复治涂阳肺结核患者的疗效优于含利福平方案组,具有较好的临床疗效.
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131株耐多药结核分枝杆菌对利福布丁与利福平交叉耐药的研究
目的 观察利福布丁对MDR-TB菌株的抑菌效力及其与利福平的交叉耐药性,了解对利福布丁与利福平交叉耐药菌株rpoB基因突变特征.方法 采用间隔抽样法,从2007-2008年全国结核病耐药基线调查的401株MDR-TB菌株中抽样,传代后获得131株MDR-TB菌株.用微孔板Alamar blue法测定利福平和利福布丁对MDR-TB菌株的低抑菌浓度(MIC),采用直接测序法检测MDR-TB菌株rpoB基因突变,分析rpoB基因突变对两者交叉耐药性的影响.采用SPSS 11.0软件进行统计分析,交叉耐药率比较采用x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 在131株MDR-TB菌株中,利福平MIC中位数值为256μg/ml,利福布丁MIC中位数值为2 μg/ml.通过测定MIC的方法,利福平与利福布丁交叉耐药率为76.47％(91/119).在MDR-TB菌株中,发生rpoB基因突变113株(86.26％,113/131),包括531、526、516、513、511、522、533等7种单位点突变,其中以密码子531(56.50％,74/131)、526(16.03％,21/131)突变为常见.不同rpoB基因突变的MDR-TB菌株,526、531位点突变出现利福平与利福布丁交叉耐药的比例高,分别占90.48％(19/21)、78.38％(58/74),与无突变组(44.44％,8/18)比较,差异均有统计学意义(x2值分别为9.641、8.223,P值均＜0.05).结论 利福布丁与利福平存在交叉耐药性,但利福布丁有更强的抑菌能力.MDR-TB菌株不同rpoB突变类型,利福平与利福布丁交叉耐药性不同.
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基因芯片技术在结核分枝杆菌耐药检测中的效果分析
目的 比较基因芯片和比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)在检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性中的应用效果.方法 选取2013年9月至2016年12月海南医学院第二附属医院598例涂阳肺结核住院患者的痰标本,具有传统药敏结果和基因芯片结果的484例患者纳入分析.采用基因芯片法检测rpoB、katG及inhA基因耐药突变位点及频率,以比例法药敏试验结果为金标准,比较两种方法的符合率.结果 基因芯片和比例法药敏试验检测结核分枝杆菌对利福平的耐药性符合率为93.8％ (454/484),对异烟肼的耐药性符合率为89.0％(431/484),对耐多药的符合率为95.5％(462/484).118株检测到rpoB基因发生突变,优势突变位点为531,占56.8％(67/118);其次突变位点是526,占19.5％(23/118);516突变位点占12.7％(15/118).97株检测到katG和inhA基因突变,常见的突变位点是katG315,占82.5％(80/97),inhA均为-15突变类型,占14.4％(14/97).结论 基因芯片法与比例法具有很好的一致性,可成为筛查结核分枝杆菌对利福平和异烟肼是否耐药的快速有效的方法.
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结核分枝杆菌利福平依赖株与耐药株的耐药状况比较
目的 调查结核分枝杆菌利福平依赖株和耐药株对临床常用抗结核药物的耐药性差异,并探讨其临床意义.方法 采用匡氏双相琼脂培养基分离痰结核分枝杆菌并作耐药性和依赖性测定.结果 依赖组菌株对8种药物的耐药率均高于耐药组菌株,2组菌株对链霉素(S)、乙胺丁醇(E)、对氨基水杨酸(PAS)、阿米卡星(Am)的耐药率差异有统计学意义(P＜0.05),对左氧氟沙星(Lfx)的耐药率差异有统计学意义(P＜0.01);100%依赖株和98.6%耐药株为MDR株;依赖株和耐药株中XDR菌株的比例分别为14.6%和5.8%,P=0.05.结论 结核分枝杆菌利福平依赖株均为MDR株,对一线和二线抗结核药物耐药率高,XDR株比例高,应予高度警惕和关注.
