病房似禅房

前不久,我在医院呆了一个月.那是一间二人病房.对面病床上是位干瘪的老伯,他儿子说,老人昏迷七天后醒来.他似乎很虚弱,几乎不说话.白天,他呆望着天花板,夜晚安静得让我有点不安.几天后,老人渐渐活跃起来.他自个儿下床转悠,伴着拐杖有节奏的"哆哆"声.那天晚上,老人站在阳台上,看星星和月亮从云缝里钻出来,兴奋不已.一只萤火虫飞了进来,停在他的手背上,老人更高兴了,丢下拐杖,腾出手来触摸它.

消失的星星之神

“清夜长,梦回廊.夏日流萤篱笆上.幽草舞螳螂.”那时的夏夜多美啊!“妈妈快看,那是什么?”暑假带女儿回老家,夜晚无事,母亲就带着我和女儿兴致勃勃地去她的小“菜园”摘小番茄.走着走着,草丛里飞出一个亮亮的小东西,女儿惊奇地问我.“萤火虫啊,你不认识?”我诧异地问道.女儿摇摇头.长到十几岁的女儿竟然不认识萤火虫!那么,“银烛秋光冷画屏,轻罗小扇扑流萤”,这优美而灵动的古诗的意境她是无法欣赏了;那么,“囊萤映雪”,晋时好学而家贫的车胤借萤火虫之光彻夜苦读的故事她是没处体会了;那么,“老翁也学痴儿女,扑得流萤露湿衣”,这个学小儿扑流萤的可爱又可笑的“老翁”她也一定无法理解了.

心说

人安静下来,就能听见自己的心跳.在一间空屋里,惟一陪伴你的,是你的心.这时候,你比什么时候都更加明白:你什么也没有,只有一颗心.我们惟一可宝贵的,是心.行走在长夜里,星光隐去,萤火虫也被风抢走了灯笼,偶尔,树丛里闪出绿莹莹的狼眼.这时候,惟一能为自己照明的,是那颗心.心是不会迷途的,心总是朝着光的方向.即便心迷途了,索性就与心坐在一起,坐成一尊雕像.

重组表达萤火虫荧光素酶结核分枝杆菌的构建及其用于低抑菌浓度测定的研究

目的 构建萤火虫荧光素酶(FFLuc)重组表达的结核分枝杆菌菌株,利用其建立抗结核药物低抑菌浓度(MIC)检测方法,并应用该方法测定目前主要的抗结核药物的MIC.方法 (1)以质粒pMV306hsp+FFLuc为模板,PCR扩增FFLuc基因.构建重组表达质粒pMV361+FFLuc,电转化至结核分枝杆菌标准株H37Rv中,应用小动物活体成像系统鉴定FFLuc表达.比较结核分枝杆菌与重组结核分枝杆菌生长状态并绘制生长曲线.(2)检测不同浓度的异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、莫西沙星(Mfx)、链霉素(Sm)、左氧氟沙星(Lfx)、利奈唑胺(Lzd)作用不同时间的表达荧光量变化,考察在不同药物作用下FFLuc表达的稳定性,建立以FFLuc标记结核分枝杆菌为基础的测定抗结核药物MIC的方法并测定INH、RFP、EMB、Mfx、Sm、Lfx、Lzd等7种药物的MIC.结果 (1)pMV361+ FFLuc重组表达载体构建的稳定表达FFLuc的结核分枝杆菌菌株的菌量与荧光表达量(相对荧光强度)呈线性关系[x2=0.994,lg(y)=0.905×lg(x)+0.832].(2)应用新方法检测的7种药物的MIC与微孔培养显色(MABA)法MIC测定结果基本相同.第4天时荧光检测INH、RFP、Mfx、EMB、Sm、Lfx和Lzd的MIC值分别是0.05、0.05、0.09375、4、0.8、0.15、0.15μg/ml;与MABA法检测结果相比,结果在相差1～2倍MIC值的可接受范围内.结论 建立了FFLuc重组表达的结核分枝杆菌菌株检测抗结核药物MIC的方法与MABA法相比,所需时间更短,第4天即可检测结果.

声辐射力成像法联合萤火虫技术在甲状腺结节诊断中的价值

目的 探讨声辐射力成像(ARFI)联合萤火虫成像(Micropure)在甲状腺恶性结节中的诊断价值.方法 对62例甲状腺结节患者术行前二维超声、ARFI及Micropure检查,以术后病理结果为金标准,分别计算二维超声、ARFI、ARFI与Micropure技术联合对甲状腺结节良恶性诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV).结果 二维超声诊断甲状腺恶性结节的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值为73.68％、79.69％、51.58％、91.07％.ARFI诊断甲状腺恶性结节的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值为84.21％、85.94％、64.00％、94.83％.ARFI与Micropure联合诊断甲状腺恶性结节的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值别为94.74％、78.13％、54.55％、98.00％.结论 ARFI与Micropure技术联合应用对诊断甲状腺恶性结节有较高的临床应用价值.

