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免疫层析法快速测定鸡肉和鸡蛋中磺胺类药物残留
目的:用免疫层析试纸条法快速测定鸡蛋及鸡肉中磺胺类药物残留.方法:采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用胶体金标记抗磺胺类药物母核结构单克隆抗体,磺胺类药物竞争物包被于硝酸纤维素膜,制成免疫层析快速检测试纸条.结果:该方法可以在15分钟内完成对磺胺类药物的半定量残留检测,检测磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺对甲氧嘧啶(SMD)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)的灵敏度为10 ng/ml,肉眼判定检测限为20 ng/ml,样品中回收率在85%～95.6%之间;检测磺胺嘧啶(SDZ)的灵敏度为10 ng/ml,肉眼判定检测限为40 ng/ml,样品中的回收率在44.8%～60.9%之间.用本方法与高效液相色谱法(HPLC)对来自动物试验的鸡肉和鸡蛋样品进行对比检测,具有较高的符合率.结论:该方法灵敏度高,检测快速、准确,无需特殊仪器设备,可作为磺胺类药物残留的快速筛选方法.
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犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条的制备
目的 制备犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用于标记抗细粒棘球绦虫EdiagA864单克隆抗体2D12制作金标垫,兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体标记检测线(T线),羊抗鼠Ig标记质控线(C线),制备胶体金试纸条,并进行特异性、敏感性、重复性及稳定性试验.用优化的胶体金检测试纸条对96份犬粪样品(36份参照阳性样,60份临床样品)进行检测.结果 制备的犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条与犬蛔虫阳性粪及犬贾第虫阳性粪样品均无交叉反应;粪便稀释度为1∶4时仍可检出正确结果;3次检测参照阳性样本均为阳性;于不同温度(室温、4及37℃)下保存不同时间(1、2、3、4个月)的试纸条均可检出正确结果.96份犬粪便样品中,36份参照阳性样品检出率为97.2％(35/36),60份临床样品均为阴性.结论 制备的试纸条具有良好的特异性及稳定性,可应用于临床样品检测及大规模流行病学调查.
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呋喃唑酮代谢物单克隆抗体及其新型免疫层析检测试纸条的制备
目的 制备呋喃唑酮代谢物AOZ单克隆抗体及其胶体金与荧光淬灭免疫层析试纸条.方法 将AOZ衍生成CPAOZ后,与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原CPAOZ-BSA,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,共5次,取小鼠睥细胞与SP2/0细胞融合,获得稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株.利用获得的抗CPAOZ单克隆抗体制备胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度及特异性进行验证.结果 制备的完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功.共获得3株能稳定分泌抗CPAOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中效价和特异性好的1株2H11针对CPAOZ的50％抑制质量浓度(IC50)为0.88 ppb.以该抗体制备的胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条的低检测限分别为7.5和0.062 5 ppb;两种试纸条与其他3种硝基呋喃类代谢物CPAMOZ、CPAHD、CPSEM均不存在交叉反应.结论 成功制备了抗CPAOZ单抗及其胶体金免疫层析和荧光淬灭免疫层析试纸条,两种试纸条均具有较高的灵敏度和较强的特异性,其中荧光淬灭免疫层析试纸条的灵敏度较胶体金免疫层析试纸条高约100倍,具有良好的应用前景.
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猪旋毛虫病胶体金检测试纸条的制备
目的 制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,并进行验证.方法 采用免疫胶体金技术标记猪旋毛虫排泄-分泌(Excretory-secretory,ES)抗原,在AE98NC膜上点上兔抗猪IgG作为检测带,抗ES抗原抗体作为对照带,将NC印膜、胶体金抗原玻璃棉、吸水纸和支持板用胶膜组成试纸条,进行敏感性、特异性和重复性验证,并与ELISA检测方法进行对比.结果 试纸条检测38头份猪旋毛虫阳性血清的敏感性为97.37%;检测33头份猪蛔虫阳性血清、26头份猪囊虫阳性血清、21头份猪细颈囊尾蚴阳性血清和98头份猪旋毛虫阴性血清的特异性为98.88%;重复性好;与EIASA检测方法的敏感性和特异性差异无统计学意义(P>0.05).结论 已制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,该试纸条敏感、特异、简便、快速,可用于猪旋毛虫病的检疫及流行病学调查.