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GeneXpert MTB/RIF技术对成年人结核性脑膜炎诊断价值的研究
目的评价GeneXpert MTB/RIF技术检测脑脊液中的结核分枝杆菌对成年人结核性脑膜炎(TBM)的早期诊断价值.方法 选取西安市胸科医院2015年6月至2016年12月期间诊治的疑似结核性脑膜炎成年患者90例作为研究对象.研究对象均经抗结核药物治疗时间<2周,年龄≥18岁.收集患者脑脊液样本,分别用抗酸染色法、液体培养法、GeneXpert MTB/RIF技术检测.按照新的结核性脑膜炎诊断标准,以临床评分≥6分作为参考标准,对研究对象进行分组,评价GeneXpert MTB/RIF技术的诊断价值.结果 90例研究对象中参照临床评分标准,确定为TBM组61例,非TBM组29例.GeneXpert MTB/RIF检测离心脑脊液标本阳性25例,敏感度为41.0%(25/61),特异度为100.0%(29/29),阳性预测值为100.0%(25/25),阴性预测值为44.6%(29/65).GeneXpert MTB/RIF检测未离心脑脊液标本、液体培养法、抗酸染色法检测TBM的敏感度分别为23.0%(14/61)、18.0%(11/61)、4.9%(3/61).GeneXpert MTB/RIF检测离心脑脊液标本的敏感度高于检测未离心脑脊液标本、液体培养法及抗酸染色法,差异均有统计学意义(x2=4.56,P=0.033;x2=7.72,P=0.005;x2=22.43,P<0.05).25例经GeneXpert MTB/RIF检测离心脑脊液标本阳性患者中检出利福平耐药1例,与传统药敏结果一致.结论 GeneXpert MTB/RIF技术能快速特异地检测脑脊液中结核分枝杆菌,与抗酸染色和液体培养比较具有较高敏感度,其检测的脑脊液标本经离心浓缩处理后可提高其诊断敏感度.
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基因芯片检测耐利福平结核分枝杆菌准确性的Meta分析
目的 对基因芯片方法在检测耐利福平结核分枝杆菌的准确性进行系统评价,为基因芯片技术应用于临床检测耐药结核分枝杆菌的必要性提供证据.方法 计算机检索The Cochrane Library(2014年第1期)、PubMed、EMbase、Wanfang Data、CNKI数据库,检索时限均为建库至2014年2月.由2位研究者根据纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料,采用评价诊断准确性质量研究(quality assessment of diagnostic accuracy studies, QUADAS)条目评价纳入研究论文的方法学质量,检出相关文献223篇,按照标准纳入22篇文献.采用Meta-DiSc1.4软件对其敏感度(SEN)、特异度(SPE)、阳性似然比(十LR)、阴性似然比(-LR)、诊断比值比(DOR)进行异质性检验和合并分析,绘制汇总受试者工作特征(SROC)曲线,计算曲线下面积(AUC).结果 共纳入22篇文献(包括一篇多中心研究文献),25个研究,包括4879株经传统药敏试验鉴定结核分枝杆菌菌株,其中耐RFP菌株(1314株)、敏感菌株(3565株).基因芯片技术检测Mtb对RFP耐药的SEN合并为0.89[95 ％CI (0.87～0.91)]、SPE合并为0.98[95％ CI(0.97～0.98)]、+LR为30.89[95％CI (22.15～43.06)]、-LR为0.10[95％ CI (0.07～0.15)]、DOR合并为354.06[95％CI (212.09～591.07)]、AUC为0.9833.结论 基因芯片方法具有较好的诊断价值;以传统药敏法为金标准,基因芯片方法特异度、敏感度,诊断OR值均较高,说明其在Mtb对RFP耐药检出率较高,可作为临床结核分枝杆菌耐药检测的辅助手段.
