人ⅡA型磷脂酶A2衍生多肽P51-67杀菌作用的研究

目的:研究和比较人ⅡA型磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)衍生多肽P51-67、P26和N1-11对不同细菌在体外的杀菌效应.方法 根据人ⅡA型PLA2氨基酸顺序分别设计合成三个肽分子P51-67(p51-67)、P26(p99-124)、N1-11(p1-11).采用琼脂铺板计数法测定杀菌活性,将不同浓度衍生肽分别与革兰氏阳性菌(G+)金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、屎肠球菌和革兰氏阴性菌(G-)大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌在37℃孵育2.5 h,然后铺板并置于37℃恒温箱培养18～24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率.结果 IIA型PLA2P51-67对G+菌与G-菌均有较强的杀菌活性,N1-11和P26对G+菌有较强的杀菌活性,但对G-菌杀菌活性较弱.结论 衍生自人ⅡA型PLA2保守区域17个氨基酸残基的肽P51-67对G+菌和G-菌均有较强的杀菌活性,这可能与P51-67肽分子更易于与细菌结合并发挥作用有关.

胰高血糖素样肽-1及其受体在调节胰岛β细胞功能方面的作用

一、GLP-1的来源与结构GLP-1属于一种胰高血糖素原衍生肽(proglucagon-derived peptides,PGDPs).早期对GLP-1的研究证明,包含全部肽链的GLP-1几乎没有活性,后来发现,在切除N端的开始6个氨基酸后,剩余的GLP-1片段,即GLP-1(7-36)或GLP-1(7-37)的促胰岛素作用得到大幅度提高.

胸腺五肽及其衍生肽分子结构与杀菌活性关系的研究

目的：研究胸腺五肽及其衍生肽在体外对不同细菌的杀菌活性。方法：根据胸腺五肽结构分别设计合成4种衍生肽如下：①胸腺五肽P5；②直肽链P10；③直肽链P12；④环肽P环。采用琼脂铺板计数法，测定衍生肽的杀菌活性。结果：P5、P10、P12对G+菌和G-菌有一定杀菌活性，其杀菌活性由强到弱依次为P12>P10=P5，P环没有杀菌活性。结论：胸腺五肽及其衍生肽P5、P10、P12对G+菌和G-菌有较弱的杀菌活性，P12环经过修饰成环状后，无杀菌活性，这可能与其疏水性和分子结构有关系。

034 自身热休克蛋白60和破伤风类毒素及其衍生肽作为肺炎球菌结合疫苗的载体

血管基膜衍生多功能肽基因克隆、表达及空间构象分析

目的:构建血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体,并对血管基膜衍生多功能肽氨基酸序列进行空间结构分析预测.方法:用人源性IgG3上游铰链区连接肽连接的Tumstatin的2个功能区片段,即血管基膜衍生多功能肽(VBM-DMP),利用合成的3条长引物片段,进行PCR扩增.克隆到pUC19载体,酶切和测序鉴定.亚克隆构建原核表达载体pGEX-4T-1-VBMDMP,IPTG诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物.用Glutathione Sepharose4B层析柱进行了亲和层析鉴定.将VBMDMP序列输入计算机,利用Antheprot软件分析.结果:血管基膜衍生多功能肽(VBMDMP)基因经限制性内切酶酶切和测序鉴定,其大小和核苷酸序列正确,与设计完全一致.获得了原核表达融合蛋白GST-VBMDMP.Antheprot分析显示,人IgG3上游铰链区连接后的Tumstatin的2个功能区域能自由伸展.结论:成功构建了血管基膜衍生多功能肽克隆和原核表达载体,并对其进行了空间结构分析.

中性粒细胞趋化三肽在慢性阻塞性肺疾病中的作用机制

慢性阻塞性肺疾病(COPD)在研究和治疗上主要的障碍是缺乏一种与疾病的严重程度和评价预后相关的标志物[1].近年发现,胶原蛋白衍生肽N-乙酰-脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸(N-acetylated proline-glycine-proline,NAcPGP)和脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸(proline-glycine-proline,PGP)是中性粒细胞的趋化剂,诱导中性粒细胞在肺部病灶长期浸润,形成慢性炎症,加快COPD的病程进展.本文将目前该领域的研究归纳如下.