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尿妊娠试验检测中的前带和后带现象及其临床意义
妊娠试剂条是用全标单抗HCG固定于硝酸纤维薄膜上,用胶体全免疫层析法快速诊断妊娠的新方法,是目前国际上公认的为理想的早早孕诊断方法,它具有特异性强,灵敏度高,操作简便,并与FSH、LH等无交叉反应等特点.近年来我院每年有上万人次使用此试纸条进行检测,它为计划生育和妊娠相关疾病的诊断和鉴别诊断提供了一种快速、准确的依据.在应用过程中,我们发现了HCG在妊娠生理低值和高峰期,均可出现尿妊娠试验阴性或可疑阳性的现象,值得引起注意.
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MA4210型尿液分析仪负压泵易损的原因分析及改进
1 负压泵工作特点及损坏原因MA4210尿液分析仪中负压泵作用是将放在试纸架中浸有尿样的试纸条上的残余尿液吸进废液瓶内.负压泵易损原因如下:
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基于LAMP技术建立解脲支原体基因试纸条检测方法
目的 建立一种灵敏度高、特异性强、检测速度快的方法检测解脲支原体.方法 基于环介导恒温扩增技术(LAMP),根据解脲支原体序列特征设计3对引物进行解脲支原体DNA切口酶核酸恒温扩增,扩增过程在一对引物中标记生物素,随着扩增的进行生物素直接引入扩增片段中,扩增结束后产物在密闭装置中进行免疫试纸条显色反应,根据显色卡的颜色判定结果的阴阳性.结果 该技术检测解脲支原体较实时荧光PCR技术灵敏度要高10倍以上,其它病原体检测均阴性该方法特异性与实时荧光PCR技术相当.结论 恒温扩增联合试纸条技术检测解脲支原体具有较高的敏感性和特异性,检测速度快,适合各医院开展.
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用重组rK39抗原试纸条快速诊断内脏利什曼病
[目的]评价以恰氏利氏曼原虫类kinesin基因中编码39个氨基酸的基因片段(rK39)为重组抗原,用于血清学诊断内脏利什曼病的价值.[方法]在新疆喀什地区对13例经脾检和骨髓穿刺阳性的内脏利什曼病患者,取一滴病人全血或血清滴在rK39抗原试纸条底部的吸收垫上,血清中蛋白随缓冲液向试纸条上部移动,其中相应特异抗体可与rK39抗原带结合,而产生阳性条带.同时,本文亦用相同阳性血清作了关于rK39抗原的Western印迹分析对照.[结果]ELISA分析显示病人血清抗体滴度在10-2～10-4,与所见到的rK39试纸条上的反应强度符合.Western印迹分析亦显示阳性血清可识别rK39蛋白条带.[结论]与传统诊断内脏利什曼病方法相比较,rK39试纸条更快速,特异,灵敏和低损伤性,可用于低发病率流行区的内脏利什曼病的诊断和筛选.
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血吸虫病快速诊断试纸条试剂盒稳定性研究
目的观察血吸虫病快速诊断试纸条(DDIA)试剂盒的稳定性.方法分别用保存于37℃、室温和4℃的DDIA试剂盒定期对阳性和阴性参考血清进行检测,根据其敏感性、特异性、灵敏度和精密性的结果对试剂盒的稳定性进行评价.结果DDIA试剂盒在37℃保存180 d,或在室温及4℃条件下保存360 d,其敏感性、特异性、灵敏度和精密性均保持不变.结论DDIA试剂盒在37℃下至少可保存180 d,在室温或4℃条件下至少可保存360d.
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快速胶体染料试纸条法检测弓形虫病IgM抗体的研究
目的研制一种检测弓形虫病IgM抗体的快速胶体染料试纸条法(DDIA),与国外进口试剂盒进行比较,以评价其临床应用价值.方法以本实验室筛选的胶体染料D-1标记兔抗人IgM,以此标记物与弓形虫病人血清中的抗弓形虫IgM抗体结合,用点有弓形虫可溶性抗原的硝酸纤维膜通过层析捕获染料标记兔抗人IgM与弓形虫IgM抗体的复合物,采用正交试验确定DDIA的佳检测条件;对25份弓形虫IgM抗体阳性血清和50份正常人血清进行检测;同时对弓形虫病流行病学筛查时的84份血清进行检测并与进口试剂盒的检测结果进行比较.结果 DDIA的佳检测条件为:弓形虫可溶性抗原的点膜浓度为1 mg/ml,血清用量为10 μl和兔抗人IgM胶体染料检测液作1∶20稀释时的检测带清晰且背景较浅;25份弓形虫IgM抗体阳性血清均为阳性,50份正常人血清有3份为IgM抗体阳性;DDIA与进口试剂盒的总符合率为97.6%,其中阳性和阴性符合率分别为100.0%(35/35)和95.9%(47/49).结论 DDIA简便快速,有较好的敏感性和特异性,同时与进口试剂盒有较高的符合率,表明该法具有较高的弓形虫病诊断价值.