超声萤火虫技术在痛风性关节炎诊断中的应用

目的 探讨超声萤火虫成像技术对痛风性关节炎(GA)的诊断价值.方法 痛风患者GA组62例,包括急性期24例和慢性期38例.无症状高尿酸血症患者AH组22例.对两组患者行二维超声和“萤火虫”技术检查,扫描部位为第一跖趾关节和膝关节.取内侧、外侧、正中三个切面,重复扫查三次,记录检测出的强回声数目的平均值.结果 (1)两组患者超声萤火虫技术检测出的微结晶数明显高于二维超声(P＜0.001);(2) GA组患者的微结晶数明显高于AH组(P＜0.001);(3)第一跖趾关节的微结晶多见于内侧和正中切面,膝关节的微结晶多见于内侧和外侧切面;且前者两种技术微结晶的检出率均高于后者;(4)两种技术在GA组急性期检测出的微结晶数目比慢性期增多(P＜0.05).结论 超声萤火虫技术对痛风性关节炎微结晶的灵敏度优于二维超声,对该病的诊断具有重要价值.

乳腺疾病超声影像学研究新技术及新进展

20世纪50年代超声技术开始应用于乳腺疾病的诊断，迄今历时60余年，乳腺超声检查不受乳腺组织类型的限制，无创、无辐射、可重复、显像清晰、方便快捷、费用低廉，是临床应用为广泛的影像学检查手段之一。近些年来，各种超声新技术，包括超声弹性成像、超声造影、实时三维超声成像等超声新技术在临床广泛开展，晚近“萤火虫＂技术也伴随而生，相继应用于乳腺疾病的诊断，使超声检查乳腺疾病的检出率、灵敏度和特异度明显增高，应用前景十分广阔，已成为乳腺疾病检出的主要影像学手段之一。

超声MicroPure成像技术对甲状腺结节微钙化灶检测的应用价值

超声检查是鉴别甲状腺结节良恶性的重要手段。甲状腺癌的超声声像图可表现为形态不规则、边缘不光整、血供丰富、实质性低回声和结节内钙化。其中微钙化灶是甲状腺癌重要的影像学表现之一[1]。新近出现的MicroPure成像技术通过对图像进行边缘锐化和噪声抑制等计算机程序后处理，已被证明可明显提高乳腺微钙化灶检出率，从而提高乳腺病灶钙化灶的显示率[2]，该技术又被称为“萤火虫”技术。如果MicroPure成像技术能够提高甲状腺结节微钙化灶的检出率，那么对于甲状腺癌的诊断将具有重要意义。本研究在常规超声检查甲状腺结节的基础上使用MicroPure成像技术，探讨MicroPure成像技术在甲状腺结节微钙化灶检测中的应用价值。

肝孤核受体激动剂对间充质干细胞的抗缺氧复氧损伤作用及机制

目的 探讨肝孤核受体(LXR)激动荆对脂肪间充质干细胞(AD-MSCs)缺氧损伤的保护作用及可能机制.方法 酶消化法分离稳定表达萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因的小鼠AD-MSCs,流式细胞术检测CD90、CD44、CD34、CD45细胞表面标记物.3代AD-MSCs分为7组:对照组；缺氧6h/复氧2h组(缺氧复氧组)；缺氧/复氧+DMSO组(DMSO组)；缺氧复氧十不同浓度LXR激动剂T0901317干预组(1μmol/L组、5 μmol/L组、10μmol/L组、15 μmol/L组).运用Fluc报告基因生物发光成像技术对AD-MSCs细胞增殖进行定量评价,免疫印迹法检测细胞NF-κB表达水平,ELISA法检测AD-MSCs的白细胞介素6(IL-6)、TNF-α分泌水平.结果 流式细胞术结果显示,AD-MSCs呈CD44(+)、CD90(+),CD34(-)、CD45(-).光学成像结果显示,AD-MSCs细胞数与Fluc平均生物发光信号强度呈正相关(r2=0.97).与对照组比较,缺氧复氧组AD-MSCs分泌TNF-α、IL-6、NF-κB明显升高；与缺氧复氧组比较,10 μmol/L组AD-MSCs分泌TNF-α、IL-6、NF-κB明显减少(P＜0.05,P＜0.01).结论 LXR激动剂可以促进缺氧复氧损伤后AD-MSCs的存活,并能通过NF-κB信号途径抑制炎性因子IL-6、TNF-α的释放,可为干细胞移植治疗心肌缺血再灌注损伤提供新的细胞保护方法.