糖尿病治疗的新靶点——GLP-1类似物的临床应用

随着全球糖尿病发病率不断上升,糖尿病的发病机制和新药开发成为各国学术机构和开发商共同关注的目标,近年来糖尿病治疗的新靶点胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物也应运而生并开始应用于临床,GLP-1类似物作为糖尿病新药物的作用机制、疗效和安全性有待了解和经验总结.1 GLP-1的来源、结构及作用机制GLP-1是胰高血糖素原衍生肽,相对分子质量是3 298,有生物活性的GLP-1以GLP-1(7-36)酰胺或GLP-1(7-37)酰胺的形式出现;其中,GLP-1(7-36)酰胺是人体内GLP-1主要的天然形式,约占80％.进食数分钟后体内GLP-1浓度开始升高,并与胰岛β细胞膜上的特异性受体结合发挥其生理效应,餐后30 ～ 60 min内达到峰值,但很快被体内广泛表达的DPP-4所降解.

衍生自大肠杆菌OmpA信号肽的多肽P-KKK杀菌作用研究

目的 研究和比较大肠杆菌OmpA信号肽衍生多肽P-KKK在体外对不同细菌的杀菌效应.方法 采用琼脂铺板计数法测定衍生多肽P-KKK对革兰阳性(G+)茵和革兰阴性(G-)菌的杀菌活性,将不同浓度的衍生多肽P-KKK分别与3种G+菌(金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、枯草芽孢杆菌)和3种G-茵(大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌、绿脓杆菌)在37℃孵育2h,铺板后罩于37℃中培养18～24 h,记录每一琼脂板上茵落形成数量(CFU),计算多肽P-KKK的杀菌率.结果 衍生肽P-KKK对G+菌具有较强的杀菌活性,浓度在200 ug/mL时,能杀灭98.5％以上的G+茵,浓度为40 ug/mL时杀菌率也达80.2％以上;对G-菌也有较强的杀菌活性,浓度在200 ug/mL时,能杀灭93.8％以上的G-茵,浓度为40 ug/mL时杀菌率也达15.2％～ 99.7％.结论 大肠杆菌OmpA信号肽衍生肽P-KKK对G+茵及G-茵均具有明显的杀菌活性,进一步对其结构与功能进行研究将有助于开发出新型抗菌药物.

将大肠杆菌OmpA信号肽改造成为抗菌肽的研究

目的 探讨将大肠杆菌OmpA信号肽改造成抗菌肽的方法以及衍生肽的杀菌活性.方法 以由21个氨基酸残基组成的大肠杆菌OmpA信号肽(P-AQA)为模板,通过改变其C末端的氨基酸组成,分别合成衍生多肽:(MKKTAIAIAVALAGFARVRQK,P-RQK)、(MKKTAIAIAVALAGFARRKKK,P-KKK)、(MKKTAIAIAVALAGFAD VDQD,P-DQD) .采用琼脂铺板计数法测定以上3条衍生多肽及肠杆菌OmpA信号肽对革兰阳性菌(G+)(金黄色葡萄球菌)和革兰阴性菌(G-)(大肠杆菌)的杀菌活性.结果 天然信号肽P-AQA不溶解水,无杀菌活性;在信号肽C末端加入酸性氨基酸的衍生肽P-DQD 对G+菌和G-菌均无杀菌作用;其余两条在末端加入碱性氨基酸的多肽对G+菌和G-菌均有较强的杀菌作用,其中末端带有5个碱性氨基酸的多肽(P-KKK)其杀菌活性强于有3个碱性氨基酸的多肽(P-RQK)5倍.结论 将大肠杆菌OmpA信号肽C末端中的中性氨基酸替换为碱性氨基酸后,具有明显的杀菌活性,其杀菌活性可能与碱性氨基酸的数量有关.