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血吸虫病快速早期诊断试纸条的研究
目的探索一种血吸虫病快速早期诊断的试纸条检测方法.方法用标记胶体染料的可溶性尾蚴抗原(SCA)作为检测抗原,建立用于血吸虫病早期诊断的简便快速的可溶性尾蚴抗原胶体染料试纸条法(SCA-DDIA),并与可溶性虫卵抗原胶体染料试纸条法(SEA-DDIA)比较,检测感染家兔早期血清和急、慢性血吸虫病人血清中抗血吸虫抗体,并检测卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人和健康人血清.结果早期感染血吸虫家兔感染后首次检出阳性的平均时间为22 d,全部家兔检出阳性为30 d,均早于SEA-DDIA法.检测急、慢性血吸虫病人的敏感性分别为100.0%、93.3%,检测非血吸虫病流行区健康人的特异性为99.0%,与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、姜片虫病人的交叉反应率分别为26.3%、0、0.其敏感性、特异性和交叉反应率与SEA-DDIA法相似.结论 SCA胶体染料试纸条法是一种快速简便的血吸虫病早期诊断方法,并具有较高的敏感性和特异性.
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血吸虫病快速诊断试剂盒的优化及其应用
目的对血吸虫病胶体染料试纸条诊断试剂盒(DDIA Kit)的检测方法作进一步优化并对其应用价值进行评价.方法采用专用仪器定量制备DDIA试纸条,以定量的抗原和染料进行标记.分别对20、10、5 μl和2.5 μl的血清样本进行检测,将各组的敏感性、特异性和交叉反应性进行比较.再以确定的适血清样本量对一血吸虫病低度流行区的自然人群进行筛查并与粪检结果比较,评价其应用价值.结果用20 μl血清样本检测时,急性和慢性血吸虫病人的检出率均达到100%(24/24和48/48),健康人的假阳性率为8.0%(8/100),与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别为20.0%(4/20)和65.0%(13/20);用10 μl样本血清检测时,急性血吸虫病人检出率为100%(24/24),慢性血吸虫病人的检出率为97.9%(47/48),健康人的假阳性率为2.0%(2/100),与肝吸虫病人和肺吸虫病人的交叉反应率分别10.0%(2/20)和50.0%(10/20).对低流行区的筛查结果表明,DDIA与18例粪检阳性者的阳性符合率为94.4%(17/18),与445例粪检阴性者的阴性符合率为87.4%(389/445).结论定量制备的DDIA试剂盒在检测血清量为10 μl时有较高的敏感性和特异性,适用于低度流行区化疗对象的筛查.
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胶体染料试纸条与环卵沉淀试验现场应用效果比较
为进一步探讨胶体染料试纸条(DDIA)在病情监测中的现场应用价值,我们于2001年10月用DDIA与环卵沉淀试验(COPT)两种方法进行检测血吸虫病的效果比较.
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胶体染料试纸条在消灭血吸虫病地区现场应用效果评价
江西省德兴市位于赣东山区,全市人口 30万人,历史流行区人口18706人.该市于1 984年达消灭血吸虫病标准,之后转入巩固监测阶段,至今已连续1 5年未发现钉螺,24年未发现病人.为寻找敏感、快速、操作简便的监测方法,并评价当地血吸虫病监测效果,我们应用胶体染料试纸条在原流行区人群中开展血清学普查,结果报告如下.