表达人HER2/neu及荧光素酶的小鼠乳腺癌模型的建立

目的 建立表达HER2/neu表皮生长因子受体及萤火虫荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞模型.方法 将重组人HER2/neu原癌基因真核表达载体与荧光素酶报告基因依次转染小鼠乳腺癌4T1细胞系,用G418与潮霉素加压筛选阳性克隆,Western印迹及活体成像技术鉴定HER2/neu和荧光素酶在4T1细胞中的表达.在BALB/c小鼠前肢乳腺皮下注射该细胞1.5×106个,活体成像观察肿瘤的生长及转移.结果与结论经过两步转染获得抗G418及潮霉素4T1细胞,Western印迹结果显示,该细胞高表达HER2/neu.流式细胞术检测结果提示几乎所有细胞均有GFP的表达.用该细胞株接种小鼠后具有与野生型4T1细胞相似的成瘤性和转移能力.实验结果提示,我们已建立可表达HER2/neu表皮生长因子受体及荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞株,为乳腺癌的研究提供一个良好的模型.

双荧光素酶标记丙型肝炎病毒亚基因组复制子细胞模型的建立

目的 构建双荧光素酶标记丙型肝炎病毒(HCV)亚基因组复制子细胞模型,为HCV研究提供有效工具.方法 通过单克隆筛选及慢病毒感染构建双荧光素酶标记的HCV亚基因组复制子细胞模型(HCV Fluc-Ubi-Gluc).利用荧光素酶检测、Western印迹检测鉴定细胞模型,利用IFN-α对HCV抗病毒效果评价验证细胞模型的有效性.结果 筛选所得HCV亚基因组细胞克隆检测到荧光素酶活性,Western 印迹检测到HCV NS5A蛋白表达.NS3/4A对黄色荧光蛋白(YFP)标记的MAVS(YFP-MAVS)切割作用使亚细胞定位发生转移.IFN-α处理后荧光素酶活性、HCV蛋白表达水平明显降低.结论 该模型采用萤火虫荧光素酶报告基因指示HCV亚基因组在细胞内的复制水平,Gaussia荧光素酶指示细胞的生长数量,能准确反映候选药物对HCV复制水平的影响,并有效排除药物的细胞毒性干扰,具有操作简单、快速等优点,在抗病毒药物高通量筛选、HCV致病机制等研究方面具有一定的价值.

DMRIE-C、Lipofectamine2000和TransMessenger转染HCV RNA效率比较

目的 比较和优化DMRIE-C、Lipofectamine2000和TransMessenger 3种转染试剂的转染效率,选择适合建立丙型肝炎病毒(HCV)复制子或感染克隆的转染试剂和条件.方法 将含有萤火虫荧光素酶报告基因的HCV RNA,分别通过上述3种转染试剂转染Huh7和Huh7.5.1细胞系,于转染24 h后裂解细胞,测定荧光素酶活性.2~3周后,结晶紫染色细胞集落.结果 在Huh7和Huh7.5.1细胞中,DMRIE-C比Lipofectamine2000和TransMessenger的转染效率高.在Huh7细胞中,4 μl DMRIE-C 转染试剂组的荧光素酶活性比其他组高(P＜0.05).在Huh7.5.1细胞中,3 μl DMRIE-C 转染试剂组的荧光素酶活性比其他组高(P＜0.05).在细胞集落形成实验中,DMRIE-C组的细胞克隆数多于其他两种转染试剂组.结论 在Huh7和Huh7.5.1细胞中,DMRIE-C比Lipofectamine2000和TransMessenger的转染效率高.当建立HCV复制子或感染克隆试验时,既要选择合适的RNA转染试剂,又要考虑细胞生长状态的影响.

光辉岁月

年年岁岁药相似岁岁年年店不同寄言全盛平价时应怜诸多步难行中华人民共和国迎来了六十华诞,举国同庆.在庆祝国庆之余,华本海开始回忆起过往的蹉跎岁月感慨起如今的迷茫岁月憧憬起今后的光辉岁月起来.和日历一起翻起的是业绩,同城连锁门店数量发展到三四十家,销售额逼近5000万,华本海可谓功不可没足以慰藉.可我们本海的心大着呢,虽说萤火之光欲与日月争辉有些不自量力,可本海可不自认为是萤火虫,用老婆小蕊的话说"你是天,你是地,你是永远的神话!"