人ⅡA型磷脂酶A2碳末端衍生多肽结构与杀菌活性关系的研究

目的:研究人ⅡA型磷脂酶A2(group ⅡA phospholipase A2,PLA2GⅡA)碳末端衍生多肽的分子结构与杀菌活性的关系.方法:以人PLA2GⅡA一级结构碳末端的26个氨基酸残基为模板,分别合成3条多肽如下:①直链肽P1-26;②将其中一半的碱性氨基酸替换成中性氨基酸的P2-26;③碱性氨基酸(组氨酸和赖氨酸)全被替换成精氨酸的P3-26.采用琼脂铺板计数法测定多肽的杀菌活性.将不同浓度的3种多肽分别与G+菌(枯草杆菌)和G-菌(大肠杆菌)在37 ℃孵育2 h,然后铺板并置于37 ℃恒温箱培养18～24 h,记录每一琼脂板上的菌落数(CFU),并计算多肽作用后的杀菌率.结果:①碱性氨基酸减少的P2-26杀G+菌活性降低,仅为P1-26的1/4,但对G-菌杀菌效应稍增高;②碱性氨基酸全为精氨酸的P3-26杀G+菌和G-菌的活性与P1-26相比均明显降低.结论:人PLA2GⅡA衍生杀菌多肽P1-26的杀菌作用与其所含有的碱性氨基酸密切相关,减少碱性氨基酸的量可以减低它杀G+菌的活性,改变碱性氨基酸的类型也可以影响它的杀菌活性.

胸腺五肽及其衍生肽的杀菌活性研究Δ

目的：研究胸腺五肽及其衍生肽的杀菌活性。方法：采用琼脂铺板计数法测定胸腺五肽[精氨酸（R）-赖氨酸（K）-天冬氨酸（D）-缬氨酸（V）-酪氨酸（Y），RKDVY]及其衍生肽1[RKN（天冬酰胺，N）VY]、衍生肽2（RKKVY）对革兰阴性（G－）菌（变形杆菌、大肠埃希菌）和革兰阳性（G+）菌（金黄色葡萄球菌、粪肠球菌）的杀菌活性，其中五肽剂量为15.625～1000μg/ml，细菌数为102 CFU。结果：3种五肽对G－菌均有杀菌活性，且RKKVY、RKNVY杀菌活性强于RKDVY（P＜0.01），RKKVY与RKNVY间差异无统计学意义（P＞0.05）；对G+菌亦有杀菌活性，其杀菌活性由强到弱依次为RKKVY＞RKNVY＞RKDVY（P＜0.01）。结论：胸腺五肽及其衍生肽对G－菌和G+菌均有杀菌活性，具有量效关系。

EPO和HBSP在尿源性脓毒血症致兔急性肾损伤和炎症反应中的保护作用

目的 评估促红细胞生成素(EPO)及其衍生肽(HBSP)在尿源性脓毒血症致兔急性肾损伤及炎症反应中的保护作用.方法 将24只新西兰大白兔随机均分为US组[将800 μg/kg内毒素(LPS)1 mL注入左侧输尿管内,在注射点上方结扎输尿管,逐层缝合关闭腹腔]、Sham组(不结扎输尿管和注射LPS,其余操作同US组)、EPO治疗组(建模后经耳缘静脉给予EPO 5000 IU/kg体质量)、HBSP治疗组(建模后经耳缘静脉给予HBSP 60 μg/kg体质量,每6小时1次).采用肾盂高压法建立上尿路急性梗阻并脓毒血症新西兰大白兔模型.于术前及术后12、24、36 h采血检测血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-a、白细胞介素(IL)-6.术后36 h行HE染色光学显微镜下观察肾脏、肝脏、肺脏组织病理学变化.US组结果与Sham组比较,确定尿源性脓毒血症兔模型是否建立.EPO治疗组、HBSP治疗组结果与US组比较,评估EPO和HBSP在尿源性脓毒血症致兔急性肾损伤及炎症发应中的保护作用.结果 与Sham组相比,术后12、24、36 h,US组Cr、BUN、ALT、AST、TNF-a、IL-6均明显升高,差异有统计学意义 (P <0.01),与US组相比,EPO治疗组及HBSP治疗组各时间点Cr、BUN、ALT、AST、TNF-a、IL-6水平无明显下降,差异无统计学意义 (P >0.05).光镜下观察组织病理学改变,与US组相比,EPO治疗组及HBSP治疗组肾脏、肝脏及肺脏组织损伤评分差异无统计学意义 (P >0.05).结论 促红细胞生成素及其衍生肽对尿源性脓毒血症兔急性肾损伤无明显保护作用,对炎症反应亦无明显抑制作用.