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一线抗结核药物血药浓度与早期痰菌阴转的相关性研究
目的 了解利福平(R)、异烟肼(H)、乙胺丁醇(E)在我国结核病患者中的药代动力学特点,并探讨抗结核药物药代动力学参数与治疗疗效的相关性.方法 采用前瞻性研究方法,招募温州市中心医院2015年10月1日至2016年1月31日住院部的肺结核患者作为研究对象,共72例.研究对象为初治或复治不超过1次,包括菌阳和菌阴患者.所有研究对象口服标准四联一线抗结核药物方案治疗1周后,采集服药前0.5h,服药后2h、4h、6h、8h的血浆标本,通过液相色谱-串联质谱联用(LC-MS-MS)方法检测血药浓度值.同时随访治疗2个月末痰菌阴转情况,评估治疗2个月末痰菌阴转与血药浓度的相关性.结果 72例研究对象中1例患者痰培养结果为耐多药肺结核,1例失访,终纳入70例进行分析.其中,菌阴肺结核患者16例,菌阳肺结核患者54例.研究对象服药1周达到稳态药物浓度后进行采血检测,25.7％(18/70)的患者R的峰值浓度(Cmax)低于推荐范围(＜8μg/ml),38.6％(27/70)的患者H的Gmax低于推荐范围(＜3 μg/ml),65.7％(46/70)的患者E的Gmax低于推荐范围(＜2 μg/ml).54例菌阳肺结核患者抗结核药物治疗2个月末,48例痰菌阴转,6例未阴转.痰菌阴转者血浆中E服药后2h浓度(C2 h)、Cmax、服药后8h曲线下面积(AUC0～8)值分别为(1.81±0.91) μg/ml、(1.81±0.85) μg/ml、(7.67±3.25)μg·h·ml-1,高于痰菌未阴转者[C2 h、Cmax、AUC0～8分别为(0.93±0.32) μg/ml、(1.06±0.25) μg/ml、(4.93±0.72) μg·h·ml-1],差异有统计学意义(t=4.74,P＜0.01;t=4.93,P＜0.01;t=4.95,P＜0.01);痰菌阴转者血浆中H的G2h和Gmax值分别为(3.67±1.64) μg/ml、(3.85±1.59) μg/ml,均高于痰菌未阴转者[C2 h、Cmx分别为(2.11±1.14) μg/ml、(2.11±1.14) μg/ml],差异有统计学意义(t=2.60,P=0.012;t=2.25,P=0.029).结论 部分肺结核患者血浆药物Cmax值低于推荐参考水平,尤其是H和E的药物剂量可能需要调整.此外,治疗2个月末痰菌阴转率与H、E的血浆药物浓度具有相关性.
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GeneXpert MTB/RIF技术在结核病早诊断中的应用
目的 评估GeneXpert MTB/RIF技术(简称Xpert MTB/RIF)检测结核分枝杆菌(MTB)及其利福平耐药的可行性.方法 选取2015年1 6月上海市松江区结核病定点医院结核科门诊连续纳入、初次就诊的疑似结核病患者,共556例.收集患者痰液标本,分别进行涂片抗酸染色镜检法(简称“涂片法”)、液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法(简称“液体培养法”)、传统比例法药物敏感性试验(简称“药敏试验”)和Xpert MTB/RIF检测,比较Xpert MTB/RIF法和传统方法检测痰标本中MTB及其耐药性的效能.结果 537例患者经涂片法、液体培养法和Xpert MTB/RIF检测,阳性率分别为17.32％(93/537)、28.31％(152/537)和28.12％(151/537).以液体培养为金标准,Xpert MTB/RIF检测的敏感度和特异度分别为90.60％(135/149)和95.84％(369/385),且敏感度高于涂片法[涂片法的敏感度为60.53％(92/152)],差异有统计学意义(x2=36.71,P＜0.01);Xpert MTB/RIF检测涂阳标本的敏感度为96.63％(86/89),明显高于检测涂阴标本的敏感度[81.67％(49/60)],差异有统计学意义(x2=9.43,P＜0.01).以比例法药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度为90.00％(9/10),特异度为99.07％(106/107),一致率为98.29％(115/117).结论 Xpert MTB/RIF技术操作简便、快速、安全,敏感度和特异度较高,对基层实验室早期检测MTB及判定利福平耐药具有重要价值.