舌尖上的遗憾

“银烛秋光冷画屏,轻罗小扇扑流萤.天阶夜色凉如水,坐看牵牛织女星.”这是唐代诗人杜牧描绘的秋夕之美.看星星,捉萤火虫,是我们儿时难忘的记忆.而如今,城市的孩子们竟然不知道萤为何物,而夜看繁星的几率更如同买彩票中大奖.“大漠驼铃”是诗人笔下壮美的一景,也说明骆驼是人类长期共患难的朋友.不久前,有报道说,中东的“非典”肆虐与骆驼有关.故而,近年来,数百只驼群列队而过的景象不见了,却传来了杀骆驼的消息,屠刀之下,连小骆驼都不放过.那些等待挨宰的骆驼趴在一起淌着泪,似乎在控诉人类的薄情寡义,使人不忍卒睹.看来,骆驼真的要面临灭种之灾了.

居家保健话节气——小暑

[气候特点]每年的7月7日前后是小暑节气.此时天气虽热,但还不到热的时候,所以叫小暑.小暑是二十四节气的第11个节气,也是人体阳气旺盛的时候.大自然绿意盎然,百花争艳,夏夜的萤火虫闪闪飞舞伴随着人们度过漫漫长夜.

每个人都是哲学家

我所说的每个人都是哲学家,是我自己的人生感悟,同时也从熟悉的或者不熟悉的人们身上感受到这一璀璨的人性的光芒.他们从呱呱落地那一刻起,就经历过许多人生磨难,尽管这些磨难或大或小,但是足以让一个人在和命运的博弈中,体悟到一种属于他(她)的思想火花,这些思想的火花即使犹如萤火虫般的光芒,也足以温暖整个人生记忆,给人一种向上的力量.在我的苏北老家有一位寡妇,她个子矮矮的,显得很孱弱的样子.这位妇人命运多舛,曾经嫁过3次,有过3位丈夫,第一个丈夫因患病撒手人寰,撇下一个女儿;第二任丈夫是在大运河开机帆船的工人,因溺水身亡,也撇下3个儿女;第三位的男人是一位板车夫,没有履行结婚登记手续,属于同居关系,和她没有过几年,因患肝癌死去.村里的人们都说这个寡妇命硬,其命运犹如黄连一般的苦.可是这位寡妇意志很坚强,独自用孱弱的身躯把不谙世事的几个孩子拉扯大.

大暑

大暑,每年7月23日或24日太阳到达黄经120°时为“大暑”节气.“大暑”与“小暑”一样,都是反映夏季炎热的程度,“大暑”表示炎热至极.这时正值“中伏”前后,全国大部分地区进入一年中热时期,也是喜温作物生长快的时期.我国古代将大暑分为三候:“一候腐草为萤;二候土润溽暑;三候大雨时行.”陆生萤火虫产卵于枯草上,大暑时,萤火虫卵化而出,所以古人认为萤火虫是腐草变成的;第二候是说天气开始变得闷热,土地也很潮湿;第三候是说时常有大的雷雨会出现,大雨使暑湿减弱,天气开始向立秋过渡.

HeLa细胞中ezrin基因主要转录调控区的定位分析

目的:鉴定ezrin基因在HeLa细胞中的主要转录调控区,初步研究ezrin基因的转录调控机制.方法:采用嵌套缺失技术构建一系列以ezrin基因翻译起始位点上游不同长度DNA序列作为报告基因启动子的重组pGLB质粒,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测启动子的转录活力,并利用在线分析程序预测ezrin基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点.结果:获得一系列含不同长度ezrin基因5'侧翼区序列的重组pGLB质粒;当ezrin基因5'侧翼区序列从-1 324截短到-890时,转录活力降低约80%,从-146截短到-32时,转录活力几乎完全丧失;在-1 324/-890和-146/-32区,存在大量的Sp 1转录因子结合位点.结论:在HeLa细胞中,ezrin基因的-1 324/-890和-146/-32区是主要的转录调控区.Sp 1可能是调控基因转录的重要转录因子.

萤火虫光照抗癌路

MC38-luc稳转细胞株的构建及在小鼠结肠癌肝转移模型中的应用

目的 筛选稳定表达荧光素酶基因(luc)的MC38细胞株,在免疫功能正常小鼠体内构建结肠癌肝转移模型. 方法 将带荧光素酶基因的质粒pGL4.50转染MC38小鼠结肠癌细胞,通过抗生素初筛和有限稀释亚克隆化,获取MC38-luc稳定细胞株;采用脾内注射MC38-luc细胞构建C57BL/6小鼠结肠癌肝转移模型,利用小动物活体成像系统,监测肿瘤在体内的生长及转移过程. 结果 获得了多株表达荧光素酶基因的单克隆细胞株(MC38-luc);高表达luc的27号细胞克隆在体内生长良好,可用于构建结肠癌肝转移模型. 结论 成功构建了MC38-luc稳定细胞株并将其应用于小鼠结肠癌肝转移模型.