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血吸虫病与其他寄生虫病网络精选Ⅵ(2004.09.01～2004.12.31)
1血吸虫病1.1试纸条测试阴极循环抗原诊断血吸虫病本研究评价了一种新的试纸条测试感染者尿液中的血吸虫抗原以诊断血吸虫病.试验的原理是在硝化纤维条上吸附胶状的针对血吸虫阴极循环抗原(CCA)的抗体,检测时将尿样与之反应.在坦桑尼亚Mwanza用该试纸条诊断一组高感染度的学校儿童,结果表明具有很高的敏感性,并且其结果与用测定虫卵数确定的感染度有关,也与用ELISA检测的阳极循环抗原与阴极循环抗原的结果相符.在血吸虫病非流行区学童中进行的研究表明该试纸条的特异性为90%.该试纸条诊断血吸虫病方法简便,不需要专门设备或特别的培训,且性能稳定,如果不受潮在常温下可保质3个月,为密封包装,便于运往需要应用的血吸虫病疫区.此外,该试验也易于规范化[1].
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H-FABP和心肌肌钙蛋白Ⅰ二联试纸条的制备
目的：制备能够同时检测心型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）和心肌肌钙蛋白Ⅰ（cTnⅠ）的二联试纸条，用于急性心肌梗死的早期和中期辅助诊断。方法：采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，并对其相关因素进行考察。将胶体金分别与H-FABP和cTnⅠ的单克隆抗体结合，优化胶体金与单克隆抗体结合的影响因素；将胶体金结合物喷于玻璃纤维膜上制成金标垫，再分别将另一亚型cTnⅠ和H-FABP单克隆抗体和羊抗鼠IgG包被检测线T1、T2和质控线C，后与吸水垫、经预处理的样品垫和底板组装成二联试纸条。结果：制备的二联试纸条检测H-FABP的灵敏度为10 ng／mL，检测cTnⅠ的灵敏度为3．0 ng／mL，10 min内可判定结果，层析速度均匀，没有背景颜色，两种蛋白之间无交叉反应，二联试纸条稳定性好。结论：成功制备灵敏度高、层析速度均匀和稳定性好的H-FABP／cTnⅠ二联胶体金免疫层析试纸条。
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尿胰蛋白酶原-2在急性胰腺炎诊断中的价值探讨
在正常生理条件下,小肠腔内的肠激酶分解胰蛋白酶原.急性胰腺炎时胰蛋白酶原在胰腺实质内活化,所产生的胰蛋白酶原激活降解产物通过胰腺渗入腹腔,进入血液循环再随尿排出.急性胰腺炎病人的尿胰蛋白酶原-2浓度显著升高,可用尿快速试纸条试验进行检测,其对急性胰腺炎的诊断价值评估如下.
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ALT快速全血试纸条在无偿献血中的应用
丙氨酸氨基转氨酸(ALT)作为肝功能检测的指标之一,除在肝炎的诊断及防治方面具有重要临床价值外,在血站系统对献血者的筛查也是一项重要指标[1].自1998年10月1日<中华人民共和国献血法>实施以后,卫生部在对献血者健康新标准中仍将其列为检测项目之一.为保证无偿献血持续、健康、稳定发展,针对目前组织的无偿献血情况,本血库于2002年9月起采用现场快速全血试纸条初筛ALT,可与HBsAg金标试纸法检测同步进行,同时作为无偿献血采血前的筛选法,大大降低了因ALT不合格所致的血液报废[2],现报告如下.
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血红蛋白试纸条在无偿献血者血红蛋白初筛中的应用
无偿献血者献血前必须检测血红蛋白,目前在采供血机构检测血红蛋白的方法主要有CuSO4比重法和血细胞计数仪法.采供血机构现在大多采用CuSO4比重法筛选献血者,该方法虽然操作简单,但存在的一定的误差[1～3].血球计数仪虽然测定结果准确,但携带不方便,不适合于流动献血车的工作模式,往往应用于单采成分献血者的筛选.笔者采用血红蛋白试纸条对献血者进行了血红蛋白分析,为献血者血液筛选提供了一种可选择的方法,现将结果报告如下.
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800例尿常规检验方法比较观察
尿分析仪因快速、简便、不受尿量多少的影响，在常规检查和健康人群普查中的应用越来越普及，给检验人员带来许多方便。但我们通过几年的使用也发现了一些问题，如尿液中存在的一些药物或理化物质对试纸条产生干扰，出现假阴性或假阳性的检验结果，而临检人员往往对尿分析仪检测阴性的标本不再做尿沉渣镜检，这样很可能把红细胞、白细胞、管型、结晶、滴虫等漏检，影响临床诊断，造成误诊。本文对800例尿分析仪检查阴性标本进行了尿沉渣镜检等检查分析，现将结果报告如下。