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抗结核固定剂量复合制剂的抗结核活性研究
目的 对不同配方的抗结核固定剂量复合制剂的体内外抗结核活性进行研究并对其抗结核作用进行评估.方法 体外活性用2倍稀释法检测低抑菌浓度(MIC),体内活性以半数动物存活时间为指标观察药物对实验性结核病的疗效.结果 2药或3药复合中的各药物对结核分枝杆菌H37Rv、牛型结核杆菌(Ravenal)和草分枝结核杆菌(M.phlei)的MIC绝大多数都低于药物单独应用时的MIC;体内抗结核作用显示,2药复合和3药复合及其复合制剂对实验性结核病均表现出显著的治疗作用,并明显优于各配方中相应药物单独应用时的作用.结论 2药复合和3药复合及其制剂在体内外均具有显著抗结核作用,且不同厂家的同一产品的抗结核作用未见显著差异.
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临床分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平菌的应用价值探讨
目的 探讨分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)的临床应用价值,以期为临床依R菌早期发现提供帮助.方法 采用临床典型依R菌株在罗氏(L-J)培养基上的佳生长利福平药物浓度100 μg/ml(简称“L-J R100”),建立临床依R菌初代筛检模式,即在临床分枝杆菌BD960快速分离培养中,平行接种L-J R100管和罗氏空白对照管(L-J对照)培养；按照其模式对重庆市公共卫生医疗救治中心2011年3月7日至2012年2月15日期间共5362份临床标本平行培养结果进行统计分析(实验结果录入瑞美检验网络LIS系统).结果 BD960、L-J R100和L-J对照管3种方法平行培养的总阳性检出率为43.92％(2355株/5362份),其中BD960阳性检出率39.56％(2121株/5362份),L-J对照管阳性检出率25.57％(1371株/5362份).BD960阴性但L-J对照管培养阳性者234份；L-J R100阳性703株,占检出阳性的29.85％(703株/2355株)；发现有依R菌现象的258株(合计221例,其中重复出现依R菌现象2次的33例、3次的1例、4次的3例,另外有14株L-J R100阳性而对照为阴性的绝对依赖株),占L-J对照管阳性的18.82％(258株/1371株),占L-J R100阳性的36.70％(258株/703株).结论 临床分枝杆菌培养中同步筛检依R菌能分离到绝对依赖株,可提早为临床提示分离阳性株是否为利福平依赖菌或耐药菌；同时可提高分枝杆菌培养阳性检出率；其方法简单易行,有较好的临床应用价值.
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利福平和异烟肼结核分枝杆菌药敏表型和基因型的关系
目的 对利福平(RFP)和异烟肼(INH)进行药敏检测,分析相应的结核分枝杆菌药敏表型与基因型的关系.方法 对2009年至2012年深圳市第三人民医院结核病门诊和住院的137例结核病患者晨痰标本进行结核分枝杆菌培养,利用膜基因芯片法检测结核分枝杆菌耐药基因的突变情况(基因型检测),同时以绝对浓度法进行异烟肼和利福平药敏试验(表型检测),计算两种方法检测结果间的符合率,验证膜基因芯片方法的准确性,用Kappa检验分析两种方法的一致性.结果 137株结核分枝杆菌标本,表型检测利福平和异烟肼耐药率分别为27.01％(37/137)和22.63％(31/137);基因型检测利福平和异烟肼耐药率分别为26.28％(36/137)和23.36％(32/137);以绝对浓度法药敏结果为金标准,膜基因芯片检测利福平耐药的敏感度为83.78％(31/37),特异度为94.06％(95/101),符合率为91.97％ (126/137),Kappa值为0.79,P＜0.05;异烟肼耐药的敏感度为80.65％(25/31),特异度为94.29％(99/105),符合率为90.51％(124/137),Kappa值为0.73,P＜0.05;两种药物药敏结果总符合率为91.24％(250/274).结论 结核分枝杆菌耐药性基因型检测和表型检测结果高度一致,且基因型的检测方法能快速准确地检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,有望在临床治疗中广泛应用